A. 免疫學的檢測方法
免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。
B. 酶聯免疫檢測的方法及原理是什麼
（1）酶聯免疫吸附試驗（,ELISA）：是將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應在固相載體表面進行。可用間接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。
（2）夾心法（sandwichassay）:將已知的特異抗體包裝在固相載體（塑料板凹孔或紙片上），加入待檢標本，標本中的抗原即可與載體上的抗原結合，洗去未結合的材料後加入該抗原的酶標記抗體，洗去未結合的酶標抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度，可定量測定抗原。
間接法（indirecrELISA）常用於檢查特異抗體。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標本（可能含有相應抗體），再加入酶標抗Ig的抗全（即第二抗體），經加底物顯色後，根據顏色的光密度計算出標本中抗體的含量。
（3）BAS-ELISA：近年來對酶免設分析法的改進是使用生物素-親合素-過氧化物酶復合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統進一步提高檢測的敏感度。可用來檢測多種抗原抗體系統如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等。一個親合素（avidin）分子可以結合4個生物素分子（biotin）。結合非常穩定。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結合，而不影響後者的生物活性。一個抗體分子可偶聯90個生物素分子，通過生物素又可連接多個親合素。因此大提高檢測的敏感度。目前應用生物-酶標親合素系統（biotinavidinsystem-ELISA,BAS-ELISA），它是通過生物素標記抗體連接免疫反應系統，同時藉助生物素化酶或酶標親合素引入酶與底物反應系統。
C. 抗體檢測怎麼檢測（核酸、抗原、抗體檢測）
自 2020 年新冠疫情爆發以來，「核酸檢測」作為一項檢測是否感染的重要指標，開始反復出現在我們的生活中。2022 年 3 月 10 日，國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯防聯控機制綜合組發布通知，決定推進「抗原篩查、核酸診斷」的檢測模式，在核酸檢測基礎上增加抗原檢測作為補充。
抗原檢測是什麼？和其他的檢測手段有什麼不同？這篇文章，我們以新型冠狀病毒為例，講講常見的快速篩查手段，聊聊相關的原理以及適用范圍。
想要對一種疾病或是一種物質進行篩查，我們首先要弄清楚的就是「從何下手」的問題，其次是「如何檢測」，讓微觀世界的變化反映到我們眼前，幫助我們作出判斷。
我們面對的是病毒。根據大家耳熟能詳的中學生物課知識，病毒是一類由遺傳物質和蛋白質外殼組成的類生命體 。如果想對病毒的感染情況進行探測，就需要從它的組分下手。接下來的內容，希望大家帶著自己中學的生物知識閱讀。
以目前正在困擾我們的 SARS-CoV-2 為例。它屬於冠狀病毒科下，冠狀病毒亞科的乙型冠狀病毒屬，是已知的第七種能夠感染人類的冠狀病毒。所有的冠狀病毒都是具有 包膜 的 正義單鏈 RNA 病毒 ，也就是說，它們的遺傳物質是一條單獨的 RNA 鏈，並且這條 RNA 鏈可以直接作為 mRNA（信使 RNA）參與翻譯，指導蛋白質的合成。
編號為NPRC 2020.00002的毒種，圖片由國家病原微生物資源庫（中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所）提供。
