檢測抑菌效果用哪種接種方法

❶ 無菌檢查法的抑細菌和抑真菌試驗

在用直接接種法無菌檢查前，可用如下方法測定供試品是否具有抑細菌和抑真菌作
用。用需氣菌、厭氣菌培養基4管及真菌培養基2管，分別接種金黃色葡萄球菌、生孢梭
菌、白色念珠菌均10～100個菌各兩管，其中1管加供試品規定量，所有培養基管置規定
的溫度，培養3～5天。如培養基各管24小時內微生物生長良好，則供試品無抑菌作用。
如加供試品的培養基管與未加供試品的培養基管對照比較，微生物生長微弱、緩慢或不
生長，均判為供試品有抑菌作用。該供試品需用稀釋法（種入較大量培養基中）或中和
法、薄膜過濾法處理，消除供試品的抑菌性後，方可接種至培養基。
檢查法
無菌檢查法包括：直接接種法和薄膜過濾法。前者適用於非抗菌作用的供試品，後
者適用於有抗菌作用的或大容量的供試品。
操作時，應用適當的消毒液對供試品容器表面或外包裝浸沒或擦拭消毒後，以無菌
的方法取內容物。
凡無菌檢查中，均應取相應溶劑和稀釋劑同法操作，作陰性對照。
1. 直接接種法
(1) 供試品准備 供試品如為注射液、供角膜穿通傷及手術用的滴眼劑或滅菌溶
液，按表1或表2規定量取供試品，混合。
供試品如為注射用無菌粉末或無菌凍干品或供直接分裝成注射用的無菌粉末原料，
按表1或表2規定量取供試品，加入無菌水或0.9%無菌氯化鈉溶液,或該葯品項下規定的
溶劑用量製成一定濃度的供試品溶液。
供試品如為外科敷料，取供試品4個包裝,以無菌操作拆開包裝，於不同部位分別剪
取約100mg或1cm×3cm的供試品11份；腸線、縫合線取最小包裝5個，拆開包裝，共取11
股，接種於足以浸沒供試品的適量培養基中。
供試品如為滅菌醫用器具，依樣品大小、形狀的不同，取供試品11個，接種於足以
浸沒供試品的適量培養基中。或用0.9%無菌氯化鈉溶液各40ml，分別沖洗內壁（輸血、
輸液袋）收集各沖洗液，混合，按薄膜過濾法檢查。
供試品如為青黴素類葯品，按表1或表3規定量取供試品，分別加入足夠使青黴素滅
活的無菌青黴素酶溶液適量，搖勻，混合。亦可按薄膜過濾法檢查。
供試品如為放射性葯品，取供試品1瓶（支），接種於裝量為7.5ml的培養基中。每
管接種量為0.2ml。
2.操作 取上述備妥的供試品,以無菌操作將該供試品分別接種於需氣菌、厭氣菌
培養基6管，其中1管接種金黃色葡萄球菌對照用菌液1ml，作陽性對照,另接種於真菌培
養基5管。輕輕搖動,使供試品與培養基混合。需氣菌、厭氣菌培養基管置30～35℃、真
菌培養基管置20～25℃培養7日。在培養期間應逐日觀察並記錄是否有菌生長。陽性對照
管在24小時內應有菌生長，如在加入供試品後，培養基出現渾濁，培養7天後,不能從外
觀上判斷有無微生物生長，可取該培養液適量轉種至同種新鮮培養基中或斜面培養基上
繼續培養，細菌培養2日，真菌培養3日，觀察是否再出現渾濁或斜面有無菌生長，或用
接種環取培養液塗片，染色，用顯微鏡觀察是否有菌。 2. 薄膜過濾法
如供試品有抗菌作用，按表1或表3規定量取供試品，按該葯品項下規定的方法處理
後, 加入0.9%無菌氯化鈉溶液或其他適宜的溶劑至少100ml中, 混合後，通過裝有孔徑
不大於0.45μm的薄膜過濾器，然後用0.9%無菌氯化鈉溶液或其他適宜的溶液沖洗濾膜
至陽性對照菌正常生長。將需氣菌、厭氣菌培養基，真菌培養基用陽性對照管用培養基
分別加至薄膜過濾器內（封閉式過濾器），或取出濾膜分成3等份,分別加入上述二種培
養基中，按規定溫度和時間培養。陽性對照管應根據供試品特性加入相應對照菌液1ml(
抗細菌葯物，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗厭氧菌葯物，以生孢梭菌為對照菌；抗真
菌葯物，以白色念珠菌為對照菌)。陽性對照管細菌應在培養24～48小時，真菌應在培養
24～72小時有菌生長。
結果判斷
當陽性對照管顯渾濁並確有細菌生長，陰性對照管呈陰性時，可根據觀察所得的結
果判定：如需氣菌、厭氣菌及真菌培養基管均為澄清或雖顯渾濁但經證明並非有菌生長,
均應判為供試品合格；如需氣菌、厭氣菌及真菌培養基管中任何1管顯渾濁並確證為有
菌生長，應重新取2倍量供試品，分別依法復試，除陽性對照管外，其他各管均不得有
菌生長，否則應判為供試品不合格。

