蛋白質檢測儀的使用方法

Ⅰ GFP綠色熒光蛋白的檢測方法有哪些

檢測方法：
1、實驗准備
 Molus單管型多功能檢測儀
 Blue熒光模塊(P/N 9200-040)
 微量適配器(P/N 9200-928)
 純化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502）
 200ul加樣器與20ul加樣器
 TE Buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)
 1.5ml離心管
2、.儀器准備
2.1 關閉Molus的電源，為Molus插入BLUE熒光檢測模塊.
2.2 打開Molus的電源，儀器預熱1min
2.3 按照說明插入微量適配器
3.、制備標准曲線
3.1 對rAcGFP1進行系列稀釋
3.2 在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀釋後溶液。注意：避免在微量比色杯中出現氣泡，負責會引起檢測誤差。.
3.3 將微量比色杯插入到微量適配器中，點"Measure Fluorescence Raw."檢測
3.4 記錄檢測結果，對其他樣品重復4.2-4.3的步驟
3.5 利用熒光值（FSU）與樣品濃度做出標准曲線
4、 校準
4.1 使用Molus檢測未知樣品前，你可以使用rAcGFP1稀釋液來校準Molus儀器
4.2 使用表1中的5個稀釋液來校準Molus。選擇"ng/µL"作為測量單位，使用0 ng/µL 作為空白標准；為了盡可能准確，使用接近實際樣品的稀釋液做其他幾個點的校準。
4.3 保存校準，可供以後調用 (可選).
4.4 使用"Measure Fluorescence."開始檢測未知樣品。注意：在校準後就無需再做標准曲線。
4.5 樣品濃度將直接在屏幕上顯示.
簡介：
綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)是一類存在於腔腸動物體內的生物發光蛋白。1962年Shimomura等首先從多管水母(Aequoria victoria)中分離出一種分子量為20kD的稱為Aequorin的蛋白。由於水母整體熒光及提取的蛋白質顆粒熒光都呈綠色，因此，人們將這種蛋白命名為綠色熒光蛋白。
GFP具有多種優點：易於檢測，靈敏度高；熒光性質穩定，耐受性強；易於表達，無細胞毒性；可用於活細胞檢測。因此，GFP可作為報告基因用於檢測基因表達或調控，或作為融合標簽來檢測蛋白質分子的定位、遷移、構象變化以及分子間的相互作用，或者靶向標記某些細胞器

Ⅱ 蛋白濃度測定的方法具體有哪些

蛋白濃度測定的方法：

1. 紫外分光光度法

紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法，不需要任何試劑，操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收，這是由於蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的，所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核酸對測定結果引起極大誤差，其最大吸收在260nm。所以同時測定280及260nm兩種波長的吸光度，通過計算可得較為正確的蛋白質含量。

2. 雙縮脲法

利用半飽和硫酸銨或27.8％硫酸鈉——亞硫酸鈉可使血清球蛋白沉澱下來，而此時血清白蛋白仍處於溶解狀態，因此可把兩者分開，這種利用不同濃度的中性鹽分離蛋白的方法稱為鹽方法。鹽析分離蛋白質的方法不僅用於臨床醫學，而且還廣泛地用於生物化學研究工作中，如一些特殊蛋白質—酶、蛋白激素等的分離和純化。

蛋白質和雙縮脲一樣，在鹼性溶液中能與銅離子形成紫色絡合物（雙縮脲反應），且其呈色深淺與蛋白質的含量成正比，因此可於蛋白質的定量測定。

但必須注意，此反應並非蛋白質所特有，凡分子內有兩個或兩個以上的肽鍵的化合物以及分子內有—CH2—NH2等結構化合物，雙縮脲反應也呈陽性。本實驗用27.8％硫酸鈉—亞硫酸鈉溶液稀釋血清，取出一部分用雙縮脲反應測定蛋白質的含量，剩餘部分則用濾紙過濾，使析出的球蛋白與白蛋白分離，取出濾液用同一反應測定白蛋白的含量。總蛋白與白蛋白含量之差即球蛋白的含量。白蛋白與球蛋白之比即所謂的白／球比值。

3. Folin-酚試劑法

目前實驗室較多用Folin-酚法測定蛋白質含量，此法的特點是靈敏度高，較雙縮脲高兩個數量級，較紫外法略高，操作稍微麻煩，反應約在15分鍾有最大顯色，並最少可穩定幾個小時，其不足之處是干擾因素較多，有較多種類的物質都會影響測定結果的准確性。其原理是蛋白質中含有酚基的酪氨酸，可與酚試劑中的磷鉬鎢酸作用產生蘭色化合物，顏色深淺與蛋白含量成正比。

4. 考馬氏亮藍G-250

此方法是1976年Bradform建立。染料結合法測定蛋白質的優點是靈敏度較高，可檢測到微量蛋白，操作簡便、快迅，試劑配製極簡單，重復性好，但干擾因素多。考馬氏亮藍G－250具有紅色和青色兩種色調、在酸性溶液中游離狀度下為棕紅色，當它通過疏水作用與蛋白質結合後，變成藍色，最大吸收波長從465nm轉移到595nm處，在一定的范圍內，蛋白質含量與 595nm的吸光度成正比，測定595nm處光密度值的增加即可進行蛋白質的定量。

以上便是實驗室中常見的幾種蛋白濃度測定的方法，另外還有凱氏定氮法和BCA法，有凱氏定氮法結果最精確，但操作復雜，BCA法又以其試劑穩定，抗干擾能力較強，結果穩定，靈敏度高而受到歡迎。

