『壹』 膽固醇測定及游離膽固醇測定方法
（一）膽固醇概況
1.存在形式：血漿膽固醇包括膽固醇酯和游離膽固醇兩種，前者約佔70%，後者佔30%。
2.來源：食物、體內合成。（提供內源性膽固醇的90%）
肝臟是合成膽固醇的主要器官，合成的原料是乙醯CoA,合成的關鍵酶是HMGCoA還原酶，臨床治療所用的他汀類葯物主要是抑制該關鍵酶。
血漿和組織中所含膽固醇經常處於交換狀態，其交換率因不同組織而異，由於醫學.育網收集整理膽固醇不斷進、出血液，所以血漿膽固醇不僅反映膽固醇攝取與合成的情況，還反映攜帶膽固醇的各種脂蛋白的合成速度，以及影響脂蛋白代謝的受體的情況。
血漿膽固醇主要存在LDL中，其次為HDL和VLDL，CM中含量最少。
3.主要功能：
①是所有細胞膜和亞細胞器膜上的重要組成成分；
②是膽汁酸的唯一前體；
③是所有類固醇激素（性激素、腎上腺皮質激素）的前體等。
④是維生素D合成的前體。
（二）檢測
1.方法：
化學法曾於很長一段時間用於常規檢查，醫學.育網收集整理一般包括：①抽提；②皂化；②毛地黃皂苷沉澱純化；④顯色比色四個階段。其操作復雜，干擾因素多，現多已不用，代表性的方法是省去③步驟的Abell-Kendall法，現作為標准參考方法予以利用。現臨床應用膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶及過氧化物酶的方法，快速准確，標本用量小，可完全在自動生化分析儀上操做，適於大批量標本的檢查。
膽固醇酯首先在膽固醇酯酶的催化下水解成游離膽固醇，膽固醇在膽固醇氧化酶的催化下生成過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶的催化下以Trinder反應顯色測定。
2.參考值：
TC水平因生活條件（飲食、運動等）而異，隨年齡上升。
中青年男性略高於女性，老年女性高於男性。
我國血脂異常防治建議：
以≤5.17mmol／L（200mg／dl）為合適水平；
5.20～5.66mmol／L（201mg／dl～219mg／dl）為臨界范圍（或邊緣升高）；
≥5.69mmol／L（220mg／dl）為升高。
（三）臨床意義：
1.膽固醇升高：
膽固醇是動脈粥樣硬化的重要危險因素之一。
膽固醇升高容易引起動脈粥樣硬化性心、腦血管疾病如冠心病、心肌梗死，腦卒中等。
膽固醇為一個診斷指標來說，它既不夠特異，也不夠敏感，所以不能作為診斷指標，只能作為評價動脈粥樣硬化的危險因素，而最常用做動脈粥樣硬化的預防、發病估計、治療觀察等的參考指標。
膽固醇升高可見於各種高脂蛋白血症、梗阻性黃疸、腎病綜合征、甲狀腺功能低下、慢性腎功能衰竭、糖尿病等時。
此外，吸煙、飲酒、緊張、血液濃縮等也都可使血液膽固醇升高。
妊娠末三個月時，可能明顯升高，產後恢復原有水平。
2.膽固醇降低：
可見於各種脂蛋白缺陷狀態、肝硬化、惡性腫瘤、營養吸收不良、巨細胞性貧血等。
女性月經期也可降低。
『貳』 測膽固醇的實驗題1.舉例說明膽固醇測定的其它方法。 2.實驗中樣品皂化的作用是什麼
一、膽固醇測定的方法包括：直接皂化比色法、氧化酶法、氣相色譜法、高效液相色譜法。本實驗使用的是直接皂化比色法。
1.直接皂化比色法：當固醇類化合物與酸作用時，可脫水並發生聚合反應，產生顏色物質。因此可先對食品樣品進行皂化和提取，用硫磷鐵試劑作為顯色劑，測定食品中膽固醇的含量。步驟：①抽提；②皂化；③毛地黃皂苷沉澱純化；④顯色比色四個階段。
2.氧化酶法：血清中的膽固醇酯(CE)被膽固醇酯水解酶(CEH)水解成游離膽固醇(Chol)，後者被膽固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—膽甾烯酮，並產生過氧化氫，再經過氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林與酚(三者合稱PAP)，生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應)。醌亞胺的最大吸收在500nm左右，吸光度與標本中總膽固醇呈正比。步驟：在樣品的冰乙酸提取液中加磷硫鐵試劑，膽固醇與試劑反應產生紫紅色化合物，顏色的深淺與膽固醇的量成正比，可用分光光度計在波長560nm•處測定。
3.氣相色譜法：取樣時，由於氣相色譜儀進樣少，應嚴格控制樣品質量。由於內標物5-α-膽甾烷不被皂化，可先加入與樣品混勻。利用皂化反應RCOOR′+NaOH→RCOONa+ROH的原理，使樣品中的主要成分油脂通過遇苛性鹼水解成用來製造肥皂脂肪酸鈉或鉀和甘油，而非皂化物膽固醇和內標物仍穩定存在。利用皂化的水解產物（脂肪酸鈉或鉀和甘油）易溶於水而膽固醇和內標物不溶於水的特點進行萃取，得到溶有膽固醇和內標物的石油醚溶液。棄去的的水相經兩次石油醚提取後基本回收殘留在水相中的膽固醇和內標物。得到的石油醚溶液進行吹乾後可取1μL進行氣相色譜法檢測。
4.高效液相色譜法：提要樣品中膽甾醇用適當有機溶劑提取，得到膽甾醇和脂類物質的混合物，經皂化後除去脂類干擾物，再用適當的有機溶劑提取膽甾醇，以高效液相色譜儀測定 。
二、實驗中樣品皂化的作用是：
利用皂化反應RCOOR′+NaOH→RCOONa+ROH的原理，使樣品中的主要成分油脂通過遇苛性鹼水解成用來製造肥皂脂肪酸鈉或鉀和甘油，而非皂化物膽固醇和內標物仍穩定存在。利用皂化的水解產物（脂肪酸鈉或鉀和甘油）易溶於水而膽固醇和內標物不溶於水的特點進行萃取，從而去除其他脂類干擾物，減少干擾，提高測試精度。