❷ 微生物接種環境有什麼要求常用的接種方法有哪些

微生物接種需要在無菌條件下完成。

常用的接種方法有以下幾種：
1）劃線接種 這是最常用的接種方法。即在固體培養基表面作來回直線形的移動，就可達到接種的作用。常用的接種工具有接種環，接種針等。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。
2）三點接種 在研究黴菌形態時常用此法。此法即把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立形成菌落後，來觀察、研究它們的形態。除三點外，也有一點或多點進行接種的。
3）穿刺接種 在保藏厭氧菌種或研究微生物的動力時常採用此法。做穿刺接種時，用的接種工具是接種針。用的培養基一般是半固體培養基。它的做法是：用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養基中心向管底作直線穿刺，如某細菌具有鞭毛而能運動，則在穿刺線周圍能夠生長。
4）澆混接種 該法是將待接的微生物先放入培養皿中，然後再倒入冷卻至45°C左右的固體培養基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就達到稀釋的目的。待平板凝固之後，置合適溫度下培養，就可長出單個的微生物菌落。
5）塗布接種 與澆混接種略有不同，就是先倒好平板，讓其凝固，然後再將菌液倒入平板上面，迅速用塗布棒在表面作來回左右的塗布，讓菌液均勻分布，就可長出單個的微生物的菌落。
6）液體接種 從固體培養基中將菌洗下，倒入液體培養基中，或者從液體培養物中，用移液管將菌液接至液體培養基中，或從液體培養物中將菌液移至固體培養基中，都可稱為液體接種。
7）注射接種該法是用注射的方法將待接的微生物轉接至活的生物體內，如人或其它動物中，常見的疫苗預防接種，就是用注射接種，接入人體，來預防某些疾病。
8）活體接種 活體接種是專門用於培養病毒或其它病原微生物的一種方法，因為病毒必須接種於活的生物體內才能生長繁殖。所用的活體可以是整個動物；也可以是某個離體活組織，例如猴腎等；也可以是發育的雞胚。接種的方式是注射，也可以是拌料喂養。