Ⅲ 檢測食品中蛋白質最常用的方法

一般是根據產品標准要求選測定方法的，食品中蛋白質測定的最常用方法當然是凱氮測定法：常量凱氏定氮法和微量凱氏定氮法。
我大學時還做過考馬斯亮藍
半微量定氮法，與最新標准一致，我這有稍微簡化的方法：
以餅干為例：稱取2.000克於定氮瓶中，加20mL濃硫酸，加0.2g硫酸銅，加3.0g硫酸鉀，然後進行消化，消化至澄清液體後倒入100mL具塞比色管，3次清洗定氮瓶，洗液並入100mL具塞比色管，蒸餾水加至100mL刻度線，搖勻，取10mL進半微量定氮裝置蒸餾，收集瓶中為2%硼酸溶液10mL，以甲基紅-亞甲藍為指示劑2滴，用購置的0.1000標准溶液進行滴定，步驟結束。
要點：稱量需准確；吸取也准確；玻璃儀器需檢定合格。

Ⅳ 用什麼方法檢測蛋白質

目前食品中蛋白質的測定方法有蛋白質自動分析儀，近紅外自動測定儀，紫外分光光度法以及凱氏定氮法等。本文採用納氏試劑作為顯色劑測定食品中蛋白質含量，適用范圍廣，可用於各類食品及保健食品的檢測。用本法對標准品、質控樣品進行測定獲得滿意結果，對批量樣品的快速測定更具有實用性。現將結果報告如下。

材料與方法

儀器與試劑 WFZ800-D3型紫外分光光度計(北京第二光學儀器廠)。分析純硫酸、硫酸銅、硫酸鉀。(1)納氏試劑：稱取碘化汞100g及碘化鉀70g，溶於少量無氨蒸餾水中，將此溶液緩緩傾入己冷卻的32%氫氧化鈉溶液500ml中，並不停攪拌，再用蒸餾水稀釋至1L，貯於棕色瓶中，用橡皮塞塞緊，避光保存。(2)硫酸銨標准儲備溶液(1.0g/L)：精確稱取經硫酸乾燥的硫酸銨0.4720g，加水溶解後移入100mL容量瓶中，並稀釋至刻度，混均此液每毫升相當於1.0mgNH3-N(10℃下冰箱內儲存穩定1年以上)。(3)硫酸銨標准使用溶液(0.01g/L)：用移液管精密吸取1.0ml標准儲備液(1.0g/L)於100ml容量瓶內，加水稀釋至刻度，混勻，此溶液每毫升相當於10.0μg NH3-N。

方法

標准曲線繪制 取25ml比色管7支，分別准確吸取0.01g/L硫酸銨標准使用液0.00，0.5，1.0，3.0，5.0，7.0，10.0ml(相當於標准0.0，5.0，10.0，30.0，50.0，70.0，100.0μg)，加水至10ml刻度，於標准系列管中各加2ml納氏試劑，混勻後放置10min，移入1cm比色皿內，以零管為參比，於波長420mm處測量吸光度，以標准管含量為橫坐標(μg),對應的吸光度(A)值為縱坐標繪制標准曲線。

樣品測定 選擇牛奶和奶粉為檢測樣品。精密稱取樣品0.1～2.0g置於250ml三角瓶中，加入0.2gCuSO4、1.0gK2SO4、硫酸10ml，先小火加熱，待內容物全部炭化，泡沫停止後，加大火力至液體呈藍色，使H2SO4剩餘量約為3ml左右為止，室溫放冷後，沿瓶壁慢慢加入10ml水，移入100ml容量瓶中，用少量蒸鎦水洗三角瓶3次，洗液全部並入容量瓶中，冷卻，加蒸餾水至刻度，混勻。測定時取0.5ml，加水至10ml刻度，以後操作同標准曲線。同時做空白試驗。

計算公式

X=c×Fm×V2V1×1000×1000×1000

式中：X-試樣中蛋白質含量(g/100g或g/100ml)

C-試樣測定液中扣除空白後氮的含量(μg)

V1-試樣消化液定容體積(ml)

V2-測定用消化液體積(ml)

m-樣品質量(g)或體積(ml)

F-氮換算為蛋白質的系數。

蛋白質的氮含量一般為15%～17.6%，按16%計算乘以6.25即為蛋白質，乳製品為6.38，麵粉為5.7，肉及肉製品為6.25，大豆為5.71。

結果

2.1 測定波長選擇 含氮量為30μg的標准管在顯色後，在波長400～440mm范圍內每間隔5nm進行測定，最大吸收波長為420mm。

顯色劑用量選擇 含氮量為30μg的標准管分別加入不同量的納氏試劑，在420mm的波長下分別測定其吸光度結果。納氏試劑顯色劑加入量為1.5～3.0ml時吸光度基本無變化，本法選擇加入納氏試劑2.0ml。

顯色時間及穩定性 含氮量為30μg的標准管經顯色後，分別在10，30min，1，2，4，8h進行測定。顯色後10min～8h內吸光度穩定無變化。本法選顯色10min後測定。

標准曲線 回歸方程：y=0.016X-1.5×10-3，r=0.9998，最佳線性范圍0.0～100μg。

精密度 牛乳和奶粉2種樣品分別取6份按本法重復測定6次，牛乳和奶粉精密度測定結果：平均數分別為3.06，23.50；標准差分別為±0.029，±0.073；相對標准偏差分別為0.31%，0.94%。

對2種樣品利用標准加入法作回收試驗(表1) 結果可見，回收率為95.50%～99.44%。

2種方法測定結果比較 分別用GB/T5009.5-2003凱氏定氮法與本法測定。結果顯示，2種分析方法的測定結果差異無統計學意義(t=0.026，P>0.05)。

測定標准物質 用本法測定4種不同的蛋白質標准物質，測定結果與標准物質含量一致。

以納氏試劑作為顯色劑快速測定食品中蛋白質的方法特點簡單、快速，適用於批量樣品測定。在鹼性條件下NH3-N與納氏試劑反應生成的黃色化合物穩定。本法與國標凱氏定氮法進行比較t=0.026,P<0.05，n=32，2種方法測定結果無明顯差異。測定范圍廣，線性范圍寬0.0～100.0μg；精密度高；相對標准偏差為0.31%～0.94%；回收率好，加標回標率為95.50%～99.44%。用本法測定標准物質結果一致，用於質量控制樣本測定結果滿意。本法儀器試劑簡單，易於基層普及，有利於推廣應用。

