檢測待測抗體方法

❶ HIV抗體檢測

目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是最常規使用的方法。以下我們來看看HIV抗體檢測方法吧。

HIV抗體檢測是什麼

艾滋病病毒進入人體後，人體免疫系統可以產生相應的艾滋病病毒抗體。檢測血液中的艾滋病病毒抗體是目前最常用的確診艾滋病病毒感染的實驗室方法，即血清學檢測。一般要經過兩個步驟，首先做初篩檢測，如果結果為陽性，再做確證檢測，確證檢測陽性才可診斷為艾滋病病毒感染。孕期做HIV抗體檢查，是為了確認孕婦是否感染了艾滋病。如果感染了HIV病毒，則艾滋病抗體結果為陽性，正常孕婦HIV抗體為陰性。若孕婦感染HIV，可通過胎盤傳染給胎兒，或分娩時經軟產道感染。

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hiv抗體陰性

目前艾滋病是一種無可治癒的疾病，它給患者的生命健康帶來巨大的傷害。那麼，hiv抗體陰性是什麼意思呢？

從有感染機會開始算起,經過三個月以上檢查的是陰性的情況的話,可以確定沒有感染。而且,現在正在使用的檢查方法已經非常改善了,通常,有感染機會以後一個月的話就可以檢查出抗體。因此,經過一個月(或者一個多月)以後的檢查是陰性的話,感染的幾率是相當的低的。如果經過兩個多月之後的檢查是陰性,可以說幾乎不可能感染。但是,如果為安全計,確實要確定沒有感染的話,推薦過了三個月以後檢查和復查。

HIV抗體陰性是沒有感染艾滋病病毒。如果感染了艾滋病病毒，抗體應該為陽性。但是要注意有一個窗口期，艾滋病窗口期通常為三個月時間，在這三個月之內，是查不出來的，是已經感染但還沒有產生抗體。

hpv病毒預防

相信已經有不少女性朋友都聽說過hpv病毒，但是了解得不夠深入，比如說hpv病毒是怎麼感染上的。那麼，接下來我們來說一下，hpv病毒是什麼來的？

HPV病毒是人類乳頭瘤病毒的縮寫，是一種乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒感染引起的一種性傳播疾病。其中HPV16和18型長期感染可能與女性宮頸癌有關。如果陰道內存在此病毒感染時，導致宮頸癌的發病率非常高。因此如果有中度以上的慢性宮頸炎(又叫宮頸糜爛)時，則需要治療，可以預防宮頸癌的發生。

關於女性生殖道感染HPV的流行情況，據2003-2004年來自美國的國家健康和營養研究課題的一個調查結果顯示，14-59歲的HPV總感染率為26.8%，所以HPV感染在女性造成的負擔超出之前的估計。

hiv核酸檢測

懷疑有hiv可以進行hiv核酸檢測來知道，那麼hiv核酸檢測多久出結果呢？

hiv核酸檢測其實就是艾滋病的核酸檢測，關於hiv核酸檢測通常需要1周左右才能出結果，hiv核酸檢測是通過PCR的方法檢測患者血液當中是否存在HIV-RNA以及HIV-RNA的高低，檢測相對來說比較准確，在感染HIV之後7-10天就可以在感染者的體內檢測到HIV-RNA。

因此，在我們國家對於血液的檢疫都會通過艾滋病的核酸檢測，明確獻血者是否感染艾滋病。對於確診患者也會進行艾滋病的核酸檢測，明確患者病毒量的高低，同時一旦確診之後應當立即開始抗病毒治療，在抗病毒治療期間也應當進行艾滋病的核酸檢測，明確治療效果。

HIV抗體檢測作用

孕期HIV檢測，可為孕婦早預防、早治療提供依據，改善孕產婦孕期生活質量，提高兒童健康水平。艾滋病是「獲得性免疫缺陷綜合征」的直譯名稱，是一種嚴重的免疫缺陷疾患，其病原體是HIV病毒。

母嬰傳染是艾滋病的主要傳播途徑之一，HIV病毒會通過胎盤傳播給胎兒，會造成新生兒HIV病毒感染。此時復查目的是要再次確認孕婦早孕時所做的反應，檢查孕婦本身是否帶有或已感染。通過檢查，便於醫生在孕婦分娩時給予足夠處理。

HIV抗體檢測有必要做嗎

孕婦都需要做艾滋病檢測，因為HIV在體內有一定的潛伏期，沒有症狀出現，所以必須做這項檢查。通過檢測，可發現孕婦自身是否帶有HIV。如果沒有進行檢測，可能會導致無法及時治療，從而造成不可挽回的後果。帶有HIV的孕婦在懷孕期間、分娩時，或透過母乳喂養，都可能把病毒傳給寶寶。

HIV抗體檢測現在是產檢的一部分，在某些例子中，檢驗在懷孕晚期更是被反復進行。若檢測發現孕婦帶有HIV，可在懷孕之前或期間開始葯物治療可以改善健康，延長大部分罹患此病孕婦的生命。如果寶寶已經被傳染，及早治療可以緩解此病的進程，並提高生存的機會。

