① 快速檢測試劑使用要求主要有哪些
快速檢測方法是指從樣品制備到出具檢測結果的整個檢測過程能夠在短時間內完成的檢測方法,包括在樣品制備、實驗准備、操作過程中和自動化上加以簡化的方法。目前,國際上對「短時間」的共識主要在於三個方面。①對於理化指標的檢測分析在2 h 內完成。②應用於現場檢查的能夠在30 min 內完成。③與傳統方法相比,能夠縮短1/2 或1/3 的時間。
一、農葯殘留檢驗
1.農殘快速檢測卡
農殘快速檢測卡是一種生化測定方法,利用酶抑製法,通過比色能夠快速測定果蔬中有機磷和氨基甲酸酯類農葯殘留。定性檢測,適用於大量樣品的初篩。
2.農葯殘留快速檢測儀
根據國標酶抑制率法原理,在一定條件下,有機磷和氨基甲酸酯類農葯對膽鹼酯酶正常功能有抑製作用,其抑制率與農葯的濃度呈正相關。正常情況下,酶催化神經傳導代謝產物(乙醯膽鹼)水解,其水解產物與顯色劑反應,產生黃色物質,用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間的變化值,計算出抑制率,通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農葯的存在並測定其含量。
② 國標水分的檢測方法
水分測定方法有許多種,我們在選擇時要根據食品的性質來選擇。常採用的水份測定方法如下:
1、熱乾燥法:
① 常壓乾燥法(此法用的廣泛);
② 真空乾燥法(有的樣品加熱分解時用);
③ 紅外線乾燥法(此法用的廣泛);
④ 真空器乾燥法(乾燥劑法);
2、蒸餾法
3、卡爾費休法
4、水分活度AW的測定
下面我們分別講述測定水分的方法。
一、常壓乾燥法
1、特點與原理
⑴特點:此法應用zui廣泛,操作以及設備都簡單,而且有相當高的度。
⑵原理:食品中水分一般指在大氣壓下,100℃左右加熱所失去的物質。但實際上在此溫度下所失去的是揮發性物質的總量,而不完全是水。
2、乾燥法必須符合下列條件(對食品而言):
⑴水分是*揮發成分
這就是說在加熱時只有水分揮發。例如,樣品中含酒精、香精油、芳香脂都不能用乾燥法,這些都有揮發成分。
⑵水分揮發要完全
對於一些糖和果膠、明膠所形成凍膠中的結合水。它們結合的很牢固,不宜排除,有時樣品被烘焦以後,樣品中結合水都不能除掉。因此,採用常壓乾燥的水分,並不是食品中總的水分含量。
⑶食品中其它成分由於受熱而引起的化學變化可以忽略不計。
例:還原糖+氨基化合物△→ 變色(美拉德反應)+H2O↑
還有H2C4H4O6(酒石酸)+ 2NaHCO3 → NaC4H4O6(酒石酸鈉)+2H2O+2CO2
發酵糖(NaHCO3+KHC4H4O6)△ →H2O+CO2+ NaKC4H4O6
高糖高脂肪食品不適應
只看符合上面三點就可採用烘箱乾燥法。烘箱乾燥法一般是在100~105℃下進行乾燥。
我們講的上面三點,應該是具體的具體分析,對於一個分析工作人員,或者是一個技術員,雖然乾燥法必須符合三點要求,那麼我們在只有烘箱的情況下,而且蓑紅樣品不見得符合以上講的三點,難道就不測水分嗎?