Ⅳ 這個醫院尿蛋白+，那個醫院測又沒了，尿蛋白的測定方法有哪些

應該這樣問更合理 ：

為什麼這個醫院尿蛋白+，那個醫院測又沒了？

或者：這個醫院尿蛋白+，那個醫院測又沒了，為什麼？

而提問者的問題突然跑到尿蛋白的檢測方法上去了。

一、尿蛋白的檢測方法，就有兩種 ：尿蛋白定性檢測和24小時尿蛋白定量檢測。

1、定性檢測是收集早上的第一次小便的中段尿送檢。

2、定量檢測需要把從頭天早上到第二天早上點對點24小時內的尿液全部收集起來，記錄總尿量，混勻後取少量送檢。

二、為什麼檢測結果不一樣：

這時臨床中常遇到的情況之一，

還有遇到的情況之二：就是同一家醫院的兩次檢測的結果也是這樣（不一樣），即：這次蛋白1+，下次沒有；還有可能：這次是蛋白1+，另一次或2+，乃至3+或4+。

（一）、在同一家醫院的兩次檢查結果不一樣的 ：

1、假設醫院的化驗沒錯，就是說結果都是正確的，然後又推出如下的可能性（1）人沒有毛病，（2）人有毛病，至於什麼毛病先不管。

人沒毛病怎麼會有蛋白呢？

是的，沒毛病也會蛋白的，說明蛋白不是腎臟里漏出來的，而是自身的污染造成的。比如男性的前列腺液、精液；女性的陰道分泌物或外陰的分泌物。因為不會保證每次都有污染物所以就會有的時候是陽性，有的時候是陰性，基於此，嚴格的留取尿液標本（取樣）的方法是：男性要排出一部分尿液後再留取（中段尿）；女性的不能在經期留取，要在經期過後3天之後，而且要清洗外陰後留取中段尿，非經期也可直接留取中段尿，或清洗外陰後留取更准確。如果是這種情況，再留取一次中段尿，結果肯定是陰性。

人有毛病，那怎麼還會陰性呢？

有毛病也有輕有重，還有就是不同的毛病引起的。就是說，即使有毛病，也不是每時每刻排除的蛋白的量是恆定不變的，也有量多和量少的時候，量稍微多一點就1+，稍微少一點就陰性了。如果量很多，不論那次肯定都會是陽性，只不過有時候是1+，有時候多至4+。這時候要進一步查找到底是什麼原因導致的。可以說尿液里蛋白陽性不一定一定是腎臟的疾病引起的，還可以是前列腺或膀胱或尿道引起的。

2. 假設，醫院的化驗有錯。

可以推出，要麼是人員操作有誤，要麼是機器或試劑本身有誤。可以反復多驗幾次來證實，或通過第三家醫院的化驗來證實。

（二）、在不同的醫院出現不一樣的結果，可以推理出如下的可能性 ：

1、尿液里肯定有蛋白，陰性的結果的醫院化驗不準，其原因有兩種可能性：a、人操作不正確；b、機器不準確，不論是試劑的問題還是程序的問題，還是其它問題都有可能。怎麼證明呢？正確取得同一次（尿液）樣本後，分送不同的醫院，或同時送第三家醫院！即使這樣送，也不敢保證第三家的一定是准確的。

2、尿液里肯定沒有蛋白，就能推出，第一個醫院的化驗不準。證明方法同「（二）中的1」。

3、兩家醫院的化驗都准，那就是上面的「（一）」里分析的那些可能性。這時通過正確取樣，反復化驗來檢驗，或去第三家醫院進行驗證。驗證的最佳方法是用同一天同一次的尿液樣本分別送不同的醫院。

簡單說就是：要麼是兩家醫院的化驗結果都沒錯。要麼是其中的一家的化驗結果有錯。 捎帶著分析了一下假設同一家醫院出現檢測結果不一致的原因的可能性。

蛋白尿「+」，是指尿常規檢查，尿中檢測出蛋白質的一種異常結果。也是尿蛋白定性檢測為陽性的一個表現。如果結果是「—」，就是尿蛋白定性檢測為陰性。

為什麼會出現這個醫院化驗尿蛋白+，而另一個醫院化驗又沒有了？那是因為尿蛋白的來源有很多，首先我們分為生理性蛋白尿及病理性蛋白尿。按照部位不同，分為腎小球性蛋白尿和腎小管性蛋白尿。還有一種叫溢出性蛋白尿等等。

生理性蛋白尿常常見於發熱以後、運動以後、暴飲暴食以後，還有一些特殊體位等等。我們叫體位性蛋白尿。病理性蛋白尿則見於各種各樣的腎臟疾病。

所以，在我們去醫院化驗尿液的時候，一定要避免上述發熱、運動、暴飲暴食等等。

尿蛋白定性檢測，臨床上有六個描述，分別為—、+—、+、++、+++、++++。表示為尿蛋白的濃度從陰性到逐漸升高達最高濃度的四個加號。而影響尿蛋白的濃度，一方面與腎臟疾病的嚴重程度有關，另一方面與我們的飲水量有關。也就是說，如果病人一天的飲水量比較大，尿蛋白就會被稀釋，化驗的結果就很好甚至是陰性。如果病人這一天飲水量少，尿蛋白就會被濃縮，化驗結果就很差。

一個「+」的蛋白尿，相對是尿裡面的蛋白濃度比較低。如果是在運動後、感冒發熱以後、暴飲暴食後或者勞累以後化驗為「+」蛋白尿，而平時正常狀態下化驗結果陰性，考慮為生理性蛋白尿。如果平時正常狀態下化驗結果為「+」，這一天飲水量比較大再化驗結果為正常范圍，仍然考慮為病理性蛋白尿。

