❶ 免疫學的檢測方法
免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。
❷ 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些
1、快速測試片技術法
快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體,將特定的培養基和顯色物質附著在上面,通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。
細菌總數檢測紙片的研製始於 20 世紀 80 年代,其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm 為載體的測試片已開始被廣泛應用。
2、生物電化學方法
生物電化學方法是指通過電極測定微生物產生或消耗的電荷,從而提供分析信號的方法。微生物在滋生代謝過程中,培養基的電化學性質如電流、電位、電阻和電導等會發生變化,所以可以通過檢測分析這些電化學參量的變化來實現對微生物的快速測定。
常見的有:阻抗分析法、電位分析法、電流分析法等。生物電化學方法具有測量快速、直觀、操作簡單、測量設備成本低和信號的可控性等特點。
3、微菌落技術
微菌落是指細菌生長繁殖早期在固相載體上所形成的只能藉助於顯微鏡觀察的微小菌落。微菌落技術具有快速、經濟、實用的特點,其研究始於 20 世紀50年代,定量測定技術從 20 世紀 70 年代開始,國外已有報道將該法應用於水、食品中細菌總數的快速檢測。
4、氣相色譜法
氣相色譜應用到微生物的檢測中,主要是依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物各異,利用上述色譜檢測可直接分析各種體液中的細菌代謝產物、細胞中的脂肪酸、蛋白質、氨基酸、多肽、多糖等,以確定病原微生物的特異性化學標志成分,協助病原診斷和檢測。
5、高效液相色譜法
利用高效液相色譜檢測可分析各種體液中的細菌代謝產物、病原微生物等,以確定病原微生物的特異性化學標志成分,協助病原診斷和檢測。
❸ 硫酸苯酚法與苯酚硫酸法測定多糖有什麼區別
多糖類化合物是許多中草葯的有效成分之一,但多糖多無法直接測定,苯酚�硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下,水解成單糖分子,並迅速脫水生成糖醛衍生物,然後與苯酚形成有色化合物,再用分光光度計進行檢測。苯酚�硫酸法是測定多糖含量的常用方法之一,具有簡便、快速、准確、靈敏的特點,在實驗中發現,該法中苯酚和濃硫酸的比例十分關鍵,須控制為1�5,同時應保證溶液中硫酸的濃度,故文中多糖溶液移取體積為1.00 mL。另外,硫酸的加入方法不同對顯色結果也有影響,故在操作過程中盡量由同一試驗人員進行操作。
硫酸苯酚法測定雲芝多糖含量的效果
摘要 雲芝多糖成分復雜,測定比較困難。試驗表明,硫酸苯酚法是測定雲芝多糖含量的一種理想方法。其具有快速、穩定、靈敏度高和重現性好等優點。
關鍵詞 雲芝多糖 含量測定 硫酸苯酚法
雲芝屬擔子菌亞門多孔菌科雲芝菌屬的真菌。從雲芝菌子實體中提取的雲芝多糖具有抗腫瘤、抗乙肝病毒、提高人體免疫功能等作用,同時對人體無毒副作用,長期食用無不良反應。因此,除可用作治療乙肝和癌症病人在放療、化療過程中理想的輔助葯物外,還可作為延緩老年性疾病發生的保健食品。目前,人們多從雲芝菌子實體中提取雲芝多糖,加工成各類制劑。衡量此類葯品質量的標准主要是看其雲芝多糖含量的多寡。鑒於雲芝多糖成分較為復雜,目前國內尚無理想的測定其含量的方法,特此用硫酸苯酚法對雲芝多糖含量進行了測定試驗。1 試驗材料1.1 儀器UV-756分光光度計(上海第三分析儀器廠產品)。