❸ 抑菌試驗的常用方法

A、抗菌葯物貯存液制備
1.1.1.抗菌葯物貯存液制備 抗菌葯物貯存液濃度不應低於1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍於最高測定濃度。溶解度低的抗菌葯物可稍低於上述濃度。抗菌葯物直接購自廠商或相關機構。所需抗菌葯物溶液量或粉劑量可公式進行計算。例如：需配製100 ml濃度為1280μg/ml的抗生素貯存液，所用抗生素為粉劑，其葯物的有效力為750μg/mg。用分析天平精確稱取抗生素粉劑的量為182.6 mg。根據公式計算所需稀釋劑用量為：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然後將182.6 mg抗生素粉劑溶解於107.0ml稀釋劑中。制備抗菌葯物貯存液所用的溶劑和稀釋劑見表5。配製好的抗菌葯物貯存液應貯存於-60℃以下環境，保存期不超過6個月。
B、葯敏試驗用抗菌葯物濃度范圍
1.1.2.葯敏試驗用抗菌葯物濃度范圍 根據NCCLS抗菌葯物敏感性試驗操作標准，葯物濃度范圍應包含耐葯、中介和敏感分界點值，特殊情況例外。
C、培養基
1.1.3. 培養基 NCCLS推薦使用Mueller-Hinton（MH）肉湯，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厭氧菌在此培養基中生長良好。在測試葡萄球菌對苯唑西林的敏感性時，應在肉湯中加入2%（W/V）氯化鈉，按製造廠家的要求配製需要量的MH肉湯。嗜血桿菌屬菌使用HTM肉湯，肺炎鏈球菌和其它鏈球菌使用含2%~5%溶解馬血的MH肉湯。
D、接種物的制備
1.1.4.接種物的制備 有2種方法配製接種物，一是細菌生長方法，用接種環挑取形態相似待檢菌落3-5個，接種於4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉湯中，35℃孵育2-6h。增菌後的對數生長期菌液用生理鹽水或MH肉湯校正濃度至0.5麥氏比濁標准，約含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落懸液配製法，對某些苛養菌，如流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和鏈球菌及甲氧西林耐葯的葡萄球菌等菌株，推薦直接取培養18~24h的菌落調配成0.5麥氏比濁標準的菌懸液。用MH肉湯將上述菌懸液進行1∶100稀釋後備用。注意應在15分鍾內接種完配製好的接種物，並取一份接種物在非選擇性瓊脂平板上傳代培養，以檢查接種物純度。
註：在臨床微生物學檢驗中，麥氏比濁法常用於細菌鑒定、葯敏實驗前配置菌液時大致判斷菌液濃度的一種方法，通常認為，如將配菌液濃度配成0.5麥氏比濁管時，相當於1.5×108細菌數/ml，由於方法本身就是一種估計的方法，所以盡管不同細菌大小差異很大，除了真菌孢子，細菌的差別不大，結果不會有影響。但是，標准比濁管的濃度，是葯敏實驗結果的影響因素之一。
E、附：0.5麥氏比濁管配製方法
0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2 . 2H2O) 0.5ml
0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml
將二液混合，置螺口試管中，放室溫暗處保存。用前混勻。
有效期為6個月。
F、稀釋抗菌葯物的制備及菌液接種
1.1.5.稀釋抗菌葯物的制備及菌液接種 取無菌試管（13×100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6mlMH肉湯外，其餘每管加入MH肉湯1ml，在第1管加入抗菌葯物原液（如1280μg/ml） 0.4ml混勻，然後吸取1ml至第2管，混勻後再吸取1ml至第3管，如此連續倍比稀釋至第11管，並從第11管中吸取1ml棄去，第12管為不含葯物的生長對照。此時各管葯物濃度依次為256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。然後在每管內加入上述制備好的接種物各1ml，使每管最終菌液濃度約為5×105CFU/ml。第1管至第11管葯物濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。