如果孕媽認為自己有HIV或艾滋病的風險，一定要讓醫生知道。醫生可以監控孕婦的健康，協助孕婦避免會增加寶寶暴露在血液中的手術。醫生也會確保寶寶接受適當的檢驗，並在產後接受感染的治療。早期檢驗可以讓被診斷有HIV的寶寶，接受抗HIV葯物的治療，這類葯物可以延緩病程，提高生存幾率。

HIV抗體檢測什麼時候做

HIV檢查一般在第一次產檢（孕12周）的時候檢查。

孕期檢測幾次HIV

如果第一次檢查結果為陰性，檢查一次即可。但如果孕期有和艾滋病人接觸過或懷疑自己有被感染的情況，可以再作檢查。

HIV抗體檢測怎麼做

1、酶聯法 ：即「酶聯免疫法」，簡稱ELISA。它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然後通過顯色來檢測。步驟很簡單：ELISA用血清來檢測，首先血液要經過至少半個小時的凝集，然後取血清。將酶復合物用稀釋液稀釋後，加血清及陰性、陽性對照，還有質控品。經過一個小時的孵育，然後洗板，加底物，半個小時避光反應後加終止液即完成反應部分，然後讀數。由數值來判斷結果的陰性或陽性。

嚴格的講，如果第一次檢測為陽性的話，無論是哪個實驗室，必須按照CDC的HIV操作規程來進行第二次檢測，第二次的方法必須與第一次的不同，如還是陽性，將送艾滋病確認實驗室確認。

2、快速法 ：即「金標法」，又叫「膠體金法」，金標法是國際上較為先進的靈敏，特異，快速，簡便，准確率高的體外診斷方法。測定結果僅憑特製的檢測試紙在短時間內即可獲得。金標法（艾滋病檢測試紙），取血後滴在試紙上，用15分鍾的時間觀察該試紙有無顏色變化。

艾滋病快速檢測法可以在家裡自己檢測，操作簡單方便，不需要特殊的儀器，在艾滋病試紙上先滴兩滴血，再滴一滴稀釋液，然後等待15分鍾讀取結果。結果判讀也很簡單，如果試紙上出現一條紅色的直線，說明是陰性，如果是兩條紅線，就是陽性。如果檢測出現陽性，按照HIV檢測流程，需要進行復測。

使用快速法（艾滋病試紙）進行艾滋病自我檢測應該在專業人員指導下進行，以確保整個自測操作過程規范正確，結果准確可靠。

3、蛋白免疫印跡法（WB）

艾滋病確診實驗室常用的方法，主要用於確認試驗，當初篩出現陽性時，需採用此方法進行確認實驗。基本原理是HIV全病毒抗原經過SDS-PAGE電泳，將分子量大小不等的蛋白帶分離開來，然後再把這些已經分離的不同蛋白帶電轉移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀，每一條硝酸纖維素膜上均含有經電泳分離過的HIV病毒抗原。將待檢血清樣品用稀釋液稀釋成1/100，再把它直接加到硝酸纖維素膜上，恆溫震盪，使其充分接觸反應。血清中若含有抗HIV抗體，就會與膜條上的抗原帶相結合。加入抗人IgG酶結合物和底物後，即可使有反應的抗原抗體結合帶呈現紫褐色，根據出現條帶情況判定結果。

HIV抗體檢測注意什麼

HIV檢查需要空腹嗎

HIV檢查是定性試驗而非定量試驗，不受飲食和葯物的影響，因而檢測前不需要空腹、禁食。 另外，艾滋病病毒抗體的檢測是特異性的，而且抗體水平不受體溫、葯物等的影響。因此，一般性的生病、服葯不會影響艾滋病病毒抗體檢測結果。

HIV檢查能喝水嗎

HIV檢查能喝誰。HIV檢查是指採用實驗室方法對人體血液、其他體液、組織器官、血液衍生物等進行病毒以及抗體相關指標檢測，喝水吃飯都沒有影響。

HIV檢查多久出結果

HIV檢查分為初篩和確證兩個步驟。初篩酶聯免疫試驗需要大約兩到三個小時，如果用快速試劑進行初篩檢測，則可以在半小時之內出結果。初篩試驗結果陽性就需要做進一步復檢和確證，確證檢測的時間是一到兩天。但以上僅僅是試驗本身的時間，具體操作時還需考慮標本運送時間和各個試驗室的工作安排，各個實驗室的情況不一樣，很難有統一的標准。在傳統檢測中，收集到的樣本要送到一個中心實驗室進行檢測，這種方法可能會要求孕婦一周後或更長時間後回來看結果。

HIV檢驗單怎麼看

如果感染了HIV病毒，則艾滋病抗體結果為陽性，正常孕婦HIV抗體為陰性。

1、無症狀HIV感染：無任何臨床表現，HIV抗體陽性，CD4淋巴細胞總數正常，CD4/CD8比值＞1，血清p24抗原陰性應診斷為無症狀HIV感染。

2、實驗室檢查：抗HIV抗體陽性，CD4淋巴細胞總數〈200/mm3，或200-500/mm3；CD4/CD8比值〈1；血清p24抗原陽性；外周血白細胞計數及血紅蛋白含量下降；β2微球蛋白水平增高，合並機會性感染病原學或腫瘤病理依據均可協助診斷。

