番茄核酸檢測方法

❶ 核酸的檢測方法有哪幾種

核酸的檢測方法並不只是有一種的，具體核酸的檢測方法有哪幾種呢？

核酸檢測採用咽拭子檢測，有口咽拭子采樣和鼻咽拭子采樣兩種方式。口咽拭子采樣就是在咽喉部位用棉簽塗擦，取咽喉部上皮細胞的檢測，檢測方法一般是受檢測者張口發出「啊——」的聲音，檢測人員用棉簽採取樣本，檢測過程並沒有創傷風險，是非常安全的檢測。還有是鼻咽拭子採集，一般是將一根細棉簽深入鼻孔，從下鼻道深入抵達鼻咽後壁，然後捻轉棉簽取樣，一般檢測很有可能會有嘔吐的感覺，所以需要忍耐一下。

陽性(+)和陰性(-)是實驗結果的判別方式之一，被稱為定性檢查。核酸檢測陽性代表感染了病毒。核酸檢測的操作要求較高，若因采樣不當導致樣本病毒含量低，或運輸儲存條件不當等情況，都有可能導致核酸檢測可能出現假陰性結果。

❷ 核酸檢驗方法

核酸檢測具體流程如下：
1. 核酸提取
使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。
2. 逆轉錄合成cDNA
逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
3. PCR擴增反應（使用二次擴增的套式PCR擴增方法）
PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
4. 擴增產物定性分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或熒光探針雜交等原理測定。
5.結果判定和完成報告單
（1）實驗成立的條件：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
（2）HIV核酸檢測陽性：發現核酸陽性反應，應該重復採集樣品進行復測，復測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性，復測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果，需進一步隨訪檢測。
（3）HIV核酸檢測陰性：只可報告本次實驗結果陰性。
（4）應在完成檢測後5個工作日內發出檢測報告。

❸ 核酸檢測的方式有幾種

核酸定量常用方法如下：
1、光吸收法：核酸中鹼基共軛結構在近紫外光波長260納米處有最大吸收，吸收強度與核酸濃度成正比，因此可以用於核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量約為0.095，因此可以通過測定樣品中的有機P量來進行核酸定量。核酸簡介：核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質之一。核酸廣泛存在於所有動植物細胞、微生物體內，生物體內的核酸常與蛋白質結合形成核蛋白。不同的核酸，其化學組成、核苷酸排列順序等不同。根據化學組成不同，核酸可分為核糖核酸和脫氧核糖核酸。DNA是儲存、復制和傳遞遺傳信息的主要物質基礎。RNA在蛋白質合成過程中起著重要作用，其中轉運核糖核酸，簡稱tRNA，起著攜帶和轉移活化氨基酸的作用；信使核糖核酸，簡稱mRNA，是合成蛋白質的模板；核糖體的核糖核酸，簡稱rRNA，是細胞合成蛋白質的主要場所。

❹ 花卉類病毒的診斷和鑒定方法有哪些

類病毒因為不具有外殼蛋白，所以不能用血清學、電鏡等方法來診斷和檢測。類病毒常用的檢測方法有生物學檢測、雙向電泳、RT-PCR和分子雜交等方法。

1 生物學檢測

利用類病毒的特異鑒別寄主來診斷和檢測。如菊花矮化類病毒（CSVd），可以從待檢樣品中抽提低分子RNA，接種到特定的指不植物，如菊花的Mistletm品種、爪哇三七（Gynura auanyiana）、番茄（Lycopersicon esculentum）。接種緩沖液的組成是100mmolTris，10mmolEDTA，pH7.5。接種時用沾有接種原的剎須刀在菊花和爪哇三七的莖部輕輕切割5～10刀，再用棉棒塗抹。番茄可以用4～5葉期的幼苗直接用塗抹法接種。被接種植物放在30℃左右的溫室培育，觀察症狀。接種36d後，菊花上出現黃色斑點，頂葉較少，從上數第3～5葉上症狀更明顯。接種45d後，爪哇三七出現頂葉捲曲症狀。但沒有柑橘裂皮病類病毒接種時症狀明顯。接種60d後，番茄上不表現任何症狀。但回接菊花的Mistletm品種，證明CSVd在番茄上屬於潛伏侵染。