例如,啤酒廠要經常測啤酒花的水分,啤酒花中含有一部分易揮發的芳香油。這一點不符合我們的*點要求,如果用烘箱法烘,揮發物與水分同時失去,造成分析誤差。此外,啤酒花中的α—酸在烘乾過程中,部分發生氧化等化學反應,這又造成分析上的誤差,但是一般工廠還是用烘乾法測定,他們一般採取低溫長時間(80~85℃烘4小時),或者高溫短時(105℃烘1小時)
所以應根據我們所在的環境和條件選擇合適的操作條件,當然我們應該首先明白有沒有揮發物和化學反應等所造成的誤差。
3、烘箱乾燥法的測定要點
⑴取樣(稱樣)
在采樣時要特別注意防止水分的變化,對有些食品例如奶粉、咖啡等很容易吸水,在稱量時要迅速,否則越稱越重。
⑵乾燥條件的選擇
三個因素:①溫度;②壓力(常壓、真空)乾燥;③時間。
一般是溫度對熱不穩定的食品可採用70~105℃;溫度對熱穩定的食品採用120~135℃。
4、操作方法
清洗稱量皿→烘至恆重→稱取樣品→放入調好溫度的烘箱(100~105℃)→烘1.5小時→於乾燥器冷卻→稱重→再烘0.5小時→稱至恆重(兩次重量差不超過0.002g即為恆重)
*油脂或高脂肪樣品,由於脂肪氧化,而後面一次重量反而增加,應以前一次重量計算。
*對於易焦化和容易分解的食品,可以選用比較低的溫度或縮短乾燥時間。
*對於液體與半固體樣品,要在稱量皿中加入海砂,使樣品疏鬆,擴大蒸發的接觸面,並且用一個玻璃棒作為容器。先放到沸水浴中烘,烘的差不多,再放到烘箱烘,否則不加海砂樣品容易使表面形成一層膜,造成水分不易出來,另外易沸騰的液體飛沫使重量損失。
計算:水分= G2- G1 / W
固形物(%)=100 -水分%
G1 —— 恆重後稱量皿重量(g)
G2 —— 恆重後稱量皿和樣品重量(g)
W —— 樣品重量(g)
固形物 —— 指食品內將水分排除以後的全部殘留物。其組分有蛋白質、脂肪、粗纖維、無氮抽出物和灰分等。
5、烘箱乾燥法產生誤差的原因
⑴樣品中含有非水分易揮發性物質(酒精、醋酸、香精油、磷脂等);
⑵樣品中的某些成分和水分的結合,使測的結果偏低(如蔗糖水解為二分子單糖),主要是限制水分揮發;
⑶食品中的脂肪與空氣中的氧發生氧化,使樣品重量增重;
⑷在高溫條件下物質的分解(果糖對熱敏感);
果糖C6H12O6大於70℃△→C6H6O3+ 3H2O
⑸被測樣品表面產生硬殼,妨礙水分的擴散;尤其是對於富含糖分和澱粉的樣品;
⑹烘乾到結束樣品重新吸水。
二、真空乾燥法
1、原理:利用較低溫度,在減壓下進行乾燥以排除水分,樣品中被減少的量為樣品的水分含量。
本法適用於在100℃以上加熱容易變質及含有不易除去結合水的食品。其測定結果比較接近真正水分。
2、操作方法
准確稱2.00~5.00g樣品→於烘至恆重的稱量皿→至真空烘箱→70℃、真空度93.3~98.6KPa(700~740mmHg)→烘5小時→於乾燥皿冷卻→稱至恆重
計算:水分= G / W
G —— 樣品中乾燥後的失重(g)
W —— 樣品重量(g)
真空乾燥法測水分,一般用於100℃以上容易變質、破壞或不易除去結合水的樣品,如糖漿、味精、砂糖、糖果、蜂蜜、果醬和脫水蔬菜等樣品都可採用真空乾燥法測定水分。
三、蒸餾法測定水分(迪安—斯達克)
蒸餾發出現在二十世紀初,當時它採用沸騰的有機液體,將樣品中水分分離出來,此法直到如今仍在適用。
1、原理:把不溶於水的有機溶劑和樣品放入蒸餾式水分測定裝置中加熱,試樣中的水分與溶劑蒸汽一起蒸發,把這樣的蒸汽在冷凝管中冷凝,由水分的容量而得到樣品的水分含量。
2、步驟
准確稱2.00~5.00g樣品→於250ml水分測定蒸餾瓶中→加入約50~75ml有機溶劑→接蒸餾裝置→徐徐加熱蒸餾→至水分大部分蒸出後→在加快蒸餾速度→至刻度管水量不在增加→讀數
計算:
水分=V/W
V —— 刻度管中水層的容量ml
W —— 樣品的重量(g)
3、常用的有機溶劑及選擇依據
常用的有機溶劑有比水清的,也有比水重的。
苯甲苯二甲苯 CCl4
密度 0.88 0.86 0.86 1.59
沸點 80℃ 80℃ 140℃ 76.8℃
選擇依據:對熱不穩定的食品,一般不採用二甲苯,因為它的沸點高,常選用低沸點的有機溶劑,如苯。對於一些含有糖分,可分解釋放出水分的樣品,如脫水洋蔥和脫水大蒜可採用苯,要根據樣品的性質來選擇有機溶劑。
4、蒸餾法的優缺點