孕婦hiv陽性

若孕婦HIV為陽性，即為帶菌者。目前尚無治癒方法，主要採取抗病毒葯物治療和一般支持對症處理。HIV感染的孕產婦如果在產前、產時或產後正確應用抗病毒葯物治療，其新生兒HIV感染率有可能顯著下降（〈8%）。

1、抗病毒葯物：妊娠期應用核苷類反轉錄酶抑制劑齊多夫定（zidovudine,ZDV）可降低HIV的母嬰傳播率。用法：500mg/d口服，從妊娠14-34周直至分娩。臨產後：首次2mg/kg靜脈注射後1mg/（kg?h）持續靜脈滴注直至分娩。產後8-12小時開始，齊多夫定2mg/kg，每6小時1次，至產後6周。

2、其他免疫調節葯：α干擾素、IL-2等也可應用。

3、支持對症治療：加強應用，治療機會性感染及惡性腫瘤。

4、產科處理：盡可能縮短破膜距分娩的時間；盡量避免使胎兒暴露於血液和體液危險增加的操作，如會陰側切術、人工破膜、抬頭吸引器或產鉗助產術、宮內胎兒頭皮血檢測等；建議在妊娠38周時選擇性剖宮產以降低HIV母嬰傳播。不推薦HIV感染者母乳喂養。對於產後出血建議用催產素和前列腺素類葯物，不主張用麥角生物鹼類葯物，因其可與反轉錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑協同促進血管收縮。

HIV陽性孕婦能生健康寶寶嗎

HIV檢測為陽性的孕婦，有可能生健康的寶寶，目前母嬰阻斷技術比較成熟，同時也需要全程管理與監護。孕婦將艾滋病傳給嬰兒主要通過三種方式：第一種是通過胎盤，第二種是通過產道（在分娩的過程中傳播），第三種就是母乳喂養。這三種途徑加起來的幾率大概是在35％-45％，也就是說陽性的孕婦如果生小孩，她傳給小孩的幾率在35％-45％之間。因為目前艾滋病還沒有可以治癒的葯物，所以如果寶寶感染艾滋病，存活的時間比較短，很少可以活到15歲，所以如果發現孕婦呈艾滋病病毒陽性的話，一般醫生會告訴孕婦實情並勸其中斷妊娠，這是最好的辦法。

如果個別陽性孕婦已經到了妊娠晚期，無法中斷妊娠的時候，可以吃葯，通過葯物來進行阻斷，降低孕婦傳給下一代的幾率。一般情況下，如果是在妊娠期開始吃葯，生產時採取剖腹產，以後再進行人工喂養不要母乳喂養，這樣三管齊下，可以將傳播給嬰兒的幾率降到2-5％。

HIV抗體檢測多少錢

HIV抗體檢測價格是與HIV檢查方法相對應，根據檢查方法不同，價格在100-180元之間。HIV感染可以通過檢測病毒的抗體，抗原，核酸或病毒培養來確定。目前，標準的檢測方法是血清學HIV抗體檢測，這種HIV檢查費用不是很高。對高度懷疑感染了HIV的孕婦，臨床又急於盡快得到結果，可進行病毒載量測定。HIV病毒載量測定是對HIV核酸的定量測定，可測出每毫升血樣中HIV核酸的拷貝數（一個HIV病毒顆粒含兩拷貝）。檢測方法可作為感染早期，抗體檢測結果為不確定或抗體陰性者的輔助診斷，這種艾滋病檢查費用較高。

❷ 如何檢測體內是否存在抗體拜託了各位 謝謝

1. HBsAg (乙肝表面抗原) 原理：採用ELISA 雙抗體夾心法。雙抗體夾心法用於檢測相對分子質量較大的蛋白質抗原。先將已知特異性抗體包被於固相載體上，加待測樣本，若 其中有相應的抗原，則抗原和抗體特異性結合洗板後加入酶標記特異性抗體，使在固相上形成包被抗原抗體復合物洗板:加酶底物及色原呈色。雙抗原夾心法則是利用包被抗原和標記抗原檢測樣本中的特異性抗體。抗原或抗 體水平與所測吸光度(A) 值呈正相關。 將純化的抗HBs包被固相載體，加入待測樣品，括其中含有HBsAg ，則與載體上的抗HBs 結合，再加入辣根過氧化物酶( HRP) 標記的抗HBs 抗體，加酶底物/色原顯色。顯色程度與 HBsAg 含量成正比。 2.HBsAb （乙肝表面抗體） 原理：採用ELISA 雙抗原夾心法。反應板上包被純化HBsAg ，待測樣品中抗HBs與之反應，再加HRP-HBsAg 形成夾心，加酶底物/色原悔液顯色。 3.HBeAg 和HbeAb 原理：檢測HBeAg 和抗HBe 分別用ELISA 雙抗體夾心法和Elisa競爭法。 4.HbcAb 原理：Elisa競爭法。用於檢測待檢樣本中未知抗原或抗體。測抗原時用已知抗體包被固相載體，然後同步加入含有待測抗原的樣本和酶標記抗原，使待測抗原與酶標記抗原競爭結合在固相載體上的抗體；洗板加酶底物及色原!讓包。待iYlIJ 悔液抗原量越多，則被結合的酶標記抗原量越少，呈色越淺。呈色深淺與待測抗原的量成反比。測未知抗體時用已知抗原包被固相載體，同步加入含有待測抗體的標本和酶標記特異抗體，二者競爭結合固相載體t 的抗原.待測抗體量越多，酶標記抗體與固相抗原結合的最就越少，呈色就越淺。待測抗體的水平與呈色程度成反比。

