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血清白蛋白檢測方法

發布時間:2023-08-20 04:33:38

❶ 血清白蛋白測定注意事項

血清總蛋白測定一般採用雙縮脲比色法,它是目前首先推薦的蛋白質定量方法。此法的原理是蛋白質分子中的肽鍵在鹼性條件下與二價銅離子(Cu2+)作用生成藍紫色的化合物,這種顏色反應強度在一定濃度范圍內與蛋白質含量成正比,經與同樣處理的蛋白標准液比較,即可求得蛋白質含量。此反應的優點是清、球蛋的反應性相近,操作簡單,重復性好,干擾物質少,為首選的常亮知規方法,其缺點是靈敏度較低。
1.黃疸血清,嚴重溶血,葡萄糖,酚酞及溴磺酞鈉對本法有明顯干擾,故用標本空白管來消除。但如標本空白管吸光度太高,可影鎮冊響測定的准確度。
2.高脂血症混濁血清會干擾比色,可採用下述方法消除:取2支帶塞試管或離心管,各加待測血清O.1ml.再加蒸餾水0.5ml和丙酮10ml,塞緊並顛倒混勻10次後離心,傾去上清液。將試管倒立於濾紙上吸去殘余液體醫|學教育網整理。向沉澱中分別加入雙縮脲試劑及雙縮脲空白試劑,再進行與上述桕同的其他操作和計御鍵宏算

❷ 測定血清總蛋白的參考方法是

總蛋白的六種檢測方法
(一)凱氏定氮法
將血清與強酸一起加熱消化,使血清中的含氮化合物轉化為銨鹽,再加鹼使銨鹽成為氨進經蒸餾分離出來,最後用酸滴定測定氮量,按每克氨相當於6.25g蛋白質計算蛋白質的濃度。
應用歷史較久,結果較准確,是蛋白質測定的參考方法,但操作復雜,影響因素較多,且不少蛋白質的含氮量並非16%,不適用於日常工作,目前多用於標准蛋白的標定及校正其它的常規方法。
(二)雙縮脲法
蛋白質中的肽鍵(-CONH-)在鹼性條件下與Cu2+絡合成紫紅色復合物,產生的顏色強度在一定范圍內與蛋白質含量成正比。
此反應和二分子尿素縮合後的產物雙縮脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)與鹼性銅溶液作用形成紫紅色的反應相似,故稱為雙縮脲反應。幾分子中含有兩個甲醯胺基(-CO-NH2)的化合物都能出現此反應。
因至少含2個-CONH-基團才能與Cu2+絡合,所以氨基酸和二肽無此反應。體液中小分子肽含量極低,故血漿中除蛋白質外幾乎不存在可與雙縮脲試劑顯色的物質,且各種蛋白質顯色程度基本相同。
此法簡便、准確、重復性好,在10-120g/L。濃度范圍內呈良好的線性關系,批內CV值<2%,但靈敏度較其它方法稍差,是目前臨床上最常規的方法。
(三)酚試劑法
蛋白質分子中的酪氨酸殘基和色氨酸殘基能夠和酚試劑中的磷鎢酸-磷鉬酸反應生成藍色化合物。Lowry改良法在酚試劑中加入Cu2+,提高了呈色的靈敏度,其中75%呈色靠銅離子產生。Lowry改良法的靈敏度為雙縮脲法的100倍左右。
由於各種蛋白質中酪氨酸和色氨酸的比例不同,如白蛋白含色氨酸為0.2%,而在一些球蛋白中色氨酸含量高達2%~3%,因此使用本法測定純粹的、單一的蛋白質較合適。此法靈敏度較高,為10~60ug/ml,因而適用於測定蛋白質含量較少的標本(如腦脊液),但試劑反應易受還原性化合物糖類、酚類及多種葯物如水楊酸、氯丙嗪和某些磺胺葯的干擾。
(四)紫外分光光度法
蛋白質分子內的色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白質溶液在280nm波長處有一吸收峰,依此性質可用於蛋白質定量。
由於各種蛋白質中芳香族氨基酸的含量和比例不同,血清中游離的酪氨酸和色氨酸在280nm處也有吸收,因尿酸和膽紅素在280nm處也有干擾,因而本法的准確性和特異性都受到很大的影響。
此法敏感而且簡便,由於制劑未經任何處理,蛋白質的生物活性得以保留,故常用於較純的酶和免疫球蛋白的測定。但此法需紫外分光光度計和石英比色杯。
(五)染料結合法
在酸性環境中,蛋白質分子解離出的-NH3+,可與染料的陰離子產生顏色反應。常用的染料有氨基黑、考馬斯亮藍等。這一性質可用於電泳後蛋白質的染色和血清總蛋白測定。
此法操作簡便、重復性好、靈敏度高、且干擾因素較少。缺點是特異性不高,分子量3 000以上的多肽也參與反應。另外,不同蛋白質和染料的結合力不一致,因此很難找到一種合適的物質作標准物,使此方法的應用受到限制。
(六)比濁法
用某些酸類(如二氯醋酸、磺基水楊酸等)和血清蛋白質結合產生沉澱,然後測定其濁度,與同樣處理的蛋白標准液比較,即可求得蛋白質含量。
此方法簡便,不需特殊儀器。缺點是濁度形成的強弱易受多種因素影響,如加入試劑的方法、反應時的溫度等。另外,蛋白質沉澱時易形成絮狀物,難以獲得穩定的懸浮液

❸ 血清白蛋白的測定方法

通過雙縮脲試劑可與蛋白質發生有顏色產物的反應方法來測定。

人血漿白蛋白是凍干制劑應為白色或灰白色的疏鬆體,液體制劑和凍干制劑溶解後,溶液為略粘稠、黃色或綠色至棕色澄明液體,不應有異物、混濁和沉澱。

白蛋白蛋白占血漿膠體滲透壓卜埋的80%,主要調節組織與血管之間水分的動態平衡。由於白蛋白分子量較高,與鹽類及水分相比,透過膜內的速度較慢,因此使白蛋白的膠體滲透壓與毛細血管的靜力壓相抗衡,以此來維持正常與恆定的血漿容量。

在血液循環中,1g白蛋白可保留18ml水,故每5g白蛋白保留循環內水分的能力約相當於100ml血漿或200ml全血的功能,可起到增加循環血容量和維持血漿膠體滲透壓的作用。

血昌沖漿白蛋白蛋白對某些離子和化合物有較高親和力,能與這些物質可逆結合,發揮轉運功能。白蛋白還為機體提供大量的氨基酸儲備。50ml20%人血漿白蛋白的氨基酸儲備功能相當於400ml全血。

(3)血清白蛋白檢測方法擴展閱讀:

葯理作用

白蛋白蛋白占血漿膠體滲透壓的80%,主要調節組織與血管之間水分的動態平衡。由於白蛋白分子量較高,與鹽類及水分相比,透過膜內的速度較慢,因此使白蛋白的膠體滲透壓與毛細血管的靜力壓相抗衡,以此來維持正常與恆定的血漿容量。

在血液循環中,1g白蛋白可保留18ml水,故每5g白蛋白保留循環內水分的能力約相當於100ml血漿或200ml全血的功能,可起到增加循環血容量和維持血漿膠體滲透壓的作用。

血漿白蛋白蛋白對某些離子和化合物有較高親和力,能與這些物質可逆結合,發揮轉運功能。白蛋白還為機體提供大量的氨型迅螞基酸儲備。50ml20%人血漿白蛋白的氨基酸儲備功能相當於400ml全血。

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