生物檢測需要嚴格的溫度條件，如果溫度條件控制不嚴格便難以得到可信的結果。此外，檢測批量樣品，還需要較大的空間。

22 雙向電泳檢測

2.1 核酸的抽提

抽提緩沖液的組成為0.13mol Tris-HCl、0.017mol EDTA、1mol LiCl、0.83%DS，5%PVP，簡稱為TESLP。1g鮮菊花葉片加2～5倍體積的TESLP緩沖液磨碎，加入等體積的水飽和酚∶氯仿（1∶1）處理，離心分離後用乙醇沉澱回收全核酸。之後用methoxy ethaml除去多糖，用CTAB回收核酸，加等體積的4mol的LiCl，離心回收2mol LiCl的可溶組分，用乙醇沉澱濃縮後溶於適當體積的TE（10mmol Tris-HCl，1mmol EDTA，pH8.0）溶液中。

2.2 正反向電泳

按照Singh等的方法進行。首先在室溫下用1倍TBE電泳緩沖液分離核酸，直到染料XC-FF達近底部的7.5%為止。然後換成加熱到沸騰的0.125倍TBE電泳緩沖液，顛倒正負極並用表面加熱器保持電泳板的溫度在80℃以上，直到染料XC-FF到達膠的上端。電泳完後用銀染色觀察核酸的有無（圖1）。

圖1 正反向電泳法檢測菊花矮化類病毒RNA示意圖

與生物接種相比，正反向電泳凝膠電泳檢測菊花矮化類病毒，可以從相當於2.8mg鮮重的菊花樣品中檢測到菊花矮化類病毒CSVd，並同時可檢測10～20個樣品材料。總之，制備用於正反向電泳的粗核酸的方法簡便，需要的鮮葉量少，可以作為該類病毒的常規檢測方法。正反向電泳凝膠電泳與雙向凝膠電泳比較，省去了第一項電泳完後割膠回收的試驗步驟，操作更為簡便。

❺ 核酸幾種方法

1.定磷法。簡單快捷，靈敏度高，但易受蛋白質和核苷酸影響。
2.定糖法。靈敏度高，但特異性差，戊糖也會產生反應，容易產生干擾。
3.紫外線吸收法。適用於濃度大的核酸溶液，而人體感染新冠病毒後，咽部所含的病毒量極少，無法通過此種方法被檢測。
4.熒光法。目前廣泛被使用的是熒光定量RT-PCR檢測法，通過對標本進行逆轉錄擴增、使病毒片段達到一定數量，可以被檢測到，但是由於受采樣標本、運輸等多種因素影響，也有假陰性的可能。

❻ 核酸檢測方法

核酸檢測採用咽拭子檢測，有口咽拭子采樣和鼻咽拭子采樣兩種方式。

口咽拭子采樣就是在咽喉部位用棉簽塗擦，刷取咽喉部位上皮細胞的檢測。受檢測者只要放鬆心情，張口發出「啊——」的聲音就可以了，檢測過程並沒有創傷風險，是非常安全的檢測。

檢測時可能會有惡心、想要嘔吐的不適感覺，不過這些不適症狀通常只需要半分鍾到兩分鍾左右就可以完全緩解了。鼻咽拭子采樣是將一根細棉簽深入鼻孔，從下鼻道深入抵達鼻咽後壁，然後捻轉棉簽取樣。棉簽進入鼻腔的深度約為鼻尖到耳垂的距離。

(6)番茄核酸檢測方法擴展閱讀：

核酸檢測相關知識：

核酸檢測是檢測病毒的方法，它可以更早發現感染。現在臨床中對乙肝、丙肝、艾滋病都開展了核酸檢測，可以在抗體產生前檢測到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通過咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸檢測來判斷是否感染，以及推測是否具有傳染性。

季節性流感、禽流感、冠狀病毒感染等通過咽拭子檢測可以方便地判斷出上呼吸道是否存在病毒成份，從而判斷被檢測者是否屬於感染者。

新冠病毒的核酸檢測已經是比較成熟的檢測方法了，只要在咽喉部位擦拭幾秒鍾就可以採集到標本。通過分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分，可以盡早發現感染者，甚至在感染者出現症狀前就可以檢測到陽性。

感染者經過隔離治療後咽拭子檢測陰性說明病毒已經清除，不具有傳染性了。目前兩次咽拭子核酸檢測陰性是確診病例和無症狀感染者解除隔離的標准之一。