G、孵育
1.1.6.孵育 將接種好的稀釋管塞好塞子，置35℃普通空氣孵箱中孵育16~20h；嗜血桿菌和鏈球菌在普通空氣孵箱中孵育20~24h；對可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐萬古黴素腸球菌應持續孵育滿24h。
H、結果判斷與解釋
1.1.7.結果判斷與解釋 在讀取和報告所測試菌株的MIC前，應檢查生長對照管的細菌生長情況是否良好，同時還應檢查接種物的傳代培養情況以確定其是否污染，質控菌株的MIC值是否處於質控范圍。以肉眼觀察，葯物最低濃度管無細菌生長者，即為受試菌的MIC。甲氧苄胺嘧啶或磺胺葯物的肉湯稀釋法終點判斷，與陽性生長對照管比較抑制80%細菌生長管葯物濃度為受試菌MIC。
根據NCCLS推薦的分界點值標准，判斷耐葯（resistant, R）、敏感(susceptible, S)或中介（intermediate, I）。S表示被測菌株所引起的感染可以用該抗菌葯物的常用劑量治療有效，禁忌症除外。R指該菌不能被抗菌葯物的常用劑量在組織液內或血液中所達到的濃度所抑制，或屬於具有特定耐葯機理（如β-內醯胺酶），所以臨床治療效果不佳。I是指MIC接近葯物的血液或組織液濃度，療效低於敏感菌。還表示被測菌株可以通過提高劑量（如β-內醯胺類葯物）被抑制，或在葯物生理性濃集的部位（如尿液）被抑制。另外，中介還作為「緩沖域」，以防止由微小的技術因素失控，所導致較大的錯誤解釋。 A、抗菌葯物和培養基制備
1.2.1.抗菌葯物和培養基制備 同常量肉湯稀釋法。
B、MIC板制備
1.2.2.MIC板制備 無菌操作，將倍比稀釋後不同濃度的抗菌葯物溶液分別加到滅菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加葯液，每孔10μl，第12孔不加葯作為生長對照，冰凍乾燥後密封，-20℃以下保存備用。
C、接種物制備
1.2.3.接種物制備 將用生長法或直接菌懸液法制備的濃度相當於0.5麥氏比濁標準的菌懸液，經MH肉湯1∶1000稀釋後，向每孔中加100μl，密封後置35℃普通空氣孵箱中，孵育16~20h判斷結果。當試驗嗜血桿菌屬，鏈球菌屬時，孵育時間為20~24h，試驗葡萄球菌和腸球菌對苯唑西林和萬古黴素的葯敏試驗時孵育時間必須滿24h。此時，第1孔至第11孔葯物濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。
D、結果判斷
1.2.4.結果判斷 以在小孔內完全抑制細菌生長的最低葯物濃度為MIC。當陽性對照孔（即不含抗生素）內細菌明顯生長試驗才有意義。當在微量肉湯稀釋法出現單一的跳孔時，應記錄抑制細菌生長的最高葯物濃度。如出現多處跳孔，則不應報告結果，需重復試驗。通常對革蘭陰性桿菌而言，微量肉湯稀釋法測得的MIC與常量肉湯稀釋法測得的結果相同或低一個稀釋度（1孔或2倍）。 A、介紹
瓊脂稀釋法是將不同劑量的抗菌葯物，加入融化並冷至50℃左右的定量MH瓊脂中，製成含不同遞減濃度抗菌葯物的平板，接種受試菌，孵育後觀察細菌生長情況，以抑制細菌生長的瓊脂平板所含最低葯物濃度為MIC。本法優點是可在一個平板上同時作多株菌MIC測定，結果可靠，易發現污染菌；缺點是制備含葯瓊脂平板費時費力。
B、培養基制備
2.1.培養基制備 使用MH瓊脂，按商品說明書進行配製，pH7.2~7.4。淋病奈瑟菌使用GC瓊脂基礎加1%添加劑；其它鏈球菌使用含5%（V/V）綿羊血的MH瓊脂（當試驗磺胺葯時，使用溶解的馬血）。
C、含葯瓊脂平板制備