因此，為了准確起見，化驗小便時，應該是在正常情況下，取晨尿，也就是起床後的第一次小便。

不過，為了慎重起見，只要發現了蛋白尿，我建議需要進一步檢查。

比如24小時尿蛋白總量，比如尿蛋白肌酐比值測定，比如尿蛋白電泳檢查，比如尿微量白蛋白檢查。

正常情況下，24小時尿蛋白總量30mg/24h，則稱為微量白尿蛋白。

如果確實檢測發現有蛋白尿，我們需要做尿蛋白電泳檢查，以區分是選擇性蛋白尿還是非選擇性蛋白尿。非選擇性蛋白尿也叫混合性蛋白尿，有較強的臨床意義。

由此可見，臨床上，檢測蛋白尿的方法，一般有尿常規檢查（尿蛋白定性），24小時尿蛋白總量，尿微量白蛋白檢測，尿蛋白肌酐比值，尿蛋白電泳等五種方法。

如有不同意見，歡迎大家討論。

非常感謝題主的邀請，這個問題比較偏門，但又比較專業，要解釋起來還是比較抽象的。在臨床上尿常規中蛋白的異常這屬於腎內科的診治范圍，有時候確實有題主所說的這種情況，今天查「蛋白一個+」，明天查可能又沒了。這有可能本身就是生理性蛋白尿，過一天後消失了其實也在情理之中，另一種情況就是和尿蛋白的檢測方法有關，今天我就著「重尿蛋白的檢測方法」來講解。

前言

目前尿蛋白的檢測方法主要包括 定性檢查、定量檢查、尿微量白蛋白測定和尿蛋白電泳分析 四大類，具體如下：

（一）尿蛋白定性檢查

●試紙法

① 這是根據指示劑蛋白誤差的原理，通過尿蛋白與試紙中指示劑 （例如四溴酚藍） 結合產生的顏色反應，與標准顏色對比， 可以初估蛋白量 ，自動化分析儀可根據顏色深淺得出蛋白定性的結果，無非以下六種結果： 陰性 （＜0.1g/l）、 ± （0.1-0.2g/l）、 ＋ （0.2-1g/l）、 ++ （1-2g/l）、 +++ （2-4g/l）、 ++++ （＞4g/l）。

② 試紙條法對尿中不同蛋白質的敏感性其實各有不同。相對來講，對白蛋白是最為敏感的，對球蛋白敏感性相對差一些。比如多發性骨髓瘤患者（球蛋白高）尿液中可出現大量的游離輕鏈，但是試紙法檢測結果就可以呈「陰性」。注意了，這個檢測方法要求 尿液必須新鮮 ，如果是變質的尿液產生的PH變化則會影響到實驗檢查結果，如果尿PH增高則可產生假陽性，所以這需要注意鑒別。

●磺基水楊酸法（磺柳酸法）

這種方法的靈敏度在0.05-0.1g/L，它的原理主要就是帶負電荷的磺柳酸與尿中帶正電荷的尿蛋白質相結合形成不溶性蛋白鹽沉澱，然後根據濁度來用加號表示。這里其實無非也是以下六種結果： 陰性 （無渾濁現象）、 ± （輕微渾濁，隱約可見）、 + （明顯的白色渾濁，但無顆粒出現）、 ++ （稀薄乳樣渾濁，出現顆粒）、 +++ （乳濁，有絮片狀沉澱）、 ++++ （絮狀渾濁，有大凝塊下沉）。這個試驗比較靈敏，與清蛋白、球蛋白、糖蛋白和本周氏蛋白均能發生反應， 可作為干化學法檢測尿蛋白的參考方法、

●加熱醋酸法

這種方法的靈敏度為0.15g/L，它的原理則是加熱使蛋白質變性凝固，加酸使尿液酸化利於蛋白沉澱，並使之析出的鹼類鹽溶解。其實它也是根據 尿液渾濁程度以及沉澱的多少 來判斷結果（陰性-++++）。注意了，這種方法如果加酸過多，，蛋白質微粒獲得電荷增加，可呈假陰性反應，所以在試驗中可先加 1-2滴飽和氯化鈉液 與尿液中，再進行操作誤差則會小的多。

（二）尿蛋白定量檢查

●雙縮脲比色法

它是以磷鎢酸乙醇溶液沉澱尿中的蛋白質，在鹼性介質中蛋白質與銅離子形成紫色的絡合物，與標准液比色來得出尿中蛋白質的含量。注意了，這個試驗呢需准確的記錄24小時的尿量，然後將尿液混合後再離心，當蛋白濃度較高時應稀釋標本再操作。若疑有葯物干擾時，可將尿蛋白沉澱用 無水乙醇洗滌3次 再操作。

●麗春紅S法

操作方法是在尿標本中加入三氯醋酸和麗春紅染料，形成尿蛋白染料復合物，然後離心沉澱，再加鹼溶液使沉澱溶解。最後通過 比色測定 並計算蛋白含量。注意了，當尿中的血紅蛋白濃度較高時會影響結果。離心後標本的上清液必須要全部去除，如果沉澱中夾帶麗春紅S則會 影響檢測結果。

●考馬斯亮藍法

在酸性環境中，棕紅色的考馬斯亮藍與尿蛋白通過疏水力結合，產生藍色化合物，光譜吸收峰改變，這時候再 與標准液相比即可測定出尿蛋白的含量。 這種方法靈敏度較高，可測尿蛋白濃度范圍為0.01-1g/L,需要樣品量少，但不同蛋白之間差異較大。注意了，考馬斯亮藍溶液需要 定期新鮮配置 ，過濾後才可使用。

