磷脂自由基檢測方法

⑴ 自由基化學詳細資料大全

研究自由基（free radical chemistry）的產生、結構及化學反應性能的有機化學分支學科。自由基是一種含不成對電游祥枯子的化學物種，它可以是原子、分子或基團。

基本介紹

• 中文名 ：自由基化學
• 外文名 ：free radical chemistry
• 領域 ：化學
• 特點 ：不含成對電子

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自由基化學

研究自由基的產生、結構及化學反應性能的有機化學分支學科。自由基是一種含不成對電子的化學物種，它可以是原子、分子或基團。原子序數為奇數的原子，如氫原子、氯原子等都是自由基。在自由基化學中，主要研究對象是有機自由基，即含不成對電子的有機化合物分子。大多數自由基都是不穩定的活潑中間體，很容易發生化學反應。只有極少數自由基是穩定的，如二苯基苦基肼（DPPH）自由基在固態時可長期穩定保存，三苯甲基自由基在溶液中能穩定存在，在生物化學及醫學研究中作為自旋標記物的氮氧自由基已經是市售的化學試劑。

自由基的產生方法

自由基的產生方法主要有3種：①光照法。具有一定能量的光輻照某些化合物時，使化學鍵斷裂，生成自由基。②氧化還原法。通過電子轉移生成自由基。③熱均裂法。很多過氧化物和偶氮化合物受熱時均裂，生成自由基，這是最方便而且用途最多的方法。例如，偶氮二異丁腈是常用的自由基聚合引發劑，在65℃時即可分解，產生自由基。

自由基的檢測方法

由於自由基不穩定，檢測有一定困難。常用的檢測方法有：①化學方法。利用某些能夠與自由基反應生成穩定產物的試劑捕集自由基，然後對穩定產物進行分離鑒定。②電子順磁共振法。適合對穩定自由基的檢測，是鑒定自由基結構最可靠的方法。③化學誘導動態電子極化法（CIDEP）。適於檢測短壽命的瞬態自由基，尤其是閃光光解自由基。

自由基反應類型

自由基具有很高的活性，可進行多種類型的反應，常見反應類型有：①化合或偶聯反應。②取代反應。③歧化反應。④氧化還原反應。⑤加成反應。⑥碎裂反應（生成較小的自由基）。⑦插入反應。⑧自由基重排反應。在自由基反應中最具特色的當數自由基連鎖反應，該反應分三步。即引發、鏈增長和鏈終止。以甲烷氯化反應為例：

自由基的清除

給予負離子，使生物體體內過剩的活性氧還原，就能夠抑制生物體的氧化。負離子能夠使生物體容易攝取維他命宴豎頪，胺基酸，礦物質等，這些成分能夠分解，消除活性氧神洞，提高SOD的活性。所以負離子是生物體不可或缺的物質。負離子是唯一能夠消除活性氧自由基，保護生物體的自然要素。負離子沒有副作用，能夠促進自然治癒力，治癒疾病，保持健康。負離子能夠使血液變成弱鹼性，使新陳代，生理作用旺盛，並強化免疫力，同時也能夠給予生物體衰弱時增強的活性氧電子，仰制氧化，杜絕疾病的根源。氧附著於生物體的細胞組織中，當電子被奪走時，就會引起細胞組織的氧化。活性氧會從生物體的脂質（不飽和脂肪酸）或蛋白質那兒奪走電子，結果引起腦中風或心肌梗塞，動脈硬化症，癌症及糖尿病。負離子的本質是電子，因此給予生物體負離子，就能使生物體體內充滿電子，代替生物體的脂質或蛋白質的電子給予活性氧，使活性氧安定，所以不會損傷生物體的細胞，同時能夠抑制疾病的發生。

⑵ 抗氧化活性的實驗測定方法有哪些

1、ORAC

ORAC是Oxygen Radical Absorption Capacity（氧化自由基吸收能力）的縮寫，是一種測試抗氧化能力的評價方法體系。

ORAC抗氧化測試包括對：過氧化自由基（含親水性、親脂性）、羥基自由基、過氧亞硝基、單線態氧、超氧陰離子 這五種人體最主要的活性氧自由基進行全面的分析，能有效得出樣品的抗氧化實際能力及分布情況。