2.2.含葯瓊脂平板制備 根據實驗設計，將已倍比稀釋的不同濃度的抗菌葯物分別加入已加熱溶解，並在45~50℃水浴中平衡的MH瓊脂中，充分混勻傾倒滅菌平皿，瓊脂厚度3~4mm。通常按1∶9比例配製葯物瓊脂平板，根據需要來選擇葯物濃度范圍。配製好的含葯瓊脂平板應裝入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可貯存5天。
D、接種物制備與接種
2.3.接種物制備與接種 制備濃度相當於0.5麥氏標准比濁管的菌懸液，再1∶10稀釋，以多點接種器吸取制備好菌液（約1~2μl）接種於瓊脂平板表面，每點菌數約為104CFU，形成直徑為5~8mm的菌斑。接種好後置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐葯葡萄球菌、萬古黴素耐葯腸球菌孵育時間應滿24h），觀察結果。奈瑟菌屬、鏈球菌屬細菌置5%二氧化碳、幽門螺桿菌置微需氧環境中孵育。
E、結果判斷
2.4.結果判斷 將平板置於暗色、無反光物體表面上判斷試驗終點，以抑制細菌生長的最低葯物濃度為MIC。在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺瓊脂平板上可見輕微細菌生長，與生長對照比較抑制80%以上細菌生長的最低葯物濃度作為終點濃度。
如果出現有2個以上菌落生長於含葯濃度高於終點水平的瓊脂平板上，或低濃度葯物瓊脂平板上不長而高濃度葯物瓊脂平板上生長現象，則應檢查培養物純度或重復試驗。 紙片擴散法(K-B法)又稱瓊脂擴散法
K-B法葯敏試驗時接種物配製有兩種方法。
第一種是肉湯增菌法（對數生長法），是用接環挑取3-5個細菌菌落入肉湯增菌管中進行增菌4-6小時，然後用生理鹽水或肉湯對增菌管中的培養物進行稀釋校正使其濃度達到0.5麥氏比濁標准（因為經過增菌培養其培養物濃度一般都高於此標准）。
第二種方法是直接菌落法：從孵育18-24小時的非選擇性培養基上，挑取3-5菌落，直接用肉湯或鹽製成懸液作為接種，然後將濁度調整至0.5麥氏比濁標准。此法是檢測苛養菌（如嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和鏈球菌）和潛在的對甲氧西林耐葯的葡萄球菌的推薦方法。
將菌製成菌懸液用無菌棉簽蘸取菌液在管壁上擠去多餘菌液 ,塗布整個M2H平板表面 ,反復 3 次 ,每次將平板旋轉60 度 ,保證塗布均勻 ,35 ℃培養後菌落呈半融合狀態 ,否則影響葯敏結果。
K-B 法指定用 M-H瓊脂平板 ,應用直徑90cm平皿 ,在水平的無菌台上傾倒 ,准確量取高壓滅菌後的M2H瓊脂液25ml ,使之瓊脂板厚度為 4mm。否則厚度過高 ,使含葯物紙片的葯物半球形擴散的體積加大 ,導致假耐葯;反之導致假敏感。
要求紙片直徑 6.00～6.35mm每片吸水量約012 μl ,紙片的葯物含量必須與 K 2B 法規定的
一致 ,用前必須做質量鑒定 ,質量合格方可使用。紙片的保存尤為重要 ,一般要求保存在有乾燥劑的容器內低溫保存 ,紙片取出後須放室溫10min後方可打開 ,否則空氣中的水份冷凝在紙片上易潮解 ,使葯物失效影響葯敏試驗結果。 E試驗是指濃度梯度瓊脂擴散試驗，其原理基本同擴散法，即濃度呈連續梯度的抗菌葯物從塑料試條中向瓊脂中擴散，在試條周圍抑菌濃度范圍內受試菌的生長被抑制，從而形成透明的抑菌圈。E試驗綜合了稀釋法和擴散法的原理和特點，同時還彌補了二者的一些不足，可以像稀釋法一樣直接定量測出抗菌葯物對受試菌的MIC。
A、培養基、菌液制備和接種
3.1.培養基、菌液制備和接種 同紙片擴散法。
B、貼E試驗條
3.2.貼E試驗條 同紙片擴散法，E試驗條的刻度面朝上，不得貼反，一旦接觸瓊脂後不得再移動。直徑150mm的平皿內可放置6根E試驗試條，90mm者一般只能放置1根。
C、孵育時間和溫度
3.3.孵育時間和溫度 同紙片擴散法。
D、結果閱讀
3.4.結果閱讀 孵育後圍繞試條可形成一個橢圓形的抑菌圈，在抑菌圈和試條的橫切相交處試條上的讀數刻度即是測定抗菌葯物對受試菌的MIC。閱讀時應注意的問題見供應商的產品說明書。