（三）尿微量白蛋白檢測

當尿總蛋白定量在正常范圍內，而尿白蛋白排泄率達20-200ug/min或尿白蛋白量＞30mg/d時，我們稱為微量白蛋白尿。這主要可用於腎臟疾病的早期診斷， 如糖尿病腎病、高血壓腎病、隱匿性腎炎時，尿微量白蛋白含量增加 ，並且很多出現時間在尿蛋白定性陽性出現之前，所以這個項目也是腎臟疾病早期診斷的指標之一。操作方法則可通過 放射免疫測定、免疫比濁法 、折射法 等方法進行檢測。

（四）尿蛋白電泳分析

由於不同的尿蛋白發生機制可導致尿蛋白的組成成分不同，因此通過電泳技術可以為臨床提供很有價值的診斷依據。 如果腎小球濾過屏障完好 ，尿蛋白含量極低，則電泳後染色的蛋白質條帶信號極弱，以白蛋白條帶為主； 如果腎小球濾過屏障異常 ，而腎小管重吸收功能正常，濾過的小分子蛋白不超過腎小管的重吸收閥值，電泳後蛋白條帶常顯示為大分子蛋白質和白蛋白； 如果腎小管功能受損和濾過量過多 ，則會同時出現小分子量的蛋白質條帶。這個項目目前常用的檢測方法主要有 醋酸纖維薄膜電泳和聚丙烯醯胺凝膠電泳 。

綜合總結

關於尿蛋白的檢測方法不論是定性檢查、定量檢查、微量白蛋白檢測還是尿蛋白電泳分析均已詳細的進行分析，題主所問到的「 感覺尿常規裡面的蛋白有時候一個加號，過一天再測又沒了，這和測定方法有關系嗎」， 我想說這和不同的檢測方法是有關系的，由於其影響的因素比較多，所以會出現假性結果，這時候就不要過早下結論， 可多復查幾次，並結合病史、臨床症狀來綜合評判，也不可一味相信輔助檢查結果。

回答這個問題之前首先應該清楚以下情況：

1，是同一次尿液，同一天在不同的醫院檢測的結果嗎？

2，還是，同一個人，不是同一次尿液，不是同一天，在不同的醫院檢測的結果？

3，兩次檢查尿液標本都是清晨第一次尿液嗎？

4，兩次檢查尿液標本都是頭段尿液，還是留取的中段尿液？

5，患者是男性還是女性？

這些問題都會影響尿液蛋白的檢測結果！

我來詳細根據上述情況，分析檢測結果的差異性！

同一次尿液，，同一天在不同的醫院檢測尿液蛋白，結果不一致，這種情況是儀器和試劑的問題！不同的醫院檢測尿液的儀器不一樣，試劑也不一樣，結果會有差異性，尤其是尿蛋白在+和-之間。

同一個人，不是同一次尿液，不是同一天，在不同的醫院檢測尿液蛋白結果不一致，這種情況有標本的問題也有儀器和試劑的問題，不建議才用這種方法檢查。

兩次檢查尿液標本都是清晨第一次尿液？清晨第一次尿液很容易受到尿道分泌物和外陰分泌物的污染，導致尿液蛋白假陽性。

兩次檢查尿液標本都是頭段尿液還是留取的是中段尿液！頭段尿液極易受到分泌物的干擾，

性別對尿液標本的留取也有干擾性，男性患者如果有尿道炎，尿道分泌物會引起尿蛋白假陽性，尤其是頭段尿液！女性患者外陰分泌物很容易影響尿液蛋白的檢測，尤其是合並陰道炎的，陰道分泌物會進入尿液標本，導致尿液蛋白假陽性！

處理方法：

建議最好選擇同一家醫院檢測，檢測結果具有可靠性。

尿液標本的留取，最好留取至少2個小時的尿液（尿液在膀胱內的時間），並且留取中段尿液，最好是在留取尿液標本前清洗一下外陰，避免分泌物對檢測結果的影響！

如果檢測結果呈現陽性結果，建議重復檢查一次，並且選擇同一家醫院進行檢測，動態觀察結果改變情況！

另外，尿蛋白的測定方法有哪些？就目前而言，現在絕大多數醫院採用的是全自動尿液分析儀，尿蛋白是通過干化學法，儀器自動掃描測定的。有的小診所或者個人在家使用干化學紙條，目測結果，具有差異性！

尿蛋白的檢驗方法，有3種，分別是尿蛋白定性試驗、尿蛋白定量測定、尿蛋白電泳分析。

①尿蛋白定性試驗：通常採用蛋白試紙法、磺基柳酸法、加熱醋酸法3種方法。正常情況下，尿蛋白定性試驗呈陰性。但此種檢查方法易受一些因素的影響，可致假性結果，如尿酸鹽含量高時，尿呈酸性反應，蛋白試紙法結果較實際情況低，磺基柳酸法易呈假陽性；大量使用青黴素時，磺基柳酸法易呈假陽性反應；使用磺造影劑時，磺基柳酸法、加熱醋酸法均可出現假陽性反應；當尿呈強鹼性時，假性結果更多，或出現蛋白試紙法假陰性反應，或出現磺基柳酸法和加熱醋酸法的假陰性反應。當尿蛋白僅為一些特殊蛋白質時，蛋白試紙法和磺基柳酸法均不敏感。因此，在進行尿蛋白定性時，應綜合各種因素，具體情況具體分析，選擇適宜的方法。盡管定性試驗比較方便，但有時難以反應蛋白尿的實際情況，有條件時，最好進行定量檢查。

②尿蛋白定量測定：一般進行ECTkey=24小時尿蛋白定量 target=_blank24小時尿蛋白定量檢測。 使用的方法比較多，有些方法雖然比較精確，如凱氏定氮法、雙縮脲法等，但操作很復雜。臨床多採用簡易的半定量法，如艾司巴赫氏定量法、磺基柳酸比濁定量法。24小時尿蛋白定量在0．15～0．5克之間為微量蛋白尿，在0．5～1克之間為輕度蛋白尿，在1～4克之間為中度蛋白尿，大於4克（有學者定為3．5克）為重度蛋白尿。