優點:
⑴熱交換充分
⑵受熱後發生化學反應比重量法少
⑶設備簡單,管理方便
缺點:
⑴水與有機溶劑易發生乳化現象
⑵樣品中水分可能完全沒有揮發出來
⑶水分有時附在冷凝管壁上,造成讀數誤差
對分層不理想,造成讀數誤差,可加少量戊醇或異丁醇防止出現乳濁液。
這種方法用於測定樣品中除水分外,還有大量揮發性物質,例如,醚類、芳香油、揮發酸、CO2等。目前AOAC規定蒸餾法用於飼料、啤酒花、調味品的水分測定,特別是香料,蒸餾法是*的、公認的水分檢驗分析方法。
四、卡爾—費休法
眾所周知,卡爾費休法是測定各種物質中微量水分的一種方法,這種方法自從1935年由卡爾費休提出後,一直採用I2、SO2、吡啶、無水CH3OH(含水量在0.05%以下)配製而成,並且國際標准化組織把這個方法定為國際標准測微量水分,我們國家也把這個方法定為國家標准測微量水分。
1、原理:在水存在時,即樣品中的水與卡爾費休試劑中的SO2與I2產生氧化還原反應。
I2 + SO2 + 2H2O → 2HI + H2SO4
但這個反應是個可逆反應,當硫酸濃度達到0.05%以上時,即能發生逆反應。如果我們讓反應按照一個正方向進行,需要加入適當的鹼性物質以中和反應過程中生成的酸。經實驗證明,在體系中加入吡啶,這樣就可使反應向右進行。
3 C5H5N+H2O+I2+SO2 → 2氫碘酸吡啶+硫酸酐吡啶
生成硫酸酐吡啶不穩定,能與水發生反應,消耗一部分水而干擾測定,為了使它穩定,我們可加無水甲醇。
硫酸酐吡啶 + CH3OH(無水)→ 甲基硫酸吡啶
我們把這上面三步反應寫成總反應式為:
I2+SO2+H2O+3吡啶+CH3OH2氫碘酸吡啶+甲基硫酸吡啶
從反應式可以看出1mol水需要1mol碘,1mol二氧化硫和3mol吡啶及1mol甲醇而產生2mol氫碘酸吡啶、1mol甲基硫酸吡啶。這是理論上的數據,但實際上,SO2、吡啶、CH3OH的用量都是過量的,反應完畢後多餘的游離碘呈現紅棕色,即可確定為到達終點。
I2︰SO2︰C5H5N = 1︰3︰10
2、卡爾費休試劑的配製與標定
若以甲醇作溶劑,則試劑中I2、SO2、C5H5N(含水量在0.05%以下)三者的克分子數比例為
I2︰SO2︰C5H5N = 1︰3︰10
這種試劑有效濃度取決於碘的濃度。新配製的試劑其有效濃度不斷降低,其原因是由於試劑中各組分本身也含有一些水分,但試劑濃度降低的主要原因是由一些副反應引起的,較高消耗了一部分碘。
這也說明了配製這種試劑要單獨配,分甲乙兩種試劑並且分別貯存,臨用時再混合,而且要標定。
甲液 I2的CH3OH溶液
乙液 SO2的CH3OH吡啶溶液
這種方法對試劑要求嚴格,要求甲醇、吡啶都是無水的,並且要求有KF水分測定儀(上海化工研究所制)
配製:
稱85gI2→於乾燥的有塞棕色燒瓶中→加670ml無水CH3OH→塞上瓶塞→振搖使I2全部溶解→加270ml吡啶→混勻→於冰水浴冷卻→通乾燥的SO2氣體60g→塞上瓶塞→於暗處24小時後標定使用
標定:
先加50ml無水甲醇→於反應器中→接通電源→啟動電磁攪拌器→用KF試劑滴入甲醇中使甲醇中尚殘留的痕量水分與試劑達到終點(即指針到達一定刻度,不記錄KF試劑用量)→保持一分鍾→用10μl注射器從反應器加料口注入10μl蒸餾水(相當於0.01g水)→電流表指針接近零點→用KF試劑滴定到原定終點→記錄
F =G*10
③ elisa試劑盒的測試要求
ELISA的實驗操作所要求的條件是比較嚴格的,無論是對實驗的硬體條件還是對實驗的操作人員的技術要求,都是如此。下面所提到的就是一些在進行ELISA實驗時所要注意的一些問題。
一、ELISA實驗通用規則
1、要保證移液槍的准確性,誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但最好有專業人員進行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體後,要更換槍頭。即使是吸取標准品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。
4、實驗時,要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