❹ 微生物接種方法有哪幾種

接種常見方法有：平板劃線接種法、斜面接種法、傾注培養法、穿刺接種法、液體接種法。

一、平板劃線分離法

平板劃線分離法:是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環在平板培養基表面，通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養後生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種。

二、斜面接種法

該法主要用於單個菌落的純培養、保存菌種或觀察細菌的某些特性。

三、穿刺接種法

穿刺培養，是指將帶有欲培養微生物的接種針深插至半固體培養基（瓊脂含量0.2%〜1.0%）中接種，並進行微生物固體深層培養的一種方法，主要用於厭氧或兼性厭氧微生物的培養。

四、液體接種法

液體培養，是指將微生物直接接種於液體培養基中，並不斷振盪或攪拌，使微生物均勻地在液體培養基中生長繁殖的一種培養方法。液體培養適用於好氧微生物和植物組織培養，以迅速得到大量繁殖體為目的。

五、塗布接種法

微生物學實驗中的一種操作方法。由於將含菌材料現加到還較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，而且採用稀釋倒平台法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學研究中更常用的純種分離方法是塗布平板法。

(4)檢測抑菌效果用哪種接種方法擴展閱讀：

接種注意事項

1、每次接種時間最長不得連續超過2小時。

2、操作時，接種工具尖端和種塊不能接觸到管口和外部其它物體。工具尖端碰到外面物體要重換工具，種塊碰到外面物體則作廢。

3、一般用種量：每支試管母種可擴繁一級種100支左右；擴接原種6～8瓶。

❺ 微生物學常用的接種技術有哪些各有何特點

細菌的接種方法有很多種，如劃線法、塗布法、傾注法、斜面接種法、液體培養基接種法、螺旋接種法等，其方法和應用各有不同。
一、劃線法：
此法主要用於菌種分純，獲得單菌落.

由接種環沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，並逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養後，可在平板表面得到單菌落。

優點：可以觀察菌落特徵，對混合菌進行分離。

缺點：不能用於菌落計數。

二、塗布法：

此法主要用於菌落總數計數.

先將培養基熔化後趁熱倒入無菌平板中，然後用無菌吸管吸取0.1ml 菌液接種在已凝固的瓊脂平板上。再用無菌L 型玻璃棒將菌液在平板上塗抹均勻，將塗抹好的平板平放於桌上20~30min，使菌液滲透入培養基內，然後將平板倒轉，保溫培養，至長出菌落後即可計數。

優點：可以計數，可以觀察菌落特徵。

缺點：接種前需梯度稀釋，吸收量較少，較麻煩，平板不幹燥效果不好，容易蔓延。

三、傾倒法：

此法主要用於菌落總數的計數.

吸取1ml 菌液加入平板中，倒入已融化並冷卻至45~50℃的細菌培養基，輕輕轉動平板，使菌液與培養基混合均勻，冷疑後倒置，適溫培養。至長出菌落後即可計數。
優點：可以計數，較方便。

缺點：接種前需梯度稀釋，不能觀察菌落特徵，不適用於嚴格好氧菌和熱敏感菌。

四、斜面接種法：

此法主要用於保存菌種，或觀察細菌的某些生化特性和動力.

用接種環或接種針伸入菌種管內，挑取用來移種的菌落。伸入斜面培養管內，先從斜面底部到頂端拖一條接種線，再自下而上蜿蜒劃線，或直接自下而上地蜿蜒劃線。接種完成之後，用火焰滅菌培養管口，並塞上棉塞，置於37℃培養。

五、液體培養基接種法：
此法主要用於菌液比濁實驗

用滅菌接種環挑取菌落或標本，在試管內壁與液面交界處輕輕研磨，使細菌均勻得散落在液體培養基中。

六、螺旋接種法：
此法主要用於菌落總數計數
可以在無任何全部或中間稀釋的情況下快速細菌接種。對數減少的樣品容量以阿基米德螺旋線的形式被自動分注在旋轉式培養基表面。培養基上每一點的容量可以被知曉和校準。菌液的濃度可以通過培養皿上一定區域的菌落數量除以同區域樣品分注量來計算。