我們現在的目的是檢測標本中是否存在這種病毒，無論是檢測它本身，還是檢測病毒帶來的產物，能夠下手的方向也就是兩種：蛋白質外殼（包膜）、遺傳物質。
順著這個邏輯，那最顯而易見的方法就是檢查它「能不能看到」，但病毒本體小得很，SARS-CoV-2 的直徑在 80-120 nm，要想每個標本都拿電鏡過一遍是不現實的，人力物力和財力都撐不住。那麼更經濟實惠的方法，就是通過某些措施，讓 病毒的組分 ，或是因為病毒而出現的 某些特殊物質 積攢到一定數量級後發光、變色，出現 宏觀表現 。
那麼我們的問題就轉化成了，選擇一種可以觀察到宏觀尺度變化的方法，和病毒的組分、病毒引發的某種物質產生關聯。我們能選擇的物質也擺在檯面上：病毒的遺傳物質，在這里是它的 RNA；病毒的包膜，也就是蛋白質外殼；以及，如果你還記得一些基礎的生物知識，人體的免疫系統會在感染病毒之後產生抗體以抵抗入侵，它也是不錯的選材。
我們目前採用的幾種檢測方式，也就從這些物質（以及它們的相關物質）脫胎而來，分別為針對遺傳物質的核酸檢測，針對包膜的抗原檢測，以及針對抗體的血清抗體檢測。
作為病毒的遺傳物質，核酸序列載寫了能夠鑒定病毒為某一特定種的基因特徵，因此核酸陽性，也就意味著病毒在體內存在過。
我們目前進行的「核酸檢測」其實分為兩個部分。平常我們進行的「捅鼻子」「捅嗓子」取樣和後續的定性是第一部分。在取得標本之後，因為病毒量太少，樣本會在實驗室中進行一定次數的擴增，並根據熒光反應結果來判定陽性陰性。
第二部分，確定為陽性的樣本，還需要通過基因測序，確定樣本病毒的分型，以便溯源。這一步已經不屬於日常篩查的范疇，但在流行病學調查上具有重大意義，如果有興趣了解，可以參看 Wikipedia 簡要了解。
我們平常參與的作為 篩查 工具的核酸檢測，指的就是採集到定性的第一部分。
在感染了 SARS-CoV-2 之後，咽拭子、痰、下呼吸道分泌物、血液等標本中均可發現病毒核酸。不同部分標本核酸檢測的陽性率有一定差異，隨著病程進展，各個部位的檢出率也會發生變化。
我們習慣稱呼的「鼻拭子」與「咽拭子」，其實都是採集咽腔後壁的分泌物與組織，前者採集鼻咽，後者採集口咽。也有採用其他標準的，比如唾液等亦可作為檢測標本，本質上也是不同地區規定有差異
鼻（咽）拭子與（口）咽拭子已經是綜合了陽性率與便利程度的考量。糞便和尿液等其實也可以作為標本採集的對象。而且根據一項對 31 例患者的研究，肛拭子的准確率要高於鼻咽與口咽采樣，尤其病程後期，肛拭子確診病例的鼻拭子陽性率不到 30%。 4 但顯然，由於操作的限制，它無法作為早期篩查的首選手段。
接下來的工作，就是從獲取的那一點點標本中提取核酸。由於樣本中病毒的數量級很小，不足以拿來分析，還需要將其擴增並標記。需要用到的同樣是高中學過的知識：聚合酶鏈式反應（PCR）——這一步看起來麻煩，但由於它的原理和工序已經研究成熟，實際操作中只需要加好試劑送機器，整個核酸檢測的過程里最麻煩的還是讓待測者安安分分弄來標本（笑）。
各地疾控機構或檢測中心會采購合適的核酸 提取試劑盒 與核酸 檢測試劑盒 。提取試劑盒負責將 RNA 從混雜的樣本（細胞碎屑、分泌物、灰塵等雜質）中提取出來，常見的有磁珠法、離心柱法和釋放劑法，不同提取方法可能對後期檢測的准確度略有影響 。之後，提純出的 RNA 就會移交給檢測試劑盒（也有一些試劑盒將兩者合一），進行之後的工序。
檢測試劑盒帶著樣本在機器中進行的過程，就是這個檢測中最主要的反應：RT-qPCR（實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應）。
接下來需要你撿起高中生物的知識。一般的 PCR 反應有以下幾步：
加熱：讓雙鏈 DNA 解旋變形，成為兩條單鏈； 退火：讓混合的單鏈 DNA 與根據需要復制的片段而設計好的引物結合； 延伸：調整溫度，讓 DNA 聚合酶順著引物開始工作，復制出新鏈，形成新的雙鏈。在對病毒的探測中，我們要做的工作也無非上面幾步，只是需要多出兩樣東西：