❸ 口蹄疫病毒和抗體的實驗室檢測方法分別有哪些

病毒檢測方法有：
（1）病毒（乳鼠、細胞）分離培養與鑒定，用途為直接分離病毒；
（2）免疫熒光法，用途為檢測組織、細胞培養物中病毒抗原；
（3）反向間接血凝法，用已知陽性血清檢測病毒及分型；
（4）中和試驗，用已知陽性血清檢測病毒，金標准方法
（5）雙抗體夾心ELISA方法，用已知陽性血清檢測病毒抗原
（6）膠體金試紙，用已知陽性血清檢測病毒抗原
（7）RT-PCR（含熒光RT-PCR），用途為檢測病毒核酸
（8）核酸序列測定，解析病毒核酸
抗體檢測方法有：
（1）瓊脂擴散試驗，檢測病毒VIA抗原抗體
（2）正向血凝抑制試驗，檢測病毒衣殼蛋白抗體，可用於免疫效果評估
（3）液相阻斷ELISA試驗，檢測病毒衣殼蛋白抗體，可用於免疫效果評估
（4）VP1合成肽間接ELISA檢測方法，檢測病毒VP1蛋白抗體，可用於免疫肽苗的家畜的免疫效果評估
（5）3ABC非結構蛋白抗體ELISA檢測方法，檢測病毒非結構蛋白蛋白抗體，用於感染與免疫動物的區分
（6）中和試驗，用已知病毒檢測血清，金標准方法
（7）膠體金試紙，用已知病毒抗原檢測特異抗體
（8）補體結合試驗，用已知病毒抗原檢測特異抗體

❹ 梅毒抗體的檢測方法

--國產艾康
採用膠體金免疫檢潮技術和層析原理定性檢測血漬l漿)樣本中的梅毒螺旋體抗體。檢測時樣本中梅毒抗體可與膠體金標記抗原結合形成抗原抗體復合物?由於層析作用復台物沿紙條向前移動經過檢測線時與預包被的抗原結合形成「Au—TP Ag—TP Ab—TP Ag」夾心物而凝聚顯色。游離的膠體金標記梅毒抗原則在對照線處與預包被的兔抗TP抗體結合而富集顯色。陰性標本則僅在對照線處顯色。 —進口愛衛
膠體金法（免疫層析法）人類免疫缺陷病毒（HⅣ 1/2）抗體檢測試劑盒是應用膠體金免疫層析技術建立的靈敏、特異、操作簡便的一步法HⅣ 1/2抗體定性檢測試劑。用於定性檢測人血清或血漿樣本中的HⅣ 1型和HⅣ 2型的特異性抗體，以輔助診斷HⅣ感染，其陽性結果需用免疫印跡法確認。唾液檢測試紙全球認可度比較高的是美國克利普特公司的aware愛衛品牌。

❺ 免疫檢測方法

免疫檢測方法大全2017

免疫學檢測技術的用途非常廣泛，它們可用於有關免疫疾病的診斷、療效評價及發病機制的研究。如對傳染病、免疫增殖性疾病、免疫缺損病、超敏反應、自身免疫病、移植排斥反應腫瘤的免疫學檢測，對診斷、治療均有很大幫助。此外在醫學生物學研究中對抗原性物質或細胞的定性、定量檢查不僅推動了對各種免疫學現象的研究，而且擴大免疫學與醫學生物許多領域的聯系。本章僅介紹常用免疫學檢測方法的原理，簡要過程和實用意義。下面是我為大家帶來的關於免疫學檢測法的知識，歡迎閱讀。

第一節抗原或抗體的檢測

一、檢測的原理

藉助抗原和抗體在體外特異結合後出現的各種現象，對樣品中的抗原或抗體進行定性、定量、定位的檢測。

1.抗原與抗體的親和力(affinity)抗原抗體的結合就像酶與底物的結合，激素與其受體的結合一樣不是化學的反應，而是非共價鍵的可逆的結合。抗原決定簇和抗體分子可變區互補構型，造成兩分子間有較強的親和力。空間構型互補程度不同，抗原和抗體分子之間結合力強弱也不同。互補程度高，則親和力強。此外，反應溫度、酸鹼度和離子濃度對抗原和抗體分子上各基因的解離性和電荷特性也有重要的影響，抗體與抗原決定簇之間的結合力大小可用親合力來表示。高親合力的抗體與抗原的結合力強，即使抗原濃度很低時也有較多的抗體結合抗原形成免疫復合物。

2.抗原或抗體外檢測原理根據抗原抗體結合形成免疫復合物的性狀與活性特點，對標本中的抗原或抗體進行定性、定位或定量的檢測。定性和定位檢測比較簡單，即用已知的抗體和待檢樣品混合，經過一段時間，若有免疫復合物形成的現象發生，就說明待檢樣品中有相應的抗原存在。若無預期的現象發生，則說明樣品中無相應的抗原存在。同理也可用已知的抗原檢測樣品中是否有相應抗體。

