檢測人參中人參皂苷的方法及過程

1. 紅參的化學鑒定

（1）取本品粉末0.5g，加乙醇5ml，振搖5min，濾液1ml，置蒸發皿中蒸干，滴加三氯化銻氯仿飽和溶液，再蒸干，顯紫色。（檢查紅參皂甙）
（2）薄層層析：取本品粉末1g，加氯仿40ml，置水浴上加熱迴流1h，棄去氯仿液，葯渣揮干溶劑，加0.5ml拌勻濕潤後，加水飽和的正丁醇10ml，超聲處理30min，吸取上清液，加氨試液3倍量，搖勻放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取紅參對照葯材1g，同法製成對照葯材溶液。再取紅參皂甙Rb1、Re、Rg，加甲醇製成每1ml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液。吸到上述3種溶液各1-2μl，分別點於同一硅膠G薄層板（厚0.5mm）上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘數分鍾，分別置日光及紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照溶液色譜相應的位置上，分別顯相同顏色的斑點或熒光斑點；在與對照品色譜相應的位置上，分別顯相同顏色的斑點或熒光斑點；在與對照品色譜相應的位置上，日光下顯相同的3個紫紅色斑點，紫外燈（365nm）下顯相同的一個黃色和兩個橙色熒光斑點。
（3）取紅參粉末（40目）1g，加7%硫酸的乙醇-水（1：3）溶液10ml，加熱迴流2h，放冷後，用氯仿振搖提3次（10,5，5ml），氯仿液以水振搖洗滌後，用無水硫酸鈉脫水，濾過，氯仿液蒸干，以甲醇1ml溶解，供點樣；以紅參三醇，紅參二醇、齊墩果酸為對照品。分別點樣於硅膠G薄層板上，以氯仿-乙醚（1：1）展開，展距約12cm。硫酸-水（1：1）噴霧後，於105℃烘烤顯色。樣品應顯5個以上斑點，其中應有與人參三醇、人參二醇、齊墩果酸相對應的斑點各一點。
含量測定
紅參照高效液相色譜法（附錄ⅥD）測定。 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.05%磷酸溶液（99：400）為流動相；檢測波長為203nm。理論板數按人參皂苷Re峰計算應不低於2500。對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品12.5mg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取5ml,置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；另精密稱取人參皂苷Rg1對照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻,即得（每1ml中含人參皂苷Rg10.4mg；含人參皂苷Re0.25mg）。供試品溶液的制備取本品粉末（過四號篩）約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿40ml，加熱迴流3小時，棄去氯仿液，葯渣揮去氯仿，連同濾紙筒移至100ml具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇50ml，密塞，放置過夜，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）30分鍾，濾過，精密量取續濾液25ml，置蒸發皿中，蒸干，殘渣加甲醇溶解並轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取上述兩種對照品溶液各10μl與供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品含人參皂苷Rg1（C42H72O14）和人參皂苷Re（C48H82O18）的總量不得少於0.20%。

2. 皂苷的檢測方法

本方法適用於功能性食品中總皂苷的測定

本方法人參皂苷Re的低檢出量為2μg/mL

一、方法提要

樣品中總皂苷經提取、PT—大孔吸附樹脂柱預分離後，在酸性條件下，香草醛與人參皂苷生成有色化合物，以人參皂苷Re為對照品，於560nm處比色測定。

二、儀器

1.722分光光度計。

2.PT—大孔吸附樹脂柱(河北省津楊濾材廠)。

3.超聲波振盪器。

三、試劑

1.甲醇(分析純)

2.乙醇(分析純)

3.人參皂苷Re標准品(中國葯品生物製品檢定所)

4.5%香草醛溶液：稱取5g香草醛，加冰乙酸溶解並定容至l00mL

5.高氯酸(分析純)

6.冰乙酸(分析純)

7.人參皂苷Re標准溶液：稱取人參皂苷Re標准品20.0mg，用甲醇溶解並定容至10mL，即每1mL含人參皂苷Re2.0mg

8.重蒸水

四、測定步驟

1.樣品處理：

(1)固體樣品

稱取1.0g左右樣品於100mL燒杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超聲波振盪30min，再定容至50mL，搖勻，放置，吸取上清液1.0mL揮干後以水溶解殘渣，進行柱分離

(2)液體樣品

含乙醇的酒類樣品：准確吸取1.0mL樣品放於蒸發皿中，蒸干，用水溶解殘渣，用此液進行柱層析；非乙醇類液體樣品：准確吸取1.0mL樣品(如濃度高或顏色深，需稀釋一定體積後再取1.0mL)直接進行柱分離

2.柱層析

以PT—大孔吸附樹脂柱進行層析分離，准確吸取上述已處理好的樣品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性雜質，棄去洗脫液，再用20mL85%乙醇洗脫總皂苷，收集洗脫液於蒸發皿中，於水浴上蒸干，以此作顯色用

3. 人參總皂苷的特徵圖譜

照高效液相色譜法( 附錄 Ⅵ D) 測定。色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（柱長 25cm ，內徑 4.6mm ，粒徑 5μm ，載碳量 11% ）；以乙腈為流動相 A ，以 0.1% 磷酸溶液為流動相 B ，以下表進行梯度洗脫；柱溫為 30 ℃ ；檢測波長為 203nm ；流速為每分鍾 1.3ml 。理論板數按人參皂苷 Re 峰計算應不低於 6000 ，按人參皂苷 Rd 峰計算應不低於 200000 。時間（分鍾）流動相 A （%）流動相 B （%） 0 ～ 30 19 81 30 ～ 35 19→24 81→76 35 ～ 60 24→40 76→60 參照物溶液的制備分別取人參皂苷 Re 和人參皂苷 Rd 對照品適量，加甲醇製成每 1ml 各含 0.5mg 的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品適量，加甲醇製成每 1ml 含 2mg 的溶液，用 0.45μm 濾膜濾過，即得。測定法精密吸取供試品溶液及參照物溶液各 10μl ，分別注入液相色譜儀，記錄 60 分鍾的色譜圖，即得。供試品特徵圖譜中應有 7 個特徵峰，與參照物峰相應的峰為 S 1 和 S 2 峰，計算各特徵峰的相對保留時間比值，應符合以下規定：峰 1 和峰 2 （ S 1 ）為一組，相對保留時間比值為 0.91 （峰 1 ）、 1.00 （峰 2 ）；峰 3 ，峰 4 ，峰 5 ，峰 6 和峰 7 （ S 2 ）為另一組，相對保留時間比值為 0.84 （峰 3 ）、 0.91 （峰 4 ）、 0.93 （峰 5 ）、 0.95 （峰 6 ）、 1.00 （峰 7 ），其相對偏差不得過 5% 。
da Pk # 對照特徵圖譜峰 1 ：人參皂苷 Rg 1 ，峰 2 （ S 1 ）：人參皂苷 Re ，峰 3 ：人參皂苷 Rf ，峰 4 ：人參皂苷 Rb 1 ，峰 5 ：人參皂苷 Rc ，峰 6 ：人參皂苷 Rb 2 ，峰 7 （ S 2 ）：人參皂苷 Rd