ORAC抗氧化生物測試是比普通抗氧化測試的更高一層的測試方案。利用人體細胞有效測試出樣品的抗氧化力（生物利用度）。

2、其他評價方法

抗氧化不僅僅是一個概念，對生物體抗氧化的效果是可以量化測定的，作為動物實驗一般是服用抗氧化劑一定時間後，測定血液中的酯質過氧化產物丙二醛變化、以及肝臟勻漿中超氧化物歧化酶SOD和谷胱甘肽過氧化物酶GSH-PX的活力變化。

從上述兩種酶和MDA的變化狀況來判定抗氧化的強度及效果。作為人體不可能測肝臟勻漿，可以測定血液或者尿液中的MDA，以及血液中的SOD、GXH-PX來判定抗氧化的效果。

3、抗油脂過氧化力測定

脂類包括的范圍很廣，構成生物膜的主要成分，脂類中的不飽和脂肪酸可以過氧化，脂類過氧化過程中會產生L、LO、LOO-等自由基以及LOOH，這些產物會損傷生物細胞。因此，能夠抑制脂類過氧化具有重要的生物學意義。

A硫氰酸鐵法FTC：硫氰酸鐵鹽(FTC)比色法是基於在酸性條件下，脂質氧化形成的過氧化物可將Fe2+氧化成Fe3+，然後Fe3+與硫氰酸根離子可形成在480-515nm內有最大吸收的紅色絡合物。通常用500nm處吸光值的高低表示物質抗脂質過氧化的能力，吸光值越小，表明物質的抗脂質過氧化能力越強。

B硫代巴比妥酸反應物TBARs法：是評價油脂的氧化程度的常用方法。油脂或者亞油酸氧化後的終產物主要是丙二醛，這些過氧化產物與硫代巴比妥酸作用生成有色化合物，該有色化合物在530 nm左右有吸收。

4、清除DPPH能力的側定

DP是一種早期合成的有機自由基，常用來評估抗氧化物的供氫能力，它在有機溶劑中非常穩定，呈紫色，而且在處有一個特徵吸收峰，當遇到自由基清除劑時，DPPH的孤對電子被配對而使其退色，也就是在最大吸收波長處的吸光值變小。因此，可通過測定吸光值的變化來評價樣品對DPPH自由基的清除效果。

5、還原能力的測定

還原力的測定是檢驗樣品是否是良好的電子供體的方法，還原力強的樣品應該是良好的電子供應者，它供應的電子不僅能使Fe3+還原為Fe2+，也可以與自由基反應。還原力的測定是用來評價抗氧化劑活性的常用方法。

6、抑制 LOX酶實驗

脂肪氧化酶LOX在植物中分布廣泛是一種非血紅素鐵蛋白，分子量為90一100KD。這種酶蛋白有多個多膚鏈組成，含有三價鐵離子金屬輔基則有活性，而包含二價鐵離子的金屬輔基則缺乏活性。

在生物體內的主要作用是，專一催化含有順，順一戊二烯結構的多元不飽和脂肪酸的加氧反應，生成具有共扼雙鍵的多元不飽和脂肪酸的氫過氧化物。

在生物體內的主耍底物是甘油脂類〔如磷脂）釋放的游離不飽和脂肪酸，其中動物體內的主要底物是花生四烯酸，植物體內的主要底物是亞油酸和亞麻酸，主要產物為過氧羚基型脂肪酸。

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在機體內抗氧化活性成分發揮作用主要通過兩個機制：第一是鏈的中斷機制，主要中斷自由基的鏈式反應，例如多酌類化合物、VE、VC等天然抗氧化物質可向自由基提供一個電子來中斷鏈式反應。第二是促使產生自由基的催化劑失活而達到抗氧化的目的。

抗氧化物質可與超氧化物歧化酶等酶類或抗氧化物質協同構成抗氧化聯合系統，增強機體的抗氧化能力，修復損傷的DNA，使體內的基因能夠正常的表達。對於食品而言，食品中的抗氧化活性成分不但可以防止食品自身的腐敗變質還可以生產加工為抗氧化劑。

田迪英等對41種果蔬進行了抗氧化活性的研究，發現其中大部分果蔬具有較強的抗氧化能力。謝天柱等對添加包括茶多酷在內的多種抗氧化劑的蘋果酒的抗氧化能力的比較，結果發現，添加0.1%的茶多酷可提高果酒的抗氧化能力，並可有效減輕果酒的褐變程度。