③尿蛋白電泳分析：常用的方法有醋酸纖維薄膜電泳、聚丙烯醯胺凝膠電泳、尿蛋白免疫電泳等方法。該方法主要從確定尿中蛋白質的種類出發，通過區分不同尿蛋白的種類，對某些疑難病症如多發性骨髓瘤、重鏈病等有診斷和鑒別診斷的意義。同時可以區別尿蛋白的分子量大小，這對區別蛋白尿的來源，以及檢查尿中是否有特殊蛋白質具有重要的意義。

在你腎內醫生面前賣弄一下。尿液的測定受影響因素較多。首先是和測量尿的時間有關，一般是晨尿較能反映正常水平，另外和前幾天的飲食、飲水量有關聯。還有和測量試劑、機器調試有關，測量過程中，一般要求換導管，清水清洗機器。還和前幾個患者有關，但無論如何清洗，總有可能一些殘液遺留，只要在允許范圍內即可。況且又不可能每次化驗前都讓工程師來檢測儀器，只能憑經驗。所以，假如上一個病人尿蛋白含量高，就會影響下一個人的檢測結果，這也就是為什麼對蛋白含量一個+號要求病人復查或換醫院檢測

的原因。

您好，我是一名從事臨床多年的內科醫生，希望我的回答能幫到您。

臨床上常用的判斷尿蛋白的檢測方法主要有二種：尿蛋白定性試驗、尿蛋白定量測定。

一、尿蛋白定性試驗： 目前幾乎所有醫院的尿常規檢查里都包含尿蛋白定性這一項目。尿蛋白陽性提示可能存在各種急性腎炎、慢性腎炎、腎結核、泌尿系統感染甚至高熱等情況。不過尿蛋白定性的結果分為陰性、陽性（包括一個+到四個+）。您所說的這種一個加號時有時無的情況其實在臨床上也比較容易出現，但不是所有的陽性都一定是腎臟的器質性疾病導致的。因為這種檢查方法易受一些因素的影響，出現假陽性結果。因此，在進行尿蛋白定性時，應綜合各種因素，具體情況具體分析。特別是您所得這種一個加號時有時無的情況，為了確定是否准確，我們會推薦第二種方法。

二、尿蛋白定量測定 ：一般用一個小桶收集24小時的尿液，然後取樣本進行尿蛋白的定量檢測。24小時尿蛋白定量在0．15～0．5g之間為微量蛋白尿，大於0．5為蛋白尿陽性，大於3．5g就是為大量蛋白尿（多見於腎病綜合征）。這種檢測方法區別於定性實驗，可以有具體的數值表示尿蛋白的多少，而且受其它因素干擾相對少，能准確反應身體真實情況。

臨床上大多數情況下不能僅憑某一項異常指標或者某種症狀就能妄下定論，因此，您所描述的這種情況建議進一步做24小時尿蛋白定量測定，如果數值低於0．15g，那就說明尿蛋白定性實驗可能是假陽性結果。最後，祝您身體 健康 ！

可能蛋白量不多，各個醫院檢測的敏感性不一樣。另外是不是都是晨尿，因為一個加的尿蛋白有可能多喝點水稀釋一下就下降到定性測不出來的水平。建議同時查尿微量白蛋白和尿蛋白定量。

您好，很高興能夠回答您的問題。

尿蛋白「+」是尿常規中很常見的一項指標，也是提示腎臟是否出現問題的提示指標

尿蛋白的出現有兩種可能，一是生理性的 二是病理性

病理性，常見的就是慢性腎臟病，不過只是出現一個加號並不能進行確診，還是需要進一步的進行專業檢查確診；

生理性，日常的飲食，生活習慣，環境，小便器不幹凈，運動過量，感染，炎症等情況都有一定關系，一般保持良好的生活習慣，調整飲食3-5天左右的時間就會恢復正常。

測量蛋白尿的方式有兩種一是，可以到醫院進行尿常規檢查，這樣就是稍微比較麻煩以及費時間；二是，可以自行購買一些尿蛋白試紙，自己測的也比較方便。

Ⅵ 血紅蛋白儀怎麼用

血紅蛋白的測定
[實驗目的]
掌握用直接測定法和比色法測定動物的血紅蛋白的含量。
[實驗原理]
血紅蛋白的顏色常與氧的結合量多少有關。但當用一定的氧化劑將其氧化時，可使其轉變為穩定、棕色的高鐵血紅蛋白，而且顏色與血紅蛋白（或高鐵血紅蛋白）的濃度成正比。可與標准色進行對比，求出血紅蛋白的濃度，即每升血液中含血紅蛋白克數（g·L-1）。
血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，後者再與氰離子結合形成穩定的氰化高鐵血紅蛋白（hemoglobin cyanide,HiCN）。HiCN在波長540 nm和液層厚度1cm的條件下具有一定毫摩爾消光系數。可用經校準的高精度分光光度計進行直接定量測定；或用HiCN標准液進行比色法測定，根據標本的吸光度即可求出血紅蛋白濃度。
[實驗對象]
動物種類不限。
[實驗葯品]
HiCN轉化液（Van Kampen-Zijlstra液，文齊氏液※，標准商品）或1%HCl、HiCN標准液（200 g·L-1，標准商品）、蒸鎦水、95%酒精、乙醚、75%酒精.
[儀器與器械]
血紅蛋白計（或分光光度計）或沙里氏血紅蛋白計、小試管、刺血針或注射器，微量采血管，干棉球。
[實驗方法與步驟]
1.使用血紅蛋白計直接定量測定
（1）XK-2血紅蛋白儀板面結構如圖 (6.2-1)：

