Ⅰ 求教各位關於乙醯膽鹼酯酶的提取和純化
石杉鹼甲
1、從中草葯千層塔中提取石杉鹼甲的方法
2、石杉鹼甲及其衍生物或其鹽的注射用緩釋微球及其制備方法
3、石杉鹼甲衍生物,其制備方法和用途
4、乙醯膽鹼酯酶抑制劑石杉鹼甲的提取方法
我公司與中國農業大學的專家合作，歷時3年研製開發的農葯殘毒快速檢測儀，以及與其配套的試劑乙醯膽鹼酯酶和酶片、顯色片日前獲國家專利。
這種農葯殘毒快速檢測儀，採用酶抑製法檢測有機磷及氨基甲酸酯類農葯殘留。運用固態可變光及樣液脫色去雜技術，使檢測誤差大大降低，所用酶源是山東京蓬生物葯業股份有限公司獨自從敏感家蠅頭部提取的乙醯膽鹼酯酶，檢測成本較進口酶低50%以上，儀器採用文字和語音雙重提示操作，使用簡便；四個檢測通道均能獨立檢測，互不影響，單獨檢測一個樣品只需10分鍾，如果連續檢測時間不超過2分鍾，農葯殘毒快速檢測儀，電源為3節一號干電池，打破了一般儀器不能用於田間地頭的情況。
檢測使用試劑（酶片、顯色片）採用了一系列新處理技術，使之常溫下即可儲存，使用起來也非常方便（用時剪下一片即可）。酶片中的乙醯膽鹼酯酶為我公司獨自從敏感家蠅中提取製做的（註：本公司為中國大陸唯一一家生產乙醯膽鹼酯酶的廠家），其敏感性和穩定性皆優於進口酶源
Ⅱ 生物利用度有哪兩種測定方法
目的：(1)建立和驗證同時測定人血漿中二甲雙胍、格列齊特濃度的LC/MS/MS方法。 (2)以深圳市中聯制葯有限公司研製的二甲雙胍格列齊特片為受試制劑，以市售格列齊特片(深圳市中聯制葯有限公司生產)及鹽酸二甲雙胍片(中美上海施貴寶制葯有限公司生產)為參比制劑，應用LC/MS/MS法，研究受試制劑與參比制劑的二甲雙胍、格列齊特人體生物利用度和生物等效性。 方法：(1)LC/MS/MS方法建立與確證：以乙腈為血漿蛋白沉澱劑對人血漿樣本進行處理，選用石杉鹼甲為內標物，以甲醇/水(含1％甲酸)/乙腈(30/31/39，v/v/v)為流動相、HypersilBDSC18為色譜柱；通過電噴霧電離(ESI)源正離子選擇反應監測(SRM)掃描方式進行LC/MS/MS分析，同時測定人血漿中二甲雙胍、格列齊特的濃度，並根據相關指導原則進行特異性、標准曲線、回收率、精密度與准確度、穩定性等方面的方法學確證。 (2)二甲雙胍格列齊特片人體生物利用度和生物等效性試驗研究：20例健康成年男性受試者隨機分組，自身對照，單次空腹口服葯物(鹽酸二甲雙胍片500mg及格列齊特片80mg或二甲雙胍格列齊特片500mg/80mg×2)。應用已確證的LC/MS/MS法測定受試者血漿中二甲雙胍和格列齊特的濃度，根據所得血漿濃度-時間數據計算各主要葯代動力學參數。 結果：(1)建立了同時測定人血漿中二甲雙胍、格列齊特濃度的LC/MS/MS方法，方法學驗證結果表明，該方法特異性好，無內源性雜質干擾。二甲雙胍在7.8～4678.9μg/L范圍線性良好，定量下限為7.8μg/L；格列齊特在10～10000μg/L范圍線性良好，定量下限為10μg/L。二甲雙胍批內RSD為5.8％～8.2％，批間RSD為5.1％～7.3％；格列齊特批內RSD為7.5％～10.7％，批間RSD為8.1％～12.5％。二甲雙胍的平均提取回收率為71.0％～83.6％，平均相對回收率為96.1％～109.4％；格列齊特的平均提取回收率為88.1％～104.0％，平均相對回收率為91.5％～103.7％。血漿樣品在室溫放置4h，二甲雙胍偏差為-11.0％～-6.5％，格列齊特偏差為7.9％～10.6％。血漿樣品凍融2次，二甲雙胍偏差為-2.1％～2.7％，格列齊特偏差為10.0％～11.3％。血漿樣品提取液在室溫放置12h，二甲雙胍偏差為0.8％～5.6％，格列齊特偏差為-3.5％～1.8％。血漿樣品冰凍(-30℃)39d，二甲雙胍偏差為-16.7％～7.4％，格列齊特偏差為-1.6％～11.8％。 (2)二甲雙胍格列齊特片人體生物利用度和生物等效性試驗研究結果：參比制劑與受試制劑二甲雙胍的Cmax分別為1161.7±307.9μg/L及1264.4±275.0μg/L；Tmax分別為1.9±1.0h及2.0±0.8h；t1/2分別為4.6±0.9h及4.1±0.6h；AUC0-t分別為7132.9±1956.1μg/L·h及7758.5±2096.4μg/L·h；AUC0→∞分別為7287.3±1988.9μg/L·h及8063.6±2069.0μg/L·h；受試制劑相對於參比制劑的生物利用度為111.2％±23.6％；90％可信限：Cmax為101.7％～119.4％，AUC0-t為99.8％～118.5％，AUC0→∞為99.9％～123.3％。參比制劑與受試制劑格列齊特的Cmax分別為4958.8±771.2μg/L及5266.7±880.2μg/L；Tmax分別為3.9±0.8h及3.5±1.0h；t1/2分別為12.6±4.8h及12.4±4.4h；AUC0-t分別為75804.7±34103.4μg/L·h及76752.9±33971.9μg/L·h；AUC0→∞分別為82114.4±43993.4μg/L·h及81567.9±44203.9μg/L·h；受試制劑相對於參比制劑的生物利用度為103.4％±16.6％；90％可信限：Cmax為100.5％～111.8％，AUC0-t為95.5％～109.2％，AUC0→∞為92.4％～107.4％。 結論：(1)建立和確證了一種能同時測定人血漿中二甲雙胍、格列齊特濃度的LC/MS/MS方法。方法學確證結果表明，該方法簡便可靠，具有特異性強、精密度與准確度高、靈敏度好等特點。 (2)等劑量下二甲雙胍格列齊特片(受試制劑)與參比制劑(鹽酸二甲雙胍片)的二甲雙胍具有生物等效性，二甲雙胍格列齊特片(受試制劑)與格列齊特片(參比制劑)的格列齊特具有生物等效性。