優點：螺旋接種法菌液無需稀釋（其他接種方法均需經過梯度稀釋才能計菌落數），自動化接種，效率高，可節省3/4 的耗材和時間。

缺點：產品成本高，適用於樣品量比較大的實驗。

❻ 如何進行農葯抑菌活性測定

紋曲寧分別與9種不同的表面活性劑組合混用,通過測定製劑中的活菌含量和制劑對水稻紋枯病菌的活性,篩選出5種不影響枯草芽孢桿菌活性的表面活性劑組合A、B、C、D和E.紋曲寧分別與這5種表面活性劑按重量比100 ∶3混配後,降低了葯劑稀釋液的表面張力,在1∶500倍的稀釋液中,表面活性劑達到和超過了臨界膠束濃度,增加了枯草芽孢桿菌在水稻表面的滯留量.田間試驗結果表明,紋曲寧中加入適宜的表面活性劑後,能提高紋曲寧對水稻紋枯病的防治效果.
噻唑類殺菌劑（thiazoles），市場上常見的「噻唑類殺菌劑」主要有：噻菌銅（龍克菌）、噻枯唑（葉枯唑）、噻菌茂、噻唑鋅、噻森銅、噻唑菌胺（ethaboxam）、土菌靈（etridiazole）、辛噻酮（octhilinone）、苯噻硫氰（benthiazole）。

噻唑菌胺（ethaboxam）一種中等內吸性殺菌劑。主要防治卵菌病害。對不同的病菌活性有差異。該葯低毒、無致畸性，對蜜蜂安全。與甲霜靈、嘧菌酯無交互抗葯性。

拌種靈（ amicarthiazol ），「2-氨基-4-甲基-5-甲醯苯胺噻唑]」，一種高效，廣譜的內吸性殺菌劑，屬於噻唑類殺菌劑。
拌種靈通常主要用在防治禾穀類作物由擔子菌引起的多種病害。該葯劑在細菌病害防治上的應用主要是在中國，自1980年以來相繼報道了拌種靈對水稻白葉枯病菌、柑橘潰瘍病菌等細菌病害具有較好的防治效果[1,2] 。噻唑類葯劑因其復雜的作用機制一直被視為研究的熱點，如烯丙異噻唑在離體條件下幾乎沒有抑菌活性，只能在施用水稻上才能表現防病效果[3]；敵枯唑在離體和活體上表現不同的作用機制[4]。同時拌種靈又含有與萎銹靈相同的毒性結構——苯胺基甲醯基，目前萎銹靈的作用機制業已明確，主要干擾菌體呼吸過程中線粒體呼吸鏈上復合物處琥珀酸—輔酶Q之間氧化還原酶系，抑制生物能量的合成[5]。

benthiavalicarb-isopropyl，由組合化學和Ihara化學工業公司聯合開發的一種含氟苯並噻唑-氨基甲酸異丙酯的新型殺卵菌劑。具有保護、治療活性，持效性、耐雨水沖刷性和滲透性好。
1.把實驗室用的普通濾紙用打孔器打成0.5cm直徑的圓片，裝在試管中密封滅菌（121度，20分鍾）。
2.將已經培養好的菌製成一定濃度的懸浮液，取1ml該菌懸液至滅過菌的（121度，20分鍾）培養皿中，倒入適量（約4毫米厚吧）已滅菌的培養基（溫度約45度，用手摸瓶壁不感覺燙手即可），輕輕轉動培養皿，使培養基與菌液混勻，靜置凝成平板。
3.將用於試驗的農葯配製成幾個所需的濃度，用無菌鑷子夾起一片濾紙放入葯液中浸透，夾出時在容器邊緣停靠片刻，濾掉多餘的葯液，把濾紙片放在平板中凝好的培養基的中心，用鑷子稍用力按一下，使之與培養基充分緊貼。
4.按上述方法，每個濃度做3個重復，以滅菌水浸濕的濾紙片做空白對照。
5.在適當溫度下培養一定時間後觀察，用直尺或游標卡尺測量抑菌圈的大小，計算抑菌率就OK了！