8、液體全部加完後,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
9、溫浴時,要用不幹膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發。
10、洗板時,每次洗液加入後,應靜置1分鍾,使清洗更加徹底。沒有洗板機時,倒去液體後,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
11、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配製PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉後可長期保存。
12、底物是光敏感的,要在臨用前現配。
13、檢測前,要打開酶標儀,使之穩定10分鍾以上。
14、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應盡量避免接觸。
15、待檢樣品要澄清,否則會影響結果。
16、溫浴時間應遵守試劑盒規定。
17、應盡量做雙孔實驗,這樣才能保證數據的准確性。
18、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
二、下面所提到的是針對我公司的ELISA產品會出現的問題及解決辦法
1. 加入反應終止液後,沒有吸光值或吸光值偏低。
a.原因:未加入酶標記物。
解決辦法:請按照操作步驟進行。
b.原因:試劑盒內容物未能充分回。
解決辦法:確定試劑盒內容物回溫後再進行操作。
c.原因:室溫太低。
解決辦法:若室溫太低(<19℃),請於操作步驟4,適當延長溫育時間。
d.原因:未使用試劑盒的清洗液清洗。
解決辦法: 請用試劑盒內所提供的清洗液清洗。
e.原因:試劑盒已過有效期限。
解決辦法:請更換成仍在有效期限內的試劑盒。
2. 標准曲線線性不佳,或是平行性不好。
a.原因:溫育位置避光不好或受到氣流干擾。
解決辦法: 請確認溫育位置既不透光也不透風(如抽屜內)。
b.原因:操作時間拖太久。
解決辦法:請在方法熟練後再進行操作。
c.原因:微孔間相互污染。
解決辦法: 加樣品時,請小心勿濺出微孔外,以免造成其它微孔的污染。
d.原因:標准品或酶標記物所加入的量不一致。
解決辦法:請使用已校正過的移液槍,並確保其與吸頭之間有高度密合性。
e.原因:添加樣品或試劑的操作方法不正確。
解決辦法:加樣品或試劑時,吸頭請勿接觸微孔。
f.原因:洗板過程發生問題(如管路堵塞、洗完板後未立刻進行下一步驟)。
解決辦法:請隨時監控洗板機洗板過程,洗完後立即進行下一步驟。
3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。
a.原因:室溫太高(>25℃)。
解決辦法: 若無法降低室內溫度,請適當縮短步驟4的溫育時間。
b.原因:底物溶液受到污染。
解決辦法: 若發現底物溶液已呈現淡藍色,請不要再使用。
c.原因:反應時間超過太久。
解決辦法:請控制反應時間。
d.原因:酶標記物污染了盒內其它試劑。
解決辦法:使用過的吸頭應立即丟棄,可避免試劑間相互污染,凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡,再以清水沖洗干凈,可確保無殘留)
4. 陰性標准品的吸光值低於陽性標准品的吸光值。
a.原因:微孔中的試劑未能充分混合。
解決辦法: 試劑加完後,需輕敲盤四周使其充分混合均勻。
b.原因:洗板過程發生問題(同2-f.)。
解決辦法:請參考2-f.
c.原因:添加樣品或酶標記物的量不一致。
解決辦法: 請參考2-d.
④ 中國葯典重金屬檢查第一法的試驗條件
中國毀薯飢葯典重金屬檢查第一法的試驗條件包括原理和適纖返用范圍以及試劑和設備。
1、原理:該方法是通過原子吸收分析技術,測定樣品中重金屬含量的多少。
2、適用范圍:適用於研究和生產過程中的中葯材及其制劑、化學葯品等物質的重金屬含量檢查。
3、試劑和設備:需要使用原子吸收分析儀和標准溶液等試劑和設備。
以上所述中國葯典重金屬檢查第一法的試驗條件,是指在進行該檢測方法時必須嚴格遵守的各種規范和要求,以保手斗證檢測結果的准確性和可靠性。