對抗原或抗體進行定量檢測時，以反應中加入抗原和抗體的濃度與形成免疫復物的濃度呈函數關系。

(1)根據免疫復合物產生的多少來推算樣品中抗原(或抗體)的含量：在一定的反應條件下，加入的已知抗體(或抗原)的濃度一定，反應產生的免疫復合物多少與待檢樣品中含有相應抗原(或抗體)量成正比。也就是抗體濃度一定時，免疫復合物越多則樣品中的抗原量也越多。可用實驗性標准曲線推算出樣品中抗原(或抗體)的含量。如免疫單向擴散試驗、免疫比濁試驗和酶聯免疫檢測等都屬於這類方法。

(2)抗原或抗體效價滴定的原理：當抗原抗體復合物形成多少不能反應抗原抗體反應強弱時，就不能以檢測反應強度來對抗原或抗體進行定量。在實際工作中，把濃度低的反應成分(抗原或抗體)的濃度固定，把濃度高的另一種反應成分作一系列稀釋。例如用人血清作抗原免疫3隻家兔，比較3隻家兔產生抗體的多少，即滴定3隻兔血清抗體效價，可用雙向瓊脂擴散法來滴定，例如將抗體濃度固定，將抗原作不同的稀釋度，分別將抗原或抗體滴入瓊脂的相應小孔中，觀察免疫兔血清與不同稀釋度的抗原出現明顯沉澱淺的抗原稀釋度(如甲兔的抗體效價為1/2000，而丙免的是1/8000則可比較出後者比前者產生抗體的效價要高)。也就是表示效價的稀釋度越高，樣品中所含待檢成分越多。因人血清(抗原)和抗體(免疫兔血清)相比，濃度高，故應稀釋抗原。

二、抗原或抗體檢測的實用意義

1.抗體檢測的意義檢測抗體可用於評價人和動物免疫功能的指標。抗體用於臨床治療或實驗研究時也需做純度分析和定量測定。臨床上檢測病人的抗病原生物的抗體、抗過敏原的抗體、抗HLA抗原的抗體、血型抗體及各種自身抗體，對有關疾病的診斷有重要意義。

2.抗原檢測的意義可做為抗原進行檢測的物質可分為以下四類：

(1)各種微生物及其大分子產物：用於傳染病診斷、微生物的分類及鑒定以及對菌苗、疫苗的研究。

(2)生物體內各種大分子物質：包括各種血清蛋白(如各類免疫球蛋白、補體的各種成分)、可溶性血型物質、多肽類激素、細胞因子及癌胚抗原等均可做為抗原進行檢測。在對這些成分的生物學作用的研究以及各種疾病的診斷有重要意義。

(3)人和動物細胞的表面分子：包括細胞表面各種分化抗原(如CD抗原)、同種異型抗原(血型抗原或MHC抗原)、病毒相關抗原和腫瘤相關性情抗原等。檢測這些抗原對各種細胞的分類、分化過程及功能研究、對各種與免疫有關的疾病的診斷及發病機制的研究，均有重要意義。

(4)各種半抗原物質：某些葯物、激素和炎症介質等屬於小分子的半抗原，可以分別將它們偶聯到大分子的載體上，組成人工結合的完全抗原。用其免疫動物，制備出各種半抗原的抗體，應用於各種半抗原物質的檢測，例如對某些病人在服用葯物後進行血中葯物濃度的監測。對運動員進行服用違禁葯品的檢測，都是應用半抗原檢測的方法。

三、抗原或抗體檢測的方法

由於各種檢測方法中所用的抗原性狀不同，出現結果的現象也不同。最廣泛應用方法有下述幾種：

(一)沉澱反應

可溶性抗原與抗體結合，在兩者比例合適時，可形成較大的不溶性免疫復合物。在反應體系中出現不透明的沉澱物，這種抗原抗體反應稱為沉澱反應(precipitation neaction)。

1.環狀沉澱試驗先將含抗體的未稀釋的免疫血清加到直徑小於0.5cm的小試管底部。將稀釋的含有可溶性抗原的材料重疊於上，讓抗原與抗體在兩液體的界面相遇，形成白色免疫復合物沉澱環，故名為環狀沉澱試驗(ring precipitationtest),此法簡便易行，需用材料較多是其缺點。

2.單向免疫擴散試驗單向免疫擴散試驗(single immunodiffusion)是在凝膠中進行的沉澱反應。將抗體混入加熱溶解的瓊脂中，傾注於玻片上，製成含有抗體的瓊脂板，在適當位置打孔，將抗原材料加入瓊脂板的小孔內，讓抗原從小孔向四周的瓊脂中擴散，與瓊脂中的抗體相遇形成免疫復合物。當復合物體積增加到一定程度時停止擴散，出現以小孔為中心的圓形沉澱圈，沉澱圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關。本方法簡便，易於觀察結果，可測定抗原的靈敏度(最低濃度)約為10～20μg/ml，常用於定量測定人或動物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺點是需1～2天才能看結果

3.免疫比濁法 當抗體濃度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不見的小免疫復合物，它可使通過液體的光束發生散射，隨著加入抗原增多，形成的免疫復合物也增多，光散射現象也相應加強。免疫比濁法(immunonephelomytry)就是在一定的抗體濃度下，加入一定體積的樣品，經過一段時間，用光散射濁度計(nephelometry)測量反應液體的濁度，來推算樣品中的抗原含量。本法敏感、快速簡便，可取代單向擴散法定量測定免疫球蛋白的濃度。

