檢測細胞增殖的方法

A. MTS法測定細胞增殖的原理該方法與MTT法有何不同

MTS法原理：被測物質溶液的顏色或加入顯色劑後生成的有色溶液的顏色，顏色深度和物質含量成正比，則根據光被有色溶液吸收的強度，即可測定溶液中物質的含量。

跟MTT法區別如下：

一、指代不同

1、MTT法：利用有色物質對特定波長光的吸收特性來進行定性分析的一種方法。

2、MTS法：是一種檢測細胞存活和生長的方法。

二、原理不同

1、MTT法：為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢（Formazan）並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。

2、MTS法：以生成有色化合物的顯色反應為基礎，比色分析對顯色反應的基本要求是：反應應具有較高的靈敏度和選擇性，反應生成的有色化合物的組成恆定且較穩定，它和顯色劑的顏色差別較大。選擇適當的顯色反應和控制好適宜的反應條件，是比色分析的關鍵。

三、用途不同

1、MTT法：方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。

2、MTS法：採用具有分光系統(單色器)及檢測器的分光光度計，使測定結果准確、省時，選擇性好。

B. 檢測細胞增殖的種類以及方法步驟

主要有四種，方法步驟如下

一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）滲入法
胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的鹼基，也是DNA合成的必需物質。用同位素3H標記TdR即3H-TdR作為DNA合成的前體能摻入DAN合成代謝過程，通過測定細胞的放射性強度，可以反映細胞DAN的代謝及細胞增殖情況。但是具有放射性。
二、MTT檢測法
MTT檢測法主要反映細胞的能量代謝，是檢測細胞增殖活力的一種簡便准確的方法，其原理是在活細胞生長和增殖過程中，線粒體內的脫氫酶可將黃色的MTT分解成蘭紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少與細胞的數量和細胞的活力成正比
三、羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（CFSE）檢測法
羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（CFSE）是一種可穿透細胞膜的熒光染料，具有與細胞特異性結合的琥珀醯亞胺脂基團和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團，使C E成為一種良好的細胞標記物。CFSE進入細胞後可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上。當細胞分裂時，CFsE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半。這樣，在一個增殖的細胞群中，各連續代細胞的熒光強度呈對遞減，利用流式細胞儀在488nm激發光和熒光檢測通道可對其進行分析。
四、Br檢測法
Br中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷，為胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細胞培養加入，而後利用抗Br單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。

C. 植物細胞增殖用什麼方法檢測

植物細胞可進行：有絲分裂、無絲分裂和減數分裂植物的大多數體細胞形成與有絲分裂有關無絲分裂在低等植物中普遍存在,在高等植物中也常見.高等植物營養豐富的部位,無絲分裂很普遍.如胚乳細胞（胚乳發育過程愈傷組織形成）、表皮細胞、根冠,總之薄壁細胞佔大多數；減數分裂在形成配子的過程中發生

D. 二苯乙烯苷的細胞增殖實驗能用cck檢測嗎

二苯乙烯苷的細胞增殖實驗能用cck檢測
細胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。其中EdU檢測方法是最新的細胞增殖檢測方法。
EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替T滲入正在復制的DNA分子，通過基於EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應檢測DNA復制活性，通過檢測EdU標記便能准確地反映細胞的增殖情況。與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法更快速、更靈敏、更准確。EdU檢測染料只有BrdU抗體大小的1/500，在細胞內很容易擴散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等）即可有效檢測，可有效避免樣品損傷，在細胞和組織水平能更准確地反映細胞增殖等現象。

E. BrdU檢測細胞增殖的方法有哪些

細胞增殖的檢驗方法：BrdU標記法

1、細胞以1.5×105 /ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處於G0 期。

2、終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。

3、棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。

4、甲醇/醋酸固定10min。

5、經固定的玻片空氣乾燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min滅活內源性氧化酶。

6、5％正常兔血清封閉。

7、甲醯胺100℃，5min變性核酸。

8、冰浴冷卻後PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。

9、按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。

F. MTS法測定細胞增殖的原理該方法與MTT法有何不同

MTS檢測方法是檢測細胞增殖、細胞毒性的常用方法。具體方法：
細胞生長檢測：MTS檢測法
1．培養IL-2依賴細胞株CTLL-2細胞或HT-2細胞（檢測IL-2），或者IL-3依賴細胞株FDC-P1細胞或FL5.12細胞（檢測IL-3）到對數生長期。
2．取96孔細胞培養板，每孔加0.1ml含1×104～2×104上述細胞之一的DMEM培養液（加10％小牛血清）。
3．每孔加0.1ml系列稀釋的待測細胞因子（IL-2或IL-3）樣品或細胞因子標准品，在37℃
5％
CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養24小時。
4．每孔加20μl
MTS/PMS混合液，繼續培養3～4小時顯色。
5．檢測前搖晃培養板10秒鍾，混勻顏色。在酶聯檢測儀上，波長570nm（或490nm，或570nm和690nm）處檢測各孔的光吸收值（OD）。用樣品稀釋度對OD值（OD570、OD490或OD570/OD690）繪制劑量-反應曲線，根據標准品曲線計算樣品中細胞因子的量。

