A. 怎樣准確建立總黃酮的檢測方法
本人最近提取植物總黃酮，其主要成分含有蘆丁、槲皮素、異槲皮素、金絲桃苷、紫雲英苷等多種黃酮類化合物。經查閱《國葯大典》，以蘆丁作標樣建立標准曲線： 精密稱取蘆丁25mg ，加甲醇定容至25 ml ，取10ml 並且用蒸餾水釋至100 ml 。分別准確吸取0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0、6.0 ml 於25 ml 容量瓶中用10%甲醇定容各容量瓶至6ml，加含5 % NaNO2 水溶液1ml ，搖勻靜置6 min ，再加含10 %Al (NO3) 3 水溶液1 ml ，搖勻靜置6 min，再加含1. 0mol/L NaOH水溶液10 ml ，用蒸餾水稀釋定容至刻度，搖勻靜置16 min，在480～540 nm波長范圍內掃描，確定最大吸收波長在508 nm處，得到蘆丁濃度( x) 與吸光度( y) 的關系的回歸方程。
B. 總黃酮與單體黃酮的測定方法有什麼不同
總黃酮採用蘆丁為標准品即可測定，單體黃酮需要對應的標准品。
黃酮含量的測定方法：
1、 對照法
1）
① 對照品制備：精密稱取蘆丁對照品20.8mg，置於100ml容量瓶中，加70%乙醇使溶解並稀釋至刻度，搖勻。
② 樣品溶液制備
精密稱取樣品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鍾，稱定重量，用70%乙醇補足減失重量，即得。
③ 標准曲線的制備
精密稱取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別置於25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鍾，加1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，加70%乙醇置刻度，搖勻，放置15分鍾。各取10ml置於50ml容量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度。在510nm的波長下測定吸光度。
2）
①樣品溶液的制備：
分別精確稱取80℃恆溫乾燥的樣品用50%甲醇迴流提取，料液比1：15,提取兩次，每次30min，將兩次提取液合並濃縮至一定體積，用30%甲醇定容至50ml容量瓶中。從其中取出12ml溶液放入100ml容量瓶中，稀釋至刻度，再從100ml容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，為待測樣品液Ⅰa和Ⅱa。 ②最大吸收波長的選擇：分別作樣品液Ⅰa、Ⅱa及蘆丁標准品的吸收曲線，均在350 nm 處有一強吸收，因此選擇350 nm為測定波長。
③標准曲線的制定：
精密稱取蘆丁對照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解後，轉移至50ml容量瓶，用蒸餾水定容至刻度。分別精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml蘆丁溶液置於100ml容量瓶中，於350 nm 波長處測定吸光值，以蘆丁空白為參比，以蘆丁濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標繪制標准曲線，提示在4.12～12.36mg／103ml濃度之間，吸光度值與濃度呈現良好的線性關系。
④含量測定結果：
分別吸取2.2.1中Ⅰa和Ⅱa待測樣品液各適量於石英比色池中，按標准蘆丁一吸光度測定法，以樣液空白參比，於350nm 波長下測定吸光值，計算各提取液中總黃酮含量。
計算公式為:樣品總黃酮含量(%)=0.03692(A+0.1644)/W。
注:上式為通過回歸方程轉化而來，式中A為測得樣品液的吸光度值，W為稱樣量。
C. 測定總黃酮含量方法
一 樣品溶液的制備
70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下迴流2h。 取10g樣品放入圓底燒
瓶中加入80ml 70%乙醇溶液迴流2h,抽濾定容至100ml備用。使用時先
離心再用70%乙醇稀釋10倍做樣品溶液。
二 蘆丁標准品的配置
精密稱取蘆丁2mg，加無水乙醇定容至10ml。製得濃度為0.2mg/ml蘆
丁標准品溶液。
三 顯色方法的確定
1 掃描原液 分別取蘆丁溶液和樣品溶液各1ml，加無水乙醇定容至 25ml，空白對照，全波掃描。
2 硝酸鋁顯色法 分別取蘆丁對照品溶液和樣品溶液各5ml，加5%亞硝酸鈉 溶液（1.25g亞硝酸溶於無水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液(4,4014g硝酸鋁.九水溶於無水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml， 搖勻，放置6min，加4%氫氧化鈉試液(2g氫氧化鈉溶於無水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml, 再加無水乙醇定容至25ml，搖勻，放置15min， 空白對照，全波掃描 bb 。
3 氯化鋁顯色法 分別取蘆丁對照溶液和樣品溶液各5ml ,加1%的氯化鋁溶液（1g氯化鋁溶於無水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，搖勻放置10min，空白對照，全波掃描。
4 氫氧化鉀顯色法 分別取蘆丁對照品溶液和樣品溶液各5ml，加3ml10%氫氧化鉀溶液（2.5g氫氧化鉀溶於無水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分搖勻顯色5min後，用無水乙醇定容至25ml, 搖勻，空白對照，全波掃描。
四 顯色條件的確定
五 標准曲線的繪制
分別取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml蘆丁對照品溶液，按所選的顯色方法測定
吸光度，繪制標准曲線。