（2）儀器的標定
①板面後的電源開關置於斷。儀器的底部的支撐架打開。
②打開電源開關，選擇鍵處於測試擋。
③按一下進樣鍵，將蒸溜水吸入，預熱30 min
④預熱後將文齊試劑吸入，仔細調「調零旋鈕」使顯示屏上的數字顯示為零。
⑤校正：吸入標准液(儀器配帶有)後，緩緩旋轉校正旋鈕使顯示屏上數字顯示為已知的標准液的數值。定標即結束。以後調零和校正旋鈕均不能動。
（3）在小試管中事先加入HiCN轉化液(文齊氏液)5 ml。
（4）取血：可吸取從動物的指（尾）端流出的第二滴血，也可取靜脈血和心臟血。用拇指和食指輕輕捏扁采血管的乳膠頭，將采血管的一端水平接觸血滴（若是抗凝血，須注意搖勻後再吸取），輕輕緩慢地松開拇指，利用虹吸現象使血液進入微量采血管至20 μl（第2個刻度）。用棉球擦去微量采血管尖端外周的血液。
（5）血紅蛋白轉化為氰化高鐵血紅蛋白：將微量采血管插入小試管HiCN轉化液中，置血液於管底，再吸上清液2～3次，洗盡采血管內的殘存的血液。用玻棒輕輕攪動管內血液，使之與HiCN轉化液混勻。試管須靜止5 min。
(6)將混合後的血液吸入血紅蛋白儀，顯示屏上的數字即為測定值，需穩定後方可讀數(g·L-1)。
2.使用HiCN標准液比色法測定
（1）標准曲線繪制和K值計算：將標准HiCN液按梯度50 g·L-1、100 g·L-1、150 g·L-1、200 g·L-1進行稀釋後（以此代表標準的血紅蛋白濃度梯度），在波長540 nm、光徑1.0cm條件下，分別測定各稀釋液的吸光度(例如分別測得0.13、0.27、0.405、0.54)，以標准品血紅蛋白含量為橫坐標、吸光度為縱坐標，繪制標准曲線。或求出換算常數K。

（2）以上述同樣的方法取血，並使血紅蛋白轉化為氰化高鐵血紅蛋白。然後以轉化液作空白，測定標本吸光度A。
（3）通過標准曲線查出待測樣本的血紅蛋白濃度或用K值來計算血紅蛋白濃度，即
Hb（g·L-1）=K×A (6.2-2)
3.使用沙里氏血紅蛋白計測定
沙里氏比色法是用HCl使血紅蛋白酸化形成棕色的高鐵血紅蛋白，然後和標准比色板進行比色。
（1）沙里血紅蛋白計 主要具有標准褐色玻璃比色箱和1隻方形刻度測定管組成。比色管兩側通常有兩行刻度；一側為血紅蛋白量的絕對值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血紅蛋白的克數)表示，從2～22 g；另一側為血紅蛋白相對值，以%（即相當於正常平均值的百分數）來表示，從10%～160%。為避免所使用的平均值不一致，因此一般採用絕對值來表示。
（2）具體測定方法如下：
①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度管內,(約加到管下方刻度」2」或多或10%處)。
②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔細揩去吸管外的血液。
③將吸血管中的血液輕輕吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。操作時勿產生氣泡,以免影響比色。用細玻棒輕輕攪動，使血液與鹽酸充分混合，靜置10 min，使管內的鹽酸和血紅蛋白完全作用，形成棕色的高鐵血紅蛋白。
④把比色管插入標准比色箱兩色柱中央的空格中。
⑤使無刻度的兩面位於空格的前後方向，便於透光和比色。用滴管向比色管內逐滴加入蒸餾水，並不斷攪勻，邊滴，邊觀察、邊對著自然光進行比色，直到溶液的顏色與標准比色板的顏色一致為止。
⑥讀出管內液體面所在的克數，即是每100 ml血中所含的血紅蛋白的克數。比色前，應將玻棒抽出來，其上面的液體應瀝干凈，讀數應以溶液凹面最低處相一致的刻度為准。換算成每升血液中含血紅蛋白克數（g·L-1）。
[注意事項]
1.取血前要做好充分的消毒。
2.血液要准確吸取20 μl，若有氣泡或血液被吸入采血管的乳膠頭中都應將吸管洗滌干凈，重新吸血。洗滌方法是：先用清水將血跡洗去，然後再依次吸取蒸餾水、95%酒精、乙醚洗滌采血管1～2次，使采血管內干凈、乾燥。作為學生練習，微量采血管可反復使用。
3.使用血紅蛋白儀測定時，吸樣管應插入試管底部，避免吸入氣泡，否則會影響測試結果。儀器連續使用時，每隔4小時要觀察一次零點，即吸入文齊試劑，用「調零旋鈕」使儀器恢復到零點。儀器用完後，關機前要用清洗液清洗。否則會影響零點的調整。
[實驗結果]
報告該實驗動物的血紅蛋白濃度。並將全班的結果加以統計,用平均值±標准差表示。
[思考題]
血紅蛋白的含量與年齡的關系？
影響血紅蛋白含量的主要因素？
[附]：
※1.HiCN轉化液：即文齊氏液，有標准商品出售。也可配製： 高鐵氰化鉀(K3Fe（CN）6)200 mg，氰化鉀（KCN）50 mg，無水磷酸二氫鉀（KH2PO4）140 mg，Triton X-100 1.0 ml，蒸餾水加至1000 ml。過濾後為淡黃色透明液體，pH 7.0～7.4，置有色瓶中加蓋、冷暗處保存。如發現試劑變綠、變渾濁則不能使用。
2.用分光光度計直接測定血紅蛋白
（1）取血、血紅蛋白轉化和比色同前述1、2的方法，得到標本的吸光度A。
（2）根據標本吸光度A直接計算出血紅蛋白濃度：