4，雙向免疫擴散試驗 雙免疫擴散試驗(double immunodiffusion)是在瓊脂板上按一定距離打數個小孔，在相鄰的兩孔內分別放入抗原和抗體材料。當抗原和抗體向四周凝膠中擴散，在兩孔間可出現2～3條沉澱線，本法常用於抗原或抗體的定性或定量檢測，或用於兩種抗原材料的抗原相關性分析。

5.對流免疫電泳對流電泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的檢測方法，即在電場作用下的雙向免疫擴散。將瓊脂板放入電泳槽內，使瓊脂板的兩孔沿著電場的方向，於負極側的孔內加入抗原，於正極側的孔內加入抗體，通電後，抗原帶負電荷向正極泳動，抗體分子雖也帶負電荷，但因分子量大，向正極的位移小，而受瓊脂中電滲作用向負極移動，抗原和抗體能較快地集中在兩孔之間的瓊脂中形成免疫復合物的沉澱線。只需1小時左右即可觀察結果。

6.免疫電泳 免疫電泳(immunoelectrophoresis)的方法分成兩個步驟，即先進行電泳，再進行瓊脂擴散。先將樣品加入瓊脂中電泳，將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。然後在適當的位置上沿電泳方向挖一直線形槽，於槽內加入含有針對各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應抗體進行雙向免疫擴散，可形成多答卷沉澱線。常用此法進行血清的蛋白種類分析。對於免疫球蛋白缺損或增多的疾病的診斷或鑒別診斷有重要意義

7.免疫印跡法免疫印跡法(immunoblotting)又稱為Western印跡法，用於AIDS的血清抗體檢測。第一步，為電泳分離HIV抗原，在電場中根據分子量大小不同病毒抗原各成分散開。第二步，將電泳分離的蛋白質轉移到硝酸纖維膜上(電印跡)，然後將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕於病人血清中。如果病人血清中含有與一種或幾種抗原相對應的抗體的話，則在該抗原印跡部位形成免疫復合物沉澱。在洗去未沉澱的抗原和抗體後，在膜上加標記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復合物發生反應，最後加入顯色底物(如果抗人Ig是用酶標記的)或做放射自顯影(抗人Ig用125Ⅰ標記)以顯示結果

第一步：經電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離;

第二步：將已分離的抗原經電印跡轉移到硝酸纖維膜上;

第三步：將待檢病人血清加入覆蓋於硝酸纖維膜上;

第四步：加入標記的第二抗體使之覆蓋膜上;

第五步：加入顯色底物(或放射自顯影)顯現第二抗體

(二)凝集反應

細菌、紅細胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等都是不溶性的顆粒抗原，當與相應抗體結合，抗原與抗體結合形成凝集團塊，即稱為凝集反應(agglutination)。

1.直接凝集 直接凝集(direct agglutination)是將細菌或紅細胞與相應抗體結合產生的細菌凝集或紅細胞凝集現象。可用於傳染病診斷如肥達氏反應(Widal reaction)診斷傷寒病。或利用血細胞凝集現象檢查血型。

2.間接凝集 間接凝集(indirect agglutination)是用可溶性抗原包被在乳膠顆粒或紅細胞表面，與相應抗體混合出現的凝集現象。如用γ球蛋白包乳膠顆粒檢測類風濕關節炎病人血清中的類風濕因子，用甲狀腺球蛋白包被乳膠顆粒用於檢測甲狀腺球蛋的抗體。也可以將抗體吸附到乳膠顆粒上檢查臨床標本中的抗原，如細菌或真菌性腦膜炎抗體包被的乳顆粒，一旦與含有相應抗原的腦脊液混合，便可發生凝集，可進行快速診斷。故凝集反應即可測定抗原，也可測抗體，方法簡便、敏感。

3.抗球蛋白試驗 抗球蛋白試驗(antiglobulin test,coombs test)的原理為間接凝集試驗。例如應用於診斷自身免疫溶血性貧血症時，Rh+紅細胞與抗Rh血清間的反應。因抗Rh抗體是IgG只有兩個結合價，分子較小(不如IgM結合價多，分子大)很難直接引起Rh+紅細胞凝集。如果加入抗IgG的抗體，就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細胞。也就是經抗Ig的作用提高凝集反應的'靈敏度。

(三)補體參與抗原抗體反應

這一類反應主要包括溶血反應(hemolytic assay)、補體介導的細胞毒試驗(complement mediated cytotoxicuty test)及補體結合試驗(complement fixation test)。

1.溶血反應 抗體與紅細胞表面抗原相遇，形成紅細胞-抗體復合物即可使加入反應中的補體活化，導致紅細胞溶解，此方法可用於紅細胞的各種抗原或相應抗體的檢測，此法比凝集反應敏感。溶血反應也是用於抗體分泌細胞即空斑形成細胞(PFC)檢測的原理。

