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丙氨酸氨基轉移酶檢測方法速率

發布時間:2023-10-14 20:31:02

1. 丙氨酸轉氨酶(ALT)的實驗室檢測方法

ALT即是以前的谷氨酸丙酮酸轉移酶(GPT)是肝功能檢查的項目。方法有:1、終點法(Karmen法)2、速率法(37度)

2. 丙氨酸底物法原理

丙氨酸氨基轉移酶活性的測定方法有丙氨酸底物法、丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法和2,4-二硝基苯肼法等[1]。
丙氨酸氨基轉移酶活性的測定方法目前主要為丙氨酸底物法。本法採用的原理是在ALT的催化下,L-丙氨酸的氨基轉移至α-酮戊二酸,生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應生成乳酸和NAD+。NADH在特定波長(如:340nm處)有特異吸收峰,其氧化的速率與血清中ALT的活性成正比,在此波長處測定NADH吸光度下降的速率,即可計算出ALT活性。
丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法採用的原理為[2]:
2,4-二硝基苯肼法採用的原理為:
丙氨酸氨基轉移酶催化丙氨酸與α-酮戊二酸之間的氨基轉移反應,二硝基苯肼與α-酮酸反應,生成相應的二硝基苯腙,在鹼性條件下,二硝基苯腙的吸收光譜有差異,通過酶標儀檢測在500-520nm處差異最大,以等摩爾濃度計算出丙酮酸的生成量,進而計算酶的活性。

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