式中 A：為波長540nm處標本吸光度。
44：為HiCN在波長540nm，光徑1.0cm條件下的毫摩爾消光系數（L· mmol-1· cm-1）。
64485（mg）：為Hb的毫克分子量，即1 mmol·L-1 Hb溶液中的Hb毫克數。
1000：為將mg轉變為g。
251：為血液稀釋倍數。
因是通過分光光度計比色直接計算出血紅蛋白濃度，因此分光光度計的波長和光程必須准確、靈敏度要高、線性好、無雜光，否則會影響結果的准確性。故儀器的校正在測定中十分重要。
上述介紹的幾種方法中，以分光光度計直接測定和比色法測定血紅蛋白較為精確，但對分光光度計的精密程度要求較高，分光光度計校正起來較為麻煩。沙里氏血紅蛋白計測定操作簡便適於基層單位，但准確性稍差。血紅蛋白計操作較為簡便，因有標準的商品試劑出售，因此也比較精確，目前普遍被醫療單位使用。

Ⅶ 尿微量白蛋白檢測試劑盒怎樣使用

尿微量白蛋白指高於正常，但常規方法無法檢出的白蛋白尿，他的檢測作為早期腎損害診斷的重要指標已受到廣泛重視，測定方法包括放射免疫法、ELASA法等。應用較多的是免疫透射比濁法，但報告方式不一，有的以每升尿中白蛋白量表示，有的以24小時排泄量表示，常用的報告方式是以白蛋白/肌酐比值報告。我們以不同表示方法對正常人尿白蛋白的正常值進行了統計分析，並對部分高血壓、糖尿病患者進行測定，現報告如下。 1.儀器與方法：尿微量白蛋白測定試劑盒，肌酐測定試劑盒均購於凱創公司。儀器應用瑞士產Cobas MIRA plus全自動生化分析儀。尿白蛋白測定，取標本10 ml，1 500×g離心10分鍾，取上清10 μl，加緩沖液250 μl，抗血清50 μl，測定波長340 nm，反應溫度37℃，測定時限300秒，5點定標，范圍5～200 mg/L。肌酐採用Jaffe′s法，尿標本預先用生理鹽水30倍稀釋測定。
2.對象：對照組，健康人70例(男43例，女27例)，平均年齡41.2歲(21～54歲)，均排除高血壓、糖尿病及其他和腎病有關病史。糖尿病組，42例(男28例，女14例)，平均年齡51.2歲(34～72歲)，病程2～20年。高血壓組，62例(男39例，女23例)，平均年齡44.5歲(31～71歲)，血壓范圍160～190/95～120 mmHg，病程2～27年。臨床診斷Ⅰ期21例，Ⅱ期41例，其中Ⅱ期患者以眼底動脈硬化或心臟改變為診斷依據，尿常規分析蛋白定性均為陰性。
3.標本：對照組均分別留取24小時尿和隨機尿，測定24小時白蛋白和每升白蛋白及白蛋白/肌酐比值，並以不同方法計算正常值，患者組均取隨機尿測定白蛋白及肌酐，以白蛋白/肌酐比值報告，以上標本均當日測定。 1.不同計算方法尿白蛋白正常值：以mg/L計算，范圍2.2～41.7，均值12.7；以mg/gCr計算，范圍2.7～26.1，均值8.1；以mg/24 h計算，范圍2.4～34.3，均值11.4。因尿白蛋白值呈非正態分布，低值無臨床意義，在建立參考范圍時以百分位數法按單側值95%上限確定。從以上結果可見，不同計算方法的結果正常值范圍有明顯差異，尤以每升結果報告時，由於受尿量影響較大，正常范圍較寬，這樣易使部分異常標本落入正常范圍而延誤診斷。
2.高血壓組：診斷Ⅰ期、Ⅱ期高血壓的標準是以是否累及血管、臟器為依據，我們測定的41例Ⅱ期患者中，常規尿蛋白定性均未發現腎臟損害，診斷是以眼底改變和心電圖改變為主。我們將測定結果依據高血壓病期、病程、舒張壓水平分組進行統計，結果。Ⅰ期21例，范圍4.6～38.2 mg/gCr，均值17.8 mg/gCr；Ⅱ期41例，范圍5.1～62 mg/gCr，均值29.7 mg/gCr；舒張壓95～105 mmHg 34例，范圍4.6～43.4 mg/gCr，均值16.4 mg/gCr；舒張壓106～120 mmHg 28例，范圍5.0～62 mg/gCr，均值31.2 mg/gCr；病程2～10年19例，4.6～40.2 mg/gCr，均值13.1 mg/gCr；病程11～15年，28例，范圍4.6～54.2 mg/gCr，均值19.3 mg/gCr；病程16～27年，15例，范圍5.1～62 mg/gCr，均值37.2 mg/gCr。上述結果中以正常值? mg/gCr為界，Ⅰ期高血壓中有4例超過正常值，Ⅱ期高血壓中有14例超過正常值，說明這些患者已有輕度腎損害。尤其1期高血壓中有五分之一患者出現尿白蛋白異常，尿白蛋白的值與病程及血壓水平相關。
3.糖尿病組：42例糖尿病患者按病程分組，2～10年28例，尿白蛋白為5.2～39.6 mg/gCr，均值21.2 mg/gCr，大於25 mg/gCr 13例；11年以上組14例，結果為10.4～68.
1 mg/gCr，均值29.4 mg/gCr，大於25 mg/gCr 8例。通過了解病史並分析結果，堅持長期口服葯物或注射胰島素治療者與不經常治療兩者結果間有明顯差異(P?.01)。
測定尿微量白蛋白最理想的方法是留取24小時標本，但因留取困難，在實際應用上受到限制。隨機尿測定是目前最常用，最易行的方法。但應同時測定肌酐，因每日肌酐排除量相對恆定，可避免尿量變化對結果的影響。
尿微量白蛋白測定是一種靈敏、簡便、快速的測定方法，易於在常規實驗室中廣泛應用，對早期腎損害的診斷遠遠優於常規定性或半定量試驗。