在第一次反應之前，使用 逆轉錄酶 （依賴 RNA 的 DNA 聚合酶），合成病毒單鏈 RNA 的互補鏈，組合成 cDNA ； 在退火與延伸的階段，除了引物和所需的酶外，還需要 TaqMan 探針 。你可以把 TaqMan 探針這樣理解：它的主體部分是一段寡核苷酸鏈，被設計成能和一小部分需要復制的基因片段配對成雙鏈的樣子；它一端接了一個熒光分子，另一端接了一個開關（淬滅基團），兩者和探針相連時，熒光就會被淬滅基團壓制，探測不到。退火時，這個探針會和引物一起結合在要復制的單鏈片段上。在延伸的過程中，DNA 聚合酶會把擋在面前的障礙物切碎，其中就包括這段探針，淬滅基團和熒光分子就這樣分離，熒光就表現出來。
隨著循環數的增多，擴增的 DNA 片段和熒光也越來越多。對比每個循環的熒光亮度和前若干次循環的基準亮度，我們就能得出目前的 DNA 片段量，也可以直接用循環數和熒光亮度做定性的判斷。
那麼具體復制哪一部分呢？既然要探測病毒，那我們就選取最有代表性的核酸片段。現行的標准中，ORF 基因與 N 基因是常用的檢測位點。
檢測試劑盒負責的就是將提取出的 RNA（樣本）投入後，根據試劑盒上的程序說明，設定對應的 PCR 溫度與時長，由機器控制完成擴增過程，在固定的環節收集熒光信號，記錄對應的循環數（Ct 值）。判斷陰性陽性 / 是否還具有傳染力的標准，就是看熒光信號達到閾值時，目前循環數是多少。根據目前現行的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第九版）》，解除隔離管理的標准為 Ct 值 ≥ 35 。和此前通行的 ≥40 標准相比，出院與解除隔離的時間會大大縮短 。
經 RT-PCR 的核酸檢測到現在都是確診的金標准，因為它在方法學的角度看來，（理論上）可以做到 100% 准確。但核酸檢測耗時長、對環境與操作人員要求高，在環境條件達不到標准、物資與儀器不齊全等情況下，大批量的核酸檢測會帶來巨大人力與財力消耗。
在本次疫情中，我們採用的免疫測定包括了快速抗原檢測與抗體檢測，它以 抗原-抗體反應 為基本原理，旨在通過抗原與抗體快速的中和效應，以較少的時間成本探測樣本中是否存在待測物。兩者都屬於免疫層析法的范疇。
以盒裝方式出現、可以自行操作的抗原檢測就很適合作為物資不足、自我測定等情況下的補充。
核酸檢測檢查的是病毒的（標志性）遺傳物質，是病毒的「內里」。那麼（快速）抗原檢測檢查的就是病毒的「外在」，直接檢查完整的病毒顆粒。目前通過審批的抗原檢測試劑盒包括三種類型：膠體金法、乳膠法、熒光免疫層析法。三者內在原理一致。但其中熒光免疫層析法試劑盒仍然需要專用的檢測儀或紫外線手電筒，不適合家庭自測；膠體金法和乳膠法則都是將檢查結果轉化成肉眼可見的條帶，差別在於用於標記上色的物質不同。
當然，抗原檢測自然有它的劣勢在，它的 假陰性率 （是陽性但顯示陰性）要更高，可能導致漏檢錯檢。但放在一杯茶就能出結果的時間優勢面前，准確性上的差距在某些特定情況下可以暫時讓步。
圖源：How the SARS-CoV-2 EUA Antigen Tests Work | ASM.org
和核酸檢測相比，抗原檢測增加了「鼻拭子」這一采樣途徑，降低了個人自測的難度。拭子上的樣本在緩沖液中洗脫，取液體滴加在加樣孔後，液體會因為毛細作用，帶著潛在的抗原，經過一片預載了抗體的區域（結合墊，conjugate pad）。
這片區域上的抗體，是抗目標抗原（SARS-CoV-2）的單克隆抗體，每一個抗體分子都和特別的標記結合，它們與樣本中的抗原發生反應，形成抗原-抗體復合物，並隨著毛細作用向下一條帶流去。
緊接著經過的是檢測線（T 線，test line），在檢測線上附著的同樣是抗目標抗原的單克隆抗體，你可以理解成這里的東西和結合墊上的一樣，只是沒帶標記。此時，如果受測者已經感染了 SARS-CoV-2，他留在樣本中的抗原形成的抗原-抗體復合物，會在此處與固定在線上的抗體再次結合。在這里，這些帶著標記的復合物不斷沉積，最終會顯示出一條或深或淺的條帶。條帶的顏色來源，就是之前結合墊上的抗體分子附著的標記，在膠體金法中是膠體狀態的金顆粒，在乳膠法中是上色的乳膠滴，在熒光法中是熒光分子。所以你在使用這類試紙時，會發現剛剛加樣結束，液體剛開始擴散的時候，擴散的最前端會有一點點很淡的顏色不斷推移，這就是還沒有固定沉積的標記的顏色。
