Ⅰ 急求助！！！土壤蔗糖酶活性採用3，5二硝基水楊酸比色法測定的詳細步驟！！！
土壤蔗糖酶測定（比色法）
1. 方法選擇及原理
蔗糖酶能酶促蔗糖水解生成葡萄糖和果糖。蔗糖酶活性的測定方法有用酶學的方法測量所產生的葡萄糖（滴定法或重量法）或是根據蔗糖的非還原性，用生成物（葡萄糖和果糖）能夠還原菲林溶液中的銅，再根據生成的氧化亞銅的量求出糖的含量。也可根據蔗糖水解的生成物與某種物質（3，5-二硝基水楊酸或磷酸銅）生成有色化合物進行比色測定。還有一種方法，根據蔗糖液酶促反應前後光偏振面的變化（旋光法）進行測定。
目前，我國常用的主要是硫代硫酸鈉滴定法，它是測定土壤蔗糖酶活性的經典方法。3，5-二硝基水楊酸比色法重現性較好，且手續較簡便，適於成批樣品測定。
測定土壤蔗糖酶活性時，均以蔗糖為基質，蔗糖液濃度范圍為5-20％。在酸性介質中，蔗糖酶活性最大。為保持該酶最適pH，多使用下列緩沖液：醋酸鹽緩沖液（pH4.5-5.5），磷酸鹽緩沖液（pH4.9-5.5），醋酸鹽-磷酸鹽緩沖液（pH5.5）。 2. 試劑配製
（1）3，5-二硝基水楊酸溶液：稱0.5g二硝基水楊酸，溶於20ml 2N氫氧化鈉和50ml水中，再加18.2g酒石酸鉀鈉，用水稀釋至100ml（不超過7天）。
（2）pH5.5磷酸緩沖液：1/15M磷酸氫二鈉（11.867g Na2PO4•2H2O溶於1L蒸餾水中）0.5ml加1/15M 磷酸二氫鉀（9.078KH2PO4溶於1L蒸餾水中）9.5ml即成。 （3）8％蔗糖溶液。 （4）甲苯。
（5）標准葡萄糖溶液：將葡萄糖先在50-58℃條件下，真空乾燥至恆重。然後取500mg溶於100ml 12mmol苯甲酸溶液中（5mg還原糖/ml），即成標准葡萄糖溶液。
標准曲線繪制：取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml含5mg還原糖/ml的標准葡萄糖溶液到50ml容量瓶中，與測定蔗糖酶活性同樣的方法進行顯色。 3. 試驗步驟
稱取2.***g新鮮土，置於50ml三角瓶中，注入15ml 8％蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸緩沖液和0.25ml甲苯。搖勻混合物後，放入恆溫箱，在37℃下培養24h。到時取出，迅速過濾。從中吸取濾液1ml，注入50ml容量量瓶中，加3ml 3，5-二硝基水楊酸，並在沸水的水浴鍋中加熱5min，隨即將容量瓶移至自來水流下冷卻3min。
溶液因生成3-氨基-5-硝基水楊酸而呈橙黃色，最後用蒸餾水稀釋至50ml，並在分光光度計上於波長508nm處進行比色。
為了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的誤差，每一土樣需做無基質（無蔗糖）對照，整個試驗需做無土壤對照。 4. 結果計算
蔗糖酶活性以24h後1g土壤葡萄糖的毫克數表示。 葡萄糖（毫克）＝a×50×ts/m a－顯色液中葡萄糖濃度（mg/ml）， 50－顯色液體積（ml）；
ts－分取倍數（吸1ml濾液比色就是20/1）； m－烘乾土質量（g）。
Ⅱ 土壤纖維素酶活性的測定方法
2g鮮土，加入100ml血清瓶中，8ml1%羧甲基纖維素，再加入2ml pH5.5的磷酸緩沖液，再加入0.6ml甲苯，72h(37℃)培養過濾，取2ml濾液，加入3ml3.5-二硝基水楊酸，水沸5min，定容到25ml，540nm處比色。