① 植物激素提取的方法
例如:
提取與測定激素時稱取0.5 g玉米葉片,去中脈,加2 mL樣品提取液(80%甲醇,內含1.0 mmol·L-1二叔丁基對甲苯酚),在冰浴中研磨成勻漿,轉入10mL試管,再用2 mL提取液分次將研缽沖洗干凈,一並轉入試管中,搖勻放在4 ℃冰箱中靜置4 h後,以1000×g離心15min,取上清液過C-18固相萃取柱,再將過柱後的樣品轉入10mL塑料離心管中,氮氣吹乾後儲於-20℃下備用。測定參照何鍾佩(1993)書中方法用間接酶聯免疫吸附分析法檢測脫落酸(ABA)、玉米素核苷(ZR)、生長素(IAA)茉莉酸甲酯(MeJA)和赤黴素(GA3)的含量。
酶聯免疫吸附分析間接法常用於檢測抗體,一般之操作步驟為:
將已知之抗原固著於塑膠孔盤上,完成後洗去多餘之抗原加入待測檢體,檢體中若含有待測之一次抗體,則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結洗去多餘待測檢體,加入帶有酵素之二次抗體,與待測之一次抗體鍵結洗去多餘未鍵結二次抗體,加入酵素受質使酵素呈色,藉儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產物的含量即可測量待測抗原的含量。
② 植物RNA提取方法有哪些
植物提取物的提取方法
目前提取植物提取物常用的方法有溶劑提取法、超聲波提取法、微波提取法和酶提取法,而超臨界流體萃取法、微波輔助提取法等則作為新的提取技術被廣泛使用。
溶劑提取法
溶劑提取法是用溶劑從固體原料中提取有效成分,所用的溶劑必須具備與所提取的溶質互溶的特性。將植物材料粉碎後,放入適合的容器內,加入數倍量溶劑,可採用浸漬、滲漉、煎煮、迴流和連續提取法進行提取。巴科的丹參提取物就是用溶劑提取法提取的,精油類物質就是用溶劑提取法。
在溶劑提取法的提取工藝過程中,溶劑的濃度、料液比、提取溫度、提取的時間會直接影響有效成分的提取率。Cristina Juan等人通過溶劑萃取法提取大米中的赭麴黴素A,用熒光探測法和液相色譜法確定OTA的含量,研究表明在最適宜的料液比、提取溫度和提取時間的情況下,提取物OTA含量最高為4.17ng/g。Monte D. Holt等採用溶劑萃取法從生的和熟的小麥種提取烷基間苯二酚,實驗表明採用溶劑萃取法能夠節約提取時間。
超聲波提取法
超聲波提取是利用超聲波產生的強烈振動和空化效應加速植物細胞內物質的釋放、擴散並溶解進入溶劑中,同時可以保持被提取物質的結構和生物活性不發生變化。超聲波提取原理主要為物理過程,是近年來逐漸受到重視的一個較新的提取方法。對多數成分來說,超聲波提取方法較常規的溶劑提取能大幅地縮短提取時問,消耗溶劑少,浸出率高,因此具有較高的提取效率。
在超聲波法提取工藝過程中,溶劑的選擇和濃度、料液比、提取溫度、提取的時間會直接影響提取率。Ling Zhou等人利用超聲波提取法提取五味子,主要研究了超聲提取率的影響因素,實驗研究得出,提取率隨著溫度的升高而升高,隨著功率的增大而增大。Hong Van Le等利用超聲波提取櫻桃中的維生素E和酚類化合物,主要比較了超聲提取法和酶提取法在提取時間、提取率上的差異,實驗結果表明超聲波提取法時間上比酶提取縮短了6倍,超聲波提取的提取率是酶提取的2~3倍。鍾愛國等利用超聲波萃取鮮竹葉中葉綠素的方法,用分光光度計來定量測定所萃取的葉綠素的含量。結果表明:與常用的有機溶劑提取法相比,超聲波萃取法不僅萃取率高、速度快、效率高,而且是室溫提取,無需加熱,節約能源。
③ 如何鑒別摻假的植物提取物產品
1、添加提取自其他植物的成分 產品舉例:大豆提取物 通過添加染料木素的方法使低含量產品達到40%總異黃酮的規. 有感於近年來植提產品造假越來越嚴重,市場形象很差的現狀,本人根據自己的一些經驗,談一些常見的造假手段,希望能幫助大家一起提高。 1、添加提取自其他植物的成分 產品舉例:大豆提取物 通過添加染料木素的方法使低含量產品達到40%總異黃酮的規格 也有加廉價的蘆丁提高總黃酮含量的(如:山楂果提取物、水皂角提取物) 鑒別方法:紫外檢測的總黃酮類產品盡量採用 hplc 進行定性,多組分的物質需要確定各組分的峰比值,最後還可以採用紅外光譜分析特徵峰。這幾個方法都鑒別不出來?這產品別做了,壽命到頭了。 2、添加人工合成的成分 產品舉例:石榴皮提取物等多酚類產品 添加人工合成的鞣花酸提高多酚含量 鑒別方法:比較難,不同的產品有不同的方法。 3、鑽檢測方法的漏洞 產品舉例:貫葉連翹提取物 貫葉連翹提取物經過簡單的處理(成本很低),紫外法測定的總金絲桃素含量可以提高一倍左右。 鑒別方法:高效液相色譜法進行測定,可以發現金絲桃素含量極低。 4、糊精問題 產品舉例:多糖類產品、比例提取物等 多糖類產品、比例提取物勾兌糊精大家都知道,可是企業也有難處,多糖產品如果不勾兌糊精,產品的引濕性、色澤都很差,勾兌恰好還增加了多糖的含量。比例提取物有時收率極低,為了滿足客戶的比例要求,只好加糊精。 但有的產品純粹是為了降低成本進行勾兌的,如當歸提取物採用糊精拌當歸油,鋸葉棕提取物也是一樣,糊精成了產品的主要構成,那就有點說不過去了。 鑒別方法:過去由於檢測手段的欠缺,糊精不太好鑒別,現在通過紅外光譜可以實現對糊精的定性。 個人認為:最好的辦法還是建立原料及其各規格提取物的指 紋圖譜,真偽立判。但只是空想,實施太難。 總之,隨著技術的進步,造假的水平越來越高,但鑒別的手段也會不斷提高,同時也要考慮依靠技術人員的專業能力、經驗,儀器水平等因素,拿在手裡看肯定是看不出來的。