接下來，液體繼續擴散，經過質控線（C 線，control line），在質控線上附著的是另一種抗體——『抗「抗目標抗原的單克隆 抗體 」 的 單克隆 抗體 』，簡稱「 二抗 」。這種新的抗體是讓上一種抗體在另一種動物的免疫系統中反應得來的，比如結合墊的抗體來自兔，那這里的抗體就來自羊，是羊抗兔的單克隆抗體。也就是說， 二抗的抗原是 之前在 結合墊上的抗體 。這條線就是為了檢測液體有沒有正常擴散、結合墊上的抗體有沒有失效等等而存在的。此時，液體中剩餘的大量來自結合墊的抗體就會作為抗原，與質控線上的二抗發生抗原抗體反應，形成復合物，顯出一條明顯的條帶。
由於結合墊上的抗體非常充裕，這條質控線條帶會出現得非常快、非常顯色，而檢測線由於抗原（病毒）數量不一定，顯色速度會有差別，但一般在 15 分鍾內就足夠判斷結果。所以不要看 C 線很明顯，T 線隱隱約約就覺得「沒事了」， T 線不管深淺，只要有，就是陽性 。
具體操作方面，可以參考醫政醫管局發布的 教學視頻。目前國家也在逐步推廣抗原自測試劑盒，在一定程度上可以減輕未來醫療與街道的壓力。
除了前兩種檢測手段外，還有一種使用不太多，但同樣重要的檢測方法，就是同屬免疫測定方法的「血清抗體檢測」。
抗體檢測採用的試劑盒與抗原檢測非常接近，但標本的限制更大——由於檢測的對象變成了抗體，標本就必須是明確有抗體存在的血液（或血漿、血清）。而且人體在初次感染病毒後，並不會第一時間內產生抗體。抗體能夠明確達到被檢測的數量級，一般是在初次感染（或接種疫苗）的一到兩周之後。這些條件限制了抗體檢測不能作為確診性質的檢查。目前，血清抗體檢測僅作為一定情況下檢查疫苗是否生效，或查驗受測者近期是否感染過新冠病毒的方法。
在人體中有五種抗體，分別是 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM。IgA 主要負責黏膜免疫。IgD 與免疫反應激活有關。IgE 抵禦寄生蟲，同時也參與過敏反應。剩下的 IgG 與 IgM 就是對抗病原體的過程中，免疫系統派出的主力軍。
SARS-CoV-2 作為病原體，人體經刺激主要分泌的就是 IgG 與 IgM 兩種。現有的抗體檢測試劑盒，主要也是針對人體對 SARS-CoV-2 的 N 蛋白（核衣殼蛋白）或 S 蛋白（刺突蛋白）產生的 IgG 與 IgM。
抗體試劑盒的檢測裝置外觀和抗原檢測別無二致。二者的差別就是上文中提到的結合墊、檢測線、質控線上附著的物質。
這次，加樣孔中滴入的樣本可能有對 SARS-CoV-2 的抗體。因此，結合墊上就應當是帶了標記物的抗原——當然不可能放活病毒上來。一般這里使用的都是設計檢測的抗原蛋白，比如前文提到的 N 蛋白或 S 蛋白，或是重組病毒，無論是哪種，它都必須包含受體結合域（RBD）作為抗體結合的靶點。在檢測線上，附著的就是抗 IgM 或抗 IgG 抗體，以捕獲結合了抗原的抗體蛋白。最後，質控線上附著抗原的特異性抗體，捕獲剩餘的游離抗原。
總的說來，三種檢測方式針對的是不同的需求，互有優勢，互相補充。核酸檢測作為金標准，直接查驗病毒的 RNA，負責看被檢者帶不帶病毒；抗原檢測作為快速檢測方法，查的是病毒的蛋白質，但准確度不如核酸檢測，對傳染力強的感染者更有效；抗體檢測查的是疫苗有沒有生效、人近期有沒有感染過病毒。
近期，新冠疫情在各地卷土重來。Omicron 變種與此前流行的 Delta 變種相比，雖然病死率與重症率明顯下降，但潛伏期更短，病毒復制速度更快，傳染力明顯增強。希望大家在這樣的環境中保持健康。
D. 臨床免疫檢驗常用的分析技術
一、免疫標記技術：2種分類
1.(1) 免疫組化技術(immunohistochemical technique): 用於組織切片或其他標本中抗原抗體的定位(2)免疫測定(immunoassay): 用於液體標本中抗原或抗體的測定.