2.補體介導的細胞毒試驗各種有核細胞與針對其表面抗原的抗體相遇，所形成的免疫復合物能活化反應中的補體，引起細胞膜穿孔，在一定時間內，細胞仍能維持一定的形態不破碎，加入水溶性染如伊紅Y(eosin Y)或台盼藍(trypan blue)後，染料即可進入被活化補體穿孔的細胞，不帶相應抗原細胞膜保持完整的活細胞不著色。此方法可用於帶各種抗原的細胞的檢測，如進行細胞MHC抗原的鑒定，和進行淋巴細胞中T細胞總數或其亞類的計數。在一些免疫學實驗中也可用這種方法，根據需要特異地消除帶某種抗原的細胞。

3.補體結合試驗當抗原(可溶性或顆粒性)與相應抗體結合，由於濃度低不出現可見反應時，應用補體結合試驗可檢出此抗原抗體反應，它比凝集反應或沉澱反應靈敏度高。本法包括兩個抗原抗體系統。一為檢測系統由待檢樣品與已知抗原(或抗體)組成;另一為指示系統，由綿羊紅細胞(SRBC)和抗SRBC組成。另加入作為補體的新鮮豚鼠血清。試驗時試管中先加入檢測系統和補體，混合經37℃30分鍾使抗原、抗體、補體形成復合物，再加入指示系統，如出現溶血現象，說明檢測系統中沒有相對應的抗原抗體，補體是游離的指示系統的SRBC和抗體結合而出現溶血，即為反應陰性。如不出現溶血，表明檢測系統中有抗原抗體復合物並結合補體，則指示系統無多餘的補體作用而沒有溶血現象，即為陽性。

在敏感的抗原、抗體檢測方法(如酶標方法)出現之前補體結合試驗曾廣泛用於檢測各種細菌、病毒或螺旋體(如梅毒)的抗原或抗體，由於本試驗影響因素多，結果不穩定現已被新檢測方法所代替。

四、用標記抗體或抗原進行的抗原、抗體反應

用熒光素、同位素或酶標記抗體或抗原，用於抗原或抗體檢測是目前廣泛應用的敏感、可靠的方法。上述三種常用的標記物與抗原或抗體化學連接之後不改變後者的免疫特性。本方法可用於定性、定量或定位檢測。

1.免疫熒光技術免疫熒光技術(immunofluorescence techni)是用化學方法使熒光素標記的抗體(或抗原)與組織或細胞中的相應抗原(或抗體)結合，進行定性定位檢查抗原或抗體的方法。

(1)直接熒光法：把熒光抗體加到待檢的細胞懸液，細胞塗片或組織切片上進行染色，經抗原抗體反應後，洗去未結合的熒光抗體，將待檢標本在熒光顯微鏡下觀察，有熒光的部位即有相應抗原存在，此法可用於病毒感染細胞、帶某種特異抗原的細胞(如T細胞和B細胞)或病原菌的檢查，也可用於組織中沉著的免疫復合物的檢查。本法的缺點是檢查多種抗原，就需分別制備相應的多種標記抗體。

(2)間接熒光法：可克服直接法需制備多種熒光抗體的復雜操作。將組織或細胞上的抗原直接與相應抗體(不標記熒光)結合，此為第一抗體，再把能與第一抗體特異結合的熒游標記的抗免疫球蛋白抗體加入，此為熒游標記的第二抗體，觀察結果與直接法相同。間接法比直接法敏感性高，如果用於檢查抗原的第一抗體是人或動物的只需制備一種抗人或動物的免疫球蛋白熒光抗體

免疫熒光技術在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查抗原或抗體，如查出IgM抗體，可做為近期接觸抗原的標志，所以使用熒游標記抗IgM可診斷近期感染。除微生物學方面的應用外，還可利用單克隆抗體鑒定淋巴細胞的亞類。使用流式細胞儀(fluorescene-activated cell sorting,FACS)，能自動檢測細胞的大小、熒光強度。針對細胞表面不同抗原，可以使用兩種不同的熒光染料，如用異硫氰熒光素(FITC)發黃綠熒光，用羅丹明(TMRITC)發紅色熒光。由於熒光顏色不同標記兩種不同的抗體，對同一細胞進行雙標記染色。對淋巴細胞亞類鑒定起著巨大推動作用。應用間接熒光法也用於自身免疫病的抗核抗體檢查。

2.放射免疫分析法 放射免疫分析法(radioimmunoassay RIA)應用競爭性結合的原理，應作放射性同素標記抗原(或抗體)與相應抗體(或抗原)結合，通過測定抗原抗體結合物的放射活性判斷結果，本方法可進行超微量分析，敏感性高，可用於測定抗原、抗體、抗原抗體復合物。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。

放射免疫分析常用的有液相法和固相法兩種：

(1)液相法：將待檢標本(例如含胰島素抗原)與定時的同位素標記的胰島素(抗原)和定時的抗胰島素抗體混合，經一定作用時間後，分離收集抗原抗體復合物及游離的抗原，測定這兩部分的放射活性，計算結合率。在反應系統中，待檢標本的胰島素抗原與同位素標記的胰島素競爭奪戰性與胰島素抗體結合。非標記的抗原越多，標記抗原與抗體形成的復合物越少。非標記抗原含量與標記抗原抗體復合物的量呈一定的函數關系。預先用標準的非標記抗原作成標准曲線後，即可查出待檢標本中胰島素的含量