1.2 試劑雲芝多糖樣品由上海萊福多糖製品有限公司提供,其它化學試劑均為國產分析純。雲芝多糖純品的制備詳見文獻2。2 測定方法2.1 葡萄糖標准溶液的配製精確稱取105℃乾燥恆重的葡萄糖200mg,置於100ml容量瓶中,定容,搖勻。取1ml溶液於50ml容量瓶中定容,搖勻(含葡萄糖40mg/L),備用。分別吸取葡萄糖標准溶液0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6,1.8ml,用蒸餾水補充至2.0ml,加入6%的苯酚溶液1ml,靜止10分鍾,搖勻,室溫下放置20分鍾,於490nm處測定吸光度(以2.0ml蒸餾水作為空白對照),求得回歸方程為:A=-0.06161+3.4190C1 (r=0.9990)其中,A表示吸光度,C1為葡萄糖濃度。2.2 換算因子的測定精確稱取雲芝多糖純品150mg,配成適當濃度,依照標准曲線方法測定吸光度。根據回歸方程計算換算因子f=W/(C2×D),其中f為換算因子,W為樣品重量,C2為供試液相當於葡萄糖濃度(g/L),D為稀釋倍數,測得f=1.38。2.3 待測雲芝多糖溶液制備精確稱取雲芝多糖樣品0.3000g,加80℃熱溶解,定容100ml(可適當再稀釋),搖勻,備用。2.4 雲芝多糖含量測定吸待測樣溶液2.0ml,加入6%苯酚1ml,靜置10分鍾,搖勻,室溫下放置20分鍾,在490nm處測吸光度。按下式計算多糖含量。雲芝多糖含量(%)=C2×D×f/W×100%2.5 雲芝多糖吸收曲線確定用葡萄糖標准溶液和雲芝多糖純品按測定方法分別顯色,全波長掃描。掃描圖譜見附圖。附圖 葡萄糖和雲芝多糖的掃描圖譜 由附圖看出,雲芝多糖經硫酸苯酚法顯色後,幾個秋蘿卜品種(系)的農藝性狀比較李先芳(鄭州牧業工程高等專科學校,鄭州450008)劉艷波(鄭州市蔬菜研究所) 1996年我們在鄭州市蔬菜研究所進行了新育秋蘿卜品種(系)比較試驗,旨在為河南省蘿卜區域試驗和示範推廣提供優良品種。1 材料與方法供試秋蘿卜品種(系)6個,詳見表1試驗採用隨機區組排列,3次重復。株行距26cm×33cm,小區面積4.32m2,每小區27株,周圍設保護行。田間管理方法同大田生產。1996年8月14日播種,播後觀察記載各品種(系)生育期、植物學性狀、病害等,收獲時分區計產,折算畝產。2 結果與分析2.1 各品種(系)的生育時期6個品種(系)均8月18日出苗,9月16日定苗,11月10日收獲,生育期86天。其中,90-12、90-13、豐光一代、大青皮破肚和定樁比德日2號、國光一號早1天(表1)。2.2 各品種(系)植株性狀從表2看出,除90-13為板葉外,其餘均為花葉,但大青皮、德日2號、國光一號雜板葉較多,一般於苗期分苗時將其拔除。豐光一代株形較大,其次為德日2號;90-13和90-12株形較1999-03-20收稿。其最大吸收峰為490nm,與葡萄糖基本相同。2.6 顯色時間以雲芝多糖純品為樣品,在20℃下顯色不同時間,分別測定吸光度,結果見表1。表1 雲芝多糖顯色不同時間吸光度顯色時間(min)吸光度10.51550.515100.515150.516200.516250.516300.517350.517400.517顯色時間(min)吸光度450.518500.519550.519600.519650.521700.522750.524800.524850.525顯色時間(min)吸光度900.526950.000.5271050.5271100.5271150.5281200.5291250.5301300.530 從表1可以看出,顯色時間在30分鍾內吸光度非常穩定。2.7 樣品回收率測定精確稱量雲芝多糖樣品0.2000g,加入一定量的雲芝多糖純品,按測定步驟顯色,測吸光值,計算其含量,並計算出樣品回收率為101.8%,說明該測定方法相當准確。3 方法精確度測定分別取稱0.3000g雲芝多糖樣品5份,用本法分別測定其雲芝多糖含量,結果見表2。經計算其RSD=1.12%,說明本法測定精確度較高。表2 雲芝多糖含量測定方法精確度測定結果項目樣品號12345雲芝多糖含量(%)51.2947.4448.8049.7248.724 小結研究結果表明,用硫酸苯酚法測定雲芝多糖含量,快速、穩定、靈敏度高、重現性好。而其它測定方法對雲芝多糖含量的測定效果還有待進一步研究