2.(1) 免疫熒光技術 (2) 酶免疫技術 (3) 放射免疫技術(4) 金標技術(5)化學發光技術
酶免疫技術—固相酶免疫技術―酶聯免疫吸附測定(ELISA)
ELISA方法類型與操作步驟
雙抗體夾心法：檢測抗原最常用的方法
原理(操作步驟)： (1) 特異性抗體包被載體形成固相抗體. (2) 洗去未結合的抗體和雜質. (3) 加入待測樣品，使其中相應抗原和固相抗體呈特異性結合成復合物. (4) 再洗滌除去未結合的物質.(5) 加酶標抗體，使之與固相上的抗原呈特異性結合.(6) 經充分洗滌後除去未結合的游離酶標記抗體.(7) 加入相應酶的底物，固相化的酶催化底物變成有色產物，顏色反應的程
度與固相上抗原的量有關.
適用范圍：檢測抗原的最常用方法 ,用此方法檢測的抗原，應至少有2個以上結合位點，故不能用以測定半抗原物質。
2、競爭法：(可用於測定抗原或抗體)
原理(操作步驟)：以測定抗原為例(1) 將特異性抗體包被載體，使形成固相抗體,(2) 洗去雜質，待測孔中同時加待測標本和酶標記抗原，使之與固相抗體反應。如待測標本中含有抗原，則與酶標記抗原共同競爭結合固相抗體。待測標本中抗原量越多，酶標記抗原結合量越少(3) 洗滌除去游離酶標記物後，加底物顯色(4) 結果是不含受檢抗原的對照孔，其結合的酶標記抗原最多，顯色最深。對照孔與待測孔顏色深度之差代表受檢標本中的抗原量。待測孔越淡, 標本中抗原量越多。
3、間接法：(可檢測各種相應抗體)
原理(操作步驟)：(1) 將特異性抗原包被載體，使形成固相抗原; (2) 洗去未結合的物質,加入待測樣品，使其中待測的特異性抗體與固相抗原相結合形成固相抗原抗原復合物;(4)再經洗滌後，固相上僅留下特異性抗體; (5) 加酶標抗人球蛋白(酶標抗抗體)，使與固相復合物中抗體結合，從而使待測抗體間接標記上酶;(6) 洗滌除去多餘的酶標抗體，固相結合酶量就代表待測抗體的`量; (7) 最後加入底物顯色，其顏色深淺可代表待測抗體量。
免疫熒光法---抗核抗體的檢測
二、沉澱反應
可溶性抗原與相應抗體特異性結合所出現的反應。反應分為兩個階段:(1) 抗原抗體特異性結合;(2) 形成可見的免疫復合物。
三、凝集反應
細菌和紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結合後，出現肉眼可見的凝集(agglutination)現象。
凝集反應的發生分為兩個階段：(1)抗原抗體的特異結合;(2)出現可見的顆粒凝聚。