(2)固相法：將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然後加待檢標本，最後加標記抗體。測定固相載體的放射活性，常用的固相載體有溴化氰(CNBr)海豹化的紙片或聚苯乙烯小管

放射免疫分析法應用范圍廣泛，包括多種激素(胰島素、生長激素、甲狀腺素等)維生素、葯物、IgE等。

3.酶聯免疫分析法 酶聯免疫分析法(enzyme immunoassay,EIA)是當前應用最廣泛的免疫檢測方法。本法將抗原抗體反應的特異性與酶對底物高效催化作用結合起來，根據酶作用底物後顯色，以顏色變化判斷試驗結果，可經酶標測定儀作定量分析，敏感度可達ng水平。常用於標記的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)、鹼性磷酶(alkaline phosphatase)等。它們與抗體結合不影響抗體活性。這些酶具有一定的穩定性，製成酶標抗體可保存較長時間。目前常用的方法有酶標免疫組化法和酶聯免疫吸附法。前者測定細胞表面抗原或組織內的抗原;後者主要測定可溶性抗原或抗體。本法既沒有放射性污染又不需昂貴的測試儀器，所以較放射免疫分析法更易推廣。

(1)酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA):是與上述固相RIA相似的原理，將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應在固相載體表面進行政區。可用間接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。

(2)夾心法(sandwich assay):將已知的特異抗體包裝在固相載體(塑料板凹孔或紙片上)，加入待檢標本，標本中的抗原即可與載體上的抗原結合，洗去未結合的材料後加入該抗原的酶標記抗體，洗去未結合的酶標抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度，可定量測定抗原。

間接法(indirecr ELISA)常用於檢查特異抗體。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標本(可能含有相應抗體)，再加入酶標抗Ig的抗全(即第二抗體)，經加底物顯色後，根據顏色的光密度計算出標本中抗體的含量。

(3)BAS-ELISA：近年來對酶免設分析法的改進是使用生物素-親合素-過氧化物酶復合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統進一步提高檢測的敏感度。可用來檢測多種抗原抗體系統如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等。一個親合素(avidin)分子可以結合4個生物素分子(biotin)。結合非常穩定。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結合，而不影響後者的生物活性。一個抗體分子可偶聯90個生物素分子，通過生物素又可連接多個親合素。因此大提高檢測的敏感度。目前應用生物-酶標親合素系統(biotinavidin system- ELISA,BAS-ELISA)，它是通過生物素標記抗體連接免疫反應系統，同時藉助生物素化酶或酶標親合素引入酶與底物反應系統。

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❻ 艾滋病抗體的檢查方法

艾滋病病毒抗體檢測
艾滋病病毒抗體檢測：檢測血液中的艾滋病病毒抗體是目前最常用的檢測艾滋病病毒感染的實驗室方法，一般要經過兩個步驟：首先做初篩試驗，如果為陽性，再做確認試驗，確認試驗陽性才可診斷為艾滋病病毒感染。
常用的方法有：
1病原檢測病原檢測主要指用病毒分離培養、電鏡形態觀察、病毒抗原檢測和基因測定等方法從宿主標本中直接檢測病毒或病毒基因。由於前兩種方法難度大，且需要特殊設備和專業技術人員。因此僅抗原檢測和RT-PCR(反轉錄－PCR)可用於臨床診斷。
2 抗體檢測血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。根據其主要的適用范圍，可將現有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。
3 確證試劑篩檢實驗陽性血清的確證最常用的是Western blot（WB），由於該法相對窗口期較長，靈敏度稍差，而且成本高昂，因此只適合作為確證實驗。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高，WB已越來越滿足不了對其作為確證實驗的要求。FDA批準的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相對簡單，整個過程在1-1.5小時內即可結束。此法的主要缺點是需要昂貴的熒光檢測儀和有經驗的專業人員來觀察評判結果，而且實驗結果無法長期保存。現在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發布最終結果時以IFA的陰性或陽性為准，但不作為血液合格的標准。
4篩檢試驗篩檢試驗主要用於對供血員進行篩查，因此要求操作簡便，成本低廉，而且靈敏、特異。目前世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA，還有少數的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。ELISA有很高的靈敏度和特異性，操作簡單，僅需要實驗室配備酶標儀和洗板機即可應用，特別適合於試驗室大規模篩檢使用。顆粒凝集實驗是另一種操作簡單方便，成本低廉的檢測方法，該方法結果可通過肉眼判定，靈敏度很高，特別適合發展中國家或大量篩選供血員時使用，缺點是必須使用新鮮樣品，特異性較差。80年代後期發展起來的斑點印跡檢測（Dot-blot assay）是一種快速ELISA（Rapid ELISA）方法，這種方法操作極為簡便，過程短暫，整個過程多數在5-10分鍾內甚至3分鍾內即可結束，但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。金免疫測定是以膠體金為標記物，以硝酸纖維素膜為載體的固相免疫測定，分為滲濾和層析兩種形式。用於HIV抗體檢體金試紙條屬於金免疫層析，且大多數為間接法及雙抗原夾心法，兩種方法各有優缺點，但都簡單而快速，數分鍾即可得出結論，不需儀器設備，操作人員不需特殊訓練，試劑穩定，適用於單份測定等。