❹ 糖和苷類化合物常用的化學檢識的方法是什麼其現象和原理各是什麼
檢識方法:molisch反應
試劑濃硫酸、α- 萘酚
原理:糖和苷類在濃硫酸作用下形成的糠醛及其衍生物,與α- 萘酚作用形成紅紫色復合物。由於在糖溶液與濃硫酸兩液面間出現紅紫色的環,因此又稱紫環反應。
現象:紫色環
苷類又稱配糖體。是糖或糖的衍生物與另一類非糖物質通過糖的端基碳原子連線而成的一類化合物。
苷的共性在糖的部分,而苷元部分幾乎包羅各種型別的天然成分,故其性質各異。苷大多數是無色無臭的結晶或粉末,味苦或無味;多能溶於水與稀醇,亦能溶於其他溶劑;遇溼氣及酶或酸、鹼時即能被分解,生成苷元和糖。苷類可根據苷鍵原子不同而分為氧苷、硫苷、氮苷和碳苷,其中氧苷為最常見。
板藍根多糖水提物10ml加10ml菲林試劑,沸水加熱5min,生成沉澱,過濾取濾液.取1ml濾液,加1ml10%鹽酸,煮沸10min,冷卻後加氫氧化鈉使其變成鹼性,再加菲林試劑沸水浴加熱,又產生沉澱,則證明有多糖.此方法 斐林試劑檢查多糖的原理是什麼?單糖和苷類化合物對其是否有影響
常見的催化劑就是酸和鹼,特殊的可以使用水解酶
首先要知道靜止相和移動相的關系。
靜止相指的是鋁表面上鍍有二氧化矽的玻璃板。
移動相指的是為分離化合物所用的各種溶劑。
TLC的原理是溶劑在靜止相里移動時一般不同的化合物移動的速度不一樣,因此可以分離混合物中一些雜志。(通過紫外線照色來找出化合物在靜止相里的位置)
烷類、芳烴類、烯類、鹵烴類、酯類、醛類、酮類和其他
是在官能團所在碳原子的β位有酮基的結構,比如乙醯丙酮、乙醯乙酸乙酯等
維A酸類化合物被認為具有抗肺癌細胞增殖的作用。Hittelman等對225例既往大量吸菸者進行了一項雙盲肺癌預防試驗,受試者隨機分別接受分期3個月的每日一次口服9-順式維A酸(100mg)、13-順式維A酸(1mg/kg)和維生素E(1200IU)或安慰劑。採用免疫組化方法檢測各組治療前後的支氣管活檢標本的支氣管上皮基底層和副基底層Ki-67增殖指數的變化(Ki-67核染色陽性的細胞百分比)。 結果顯示,任何治療組基底層的Ki-67標記都沒有變化;而13-順式維A酸和維生素E治療組的副基底層高Ki-67標記百分比與對照組相比,具有統計學意義的顯著下降(P=0.04);但9-順式維A酸組的下降沒有統計學意義(P=0.17)。在按照活檢部位的分析中也觀察到了類似的情況。該研究提示,在分組分析中,13-順式維A酸和維生素E的治療與安慰劑組相比,能夠顯著降低支氣管上皮細胞增殖,而9-順式維A酸沒有此作用。在按照活檢部位分析中,兩種治療都顯著降低了細胞的增殖。
嘌呤(Purine),是身體記憶體在的一種物質,主要以嘌呤核苷酸的形式存在,在作為能量供應、代謝調節及組成輔酶等方面起著十分重要的作用。嘌呤是有機化合物,分子式C5H4N4,無色結晶,在人體內嘌呤氧化而變成尿酸,人體尿酸過高就會引起痛風。海鮮,動物的肉的嘌呤含量都比較高,所以,有痛風的病人除用葯物治療外(醫治痛風的葯物一般對腎都有損害),更重要的是平時注意忌口。
1 測定物理常數(熔點。旋光度等) 2 元素分析,測定分子量。推出分子式 3 酸水解得到的單糖和苷元 4 色譜發確定單糖的種類及數量 5 酸解法,NMR法,旋光法確定苷鍵構型 6 全甲基化甲醇解法確定糖-糖,糖-苷元連線位置 7 緩和酸水解、酶水解及質...
