❶ DNA檢測的方法都有哪些
DNA檢測
技術有很多,主要分為定性和定量方法。給你舉幾個:1,分子雜交技術,(包括southern雜交,northern雜交,基因晶元等)分子雜交分析的基本原理是基於DNA探針檢測變性而且固定在硝酸纖維素膜上的宿主細胞DNA。這些探針可以不依賴宿主細胞DNA來制備,例如用隨機引物制備探針。探針上標記酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由於地高辛標記核酸探針,操作方便、靈敏度高,已標記的探針在4℃貯存可達兩年之久,方便隨時應用,所以現在常採用地高辛標記核酸探針,用游標記法將光敏Dig標記到探針上,製成光敏-Dig-核酸探針,再與固定在硝酸膜上的靶核酸進行靶DNA分子雜交,使之與抗Dig-鹼性磷酸酶結合,最後可用不同的檢測方式進行檢測,
發光檢測
和顯色檢測均可,靈敏度可達10pg以下2,基於DNA結合蛋白的方法Threshold®
Immunoassay分析系統是基於兩種DNA序列非特異性蛋白,單鏈DNA(ssDNA)結合蛋白(SSB)和抗ssDNA
的單抗。檢測的基本過程是當生物素—DNA單鏈結合蛋白和尿素酶—抗ssDNA
的單抗與變性的宿主細胞DNA結合最終形成復合物,通過親合素將此復合物連接到生物素—硝酸纖維素膜,在通過洗滌所有非特異性的被洗脫掉,最後放於有
尿素溶液
的讀數儀,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2
導致PH值發生變化,讀數儀根據PH值的變化換算成DNA的量,從而達到檢測殘余DNA含量的目的。3,PCR法,其中以實時定量PCR法最為突出熒光定量
PCR是基於PCR擴增時,在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,產物的增加可以通過熒光信號指示,通過實時監控PCR體系中的熒光信號,對樣本中初始模板進行定量分析。定量PCR可實時檢測產物量,通過加入已知濃度的
標准樣品
繪制標准曲線,然後根據待測樣品在標准曲線中的位置推算初始模板的濃度,從而達到檢測殘余DNA含量的目的。此外,對DNA的定量技術也有很多,可以看下這篇文章《核酸定量技術及其在生物檢測中的應用》