G. 怎樣檢測細胞的生長，存活及增殖

BrdU標記法
1．細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％ FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處於G0期。
2．終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。
3．棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．經固定的玻片空氣乾燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封閉。
7．甲醯胺100℃，5min變性核酸。
8．冰浴冷卻後PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9．按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。
結晶紫法
1．體外細胞培養結束後，去培養液，加入11％的戊二醛固定，置於振盪器上搖20min。
2．固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。
3．置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。
4．加入0.1％的結晶紫液對細胞染色，振搖30min。
5．用蒸餾水洗滌，至多餘的結晶紫液沖洗干凈。
6．置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。
7．加入10％的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。
8．1h後在酶標儀上測定光吸收度，波長595nm。
酸性磷酸酶法
1．96孔細胞培養板中培養細胞，去培養液。用0.01mol/L PBS洗滌1次（如為懸浮細胞則用離心洗滌）。
2．去洗滌液後加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氫氧化鈉10μl/孔。
5．在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度，將細胞培養板其中不含細胞，同樣處理過的一孔作為空白對照，所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標准對照，以細胞數為X軸，光吸收度為Y軸，可作直線回歸，可推算出每孔中的細胞。

H. 成骨細胞增殖分化的檢測方法有哪些

成骨細胞增殖分化的檢測方法有哪些
(1)骨髓克隆形成單位(成纖維細胞集落形成單位，CFU-F)；
(2)骨軟骨祖細胞，可分化成骨祖細胞和前軟骨細胞譜系，常位於骨髓腔中，有很強的自身增殖能力；
(3)前成骨細胞，即骨祖細胞，能定向分化成成骨細胞，具有合成和增殖能力[1，2]。成骨細胞由多能的間質幹細胞在體內的各種調控因素的調節下發展而來，調控因素主要有BMP-2，BMP-2能誘導基質細胞向成骨細胞分化，具體就是誘導間質幹細胞分化形成骨祖細胞進而形成前成骨細胞。

I. 檢測細胞增殖的方法有哪些

一、MTT比色：
MTT比色是一種目前被廣泛採用的檢測細胞生長和存活的方法，其原理是外源性MTT（四唑鹽）可被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成難溶的藍紫色結晶物並沉澱在細胞中，而死細胞無此功能，DMSO（二甲基亞碸）能溶解細胞中的紫色結晶物，用酶聯檢測儀在490nm波長處檢測其光密度值，可間接反映活細胞數量。在一定范圍內，MTT結晶物形成的量與細胞數成正比，此方法已廣泛用於檢測細胞活力、觀察細胞生長等方面，具有靈敏度高、重復性好、操作簡便、經濟、快速、易自動化、無放射性污染等特點，與細胞計數有良好的相關性。
二、rdU標記法
1．細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％ FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處於G0期。
2．終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。
3．棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．經固定的玻片空氣乾燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封閉。
7．甲醯胺100℃，5min變性核酸。
8．冰浴冷卻後PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9．按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。
三、結晶紫法
1．體外細胞培養結束後，去培養液，加入11％的戊二醛固定，置於振盪器上搖20min。
2．固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。
3．置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。
4．加入0.1％的結晶紫液對細胞染色，振搖30min。
5．用蒸餾水洗滌，至多餘的結晶紫液沖洗干凈。
6．置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。
7．加入10％的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。
8．1h後在酶標儀上測定光吸收度，波長595nm。
四、酸性磷酸酶法
1．96孔細胞培養板中培養細胞，去培養液。用0.01mol/L PBS洗滌1次（如為懸浮細胞則用離心洗滌）。
2．去洗滌液後加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氫氧化鈉10μl/孔。
5．在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度，將細胞培養板其中不含細胞，同樣處理過的一孔作為空白對照，所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標准對照，以細胞數為X軸，光吸收度為Y軸，可作直線回歸，可推算出每孔中的細胞。

J. 檢測細胞增殖的實驗方法的選擇

1、靈敏度高，增殖是DNA才復制增多，檢測DNA含量變化最可靠。