❺ 免疫學檢驗常用技術有哪些
以下是幾種常用的免疫學技術:
1.免疫熒光技術
免疫熒光技術是利用熒光素標記的抗體(或抗原)檢測組織、細胞或血清 中的相應抗原(或抗體)的方法。由於熒光抗體具有安全、靈敏的特點,因此已 廣泛應用在免疫熒光檢測和流式細胞計數領域。根據熒光素標記的方式不同,可 分為直標熒光抗體和間標熒光抗體。間標熒光抗體中一抗並不直接連接熒光素, 而是先將一抗結合到蛋白,然後帶有熒光素的二抗再結合至一抗。通過二抗的結 合,能將信號進行放大,因此能在一定程度上提高檢測的靈敏度,但是隨之帶來 的高背景也降低了檢測的特異性。近年來,隨著熒光素和熒光檢測技術的不斷進 步,熒光檢測的靈敏度已經接近同位素檢測的水平,直接標記的熒光抗體逐漸取 代間接標記抗體。這些標記了熒光素的抗體直接結合至抗原,大大提高了檢測的 特異性,使檢測的結果更加准確可靠。熒光檢測技術的發展,使得免疫熒光技術 在傳染病診斷上有廣泛的用途,如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病,檢查IgM 抗體,做為近期接觸抗原的標志。利用單克隆熒光直接標記抗體鑒定淋巴細胞的 亞類。通過流式細胞儀,針對細胞表面不同抗原,可以同時使用多種不同的熒光 抗體,對同一細胞進行多標記染色。
2.放射免疫檢測
放射免疫檢測技術是目前靈敏度最高的檢測技術,利用放射性同素標記抗 原(或抗體),與相應抗體(或抗原)結合後,通過測定抗原抗體結合物的放射 性檢測結果。放射性同位素具有pg 級的靈敏度,且利用反復曝光的方法可對痕 量物質進行定量檢測。但放射性同位素對人體的損傷也限制了該方法的使用。
3.酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
酶聯免疫檢測是目前應用最廣泛的免疫檢測方法。該方法是將二抗標記上 酶,抗原抗體反應的特異性與酶催化底物的作用結合起來,根據酶作用底物後的 顯色顏色變化來判斷試驗結果,其敏感度可達ng 水平。常見用於標記的酶有辣 根過氧化物酶(HRP)、鹼性磷酸酶(AP)等。由於酶聯免疫法無需特殊的儀器, 檢測簡單,因此被廣泛應用於疾病檢測。常用的方法有間接法、夾心法以及BAS -ELISA。間接法是先將待測的蛋白抱被在孔板內,然後依次加入一抗、標記了 酶的二抗和底物顯色,通過儀器(例如酶標儀)定量檢測抗原。這種方法操作簡 單但由於高背景而特異性較差。目前已逐漸被夾心法取代。夾心法利用二種一抗 對目標抗原進行捕獲和固定,在確保靈敏度的同時大大提高了反應的特異性。近 年來,抗原的定量檢測技術也不斷推陳出新。近年來,在夾心法ELISA 的基礎上, 開發了多抗原檢測試劑盒,能同時檢測微量液相樣本中多個抗原含量。這項技術 的應用大大縮短了診斷的時間,提高診斷的可靠性和及時性。
4.免疫金膠體技術
膠體金技術經過30 多年的發展到現在已日趨成熟,該方法是將二抗標記上 膠體金顆粒,利用抗原抗體間的特異性反應,最終將膠體金標記的二抗吸附於滲 濾膜上,此方法簡單,快速,廣泛應用於臨床篩查。
❻ 免疫學的檢測方法有哪些
免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。