鑒別線蟲死活的方法

1. 松材線蟲病的檢疫方法是什麼

1、直觀檢驗：此種方法主要在產地調查時使用。在調查時仔細觀察樹木發育是否正常，注意察看有無樹脂分泌減少、停止，針葉變褐、萎蔫，枝幹及整株枯死的現象，同時觀察樹幹上有無天牛蛀食的痕跡、產卵孔、羽化孔等，如有再行解剖檢查。

2、解剖檢驗：用工具將可疑感病的樹木鋸斷劈開，看材質重量是否明顯減輕；木質部有無藍變現象；樹干內有無松褐天牛棲居的痕跡。

3、漏斗分離檢驗：從罹病木發病部位或天牛棲居處鑽取木材組織並粉碎，用雙層紗布包好，置於下方帶有膠管和截流夾的玻璃漏鬥上，加水浸泡12小時，取下部浸泡液離心，取其沉澱液15ml，置於解剖鏡下，對照松材線蟲的形態特徵進行檢查鑒定。

4、接種試驗：把分離到的松材線蟲接種到健康的松樹上，觀察健康樹是否發病。

2. 松材線蟲病的鑒定方法

1、形態鑒定：通過顯微鏡觀察線蟲頭部，尾部以及生殖器官等特徵來鑒定其是否屬於松材線蟲。
2、分子鑒定：BX-48松材線蟲自動化分子檢測系統
BX-48松材線蟲自動化分子檢測系統利用分子生物學原理，採用熒光PCR技術，利用松材線蟲特異性引物與探針，達到准確檢測松材線蟲的目的，准確率可達到100﹪；由於使用的是熒光PCR技術，整個檢測過程由儀器自動化完成，故無需人工使用顯微鏡觀察松材線蟲來進行判讀，從而解決了人工鏡檢因視覺疲勞降低工作效率的問題，亦不會出現誤讀誤判，完全避免人為出現誤判的可能性，同時鑒定結果簡單易讀，窗口直接顯示樣本內是否含有松材線蟲；操作簡單便捷，只需將試管放入檢測位內，其餘工作均在電腦上通過滑鼠完成，大大減少了操作人員的勞動強度；該設備擁有48個檢測位，可同時檢測大批樣本，進一步提高工作效率。

3. 在野外如何識別松材線蟲病，該病害在普查和調運檢疫中的取樣和鑒定方法

野外識別是看是否出現松樹枯死、針葉褪色、黃化、枯萎以及呈紅褐色等松針變色症狀等異常情況。取樣鑒定是否發生松材線蟲病。

取樣方法和鑒定方法具體參照最新《松材線蟲病防治技術方案》指導：

（三）取樣。

1.取樣對象。抽取尚未完全枯死或者剛枯死的松樹，不應當抽取針葉已全部脫落、材質已腐朽的枯死樹。可參照以下特徵選擇取樣松樹：

——針葉呈現紅褐色、黃褐色的松樹；

——整株萎蔫、枯死或者部分枝條萎蔫、枯死，但針葉下垂、不脫落的松樹；

——樹幹部有松褐天牛等媒介昆蟲的產卵刻槽、侵入孔的松樹；

——樹幹部松脂滲出少或者無松脂滲出的松樹。

2.取樣部位。一般在樹干下部（胸高處）、上部（主幹與主側枝交界處）、中部（上、下部之間）3個部位取樣。其中，對於僅部分枝條表現症狀的，在樹幹上部和死亡枝條上取樣。對於樹干內發現媒介昆蟲蟲蛹的，優先在蛹室周圍取樣。

3.取樣方法。在取樣部位剝凈樹皮，用砍刀或者斧頭直接砍取100-200克木片；或者剝凈樹皮，從木質部表面至髓心鑽取100-200克木屑；或者將枯死松樹伐倒，在取樣部位分別截取2厘米厚的圓盤。所取樣品應當及時貼上標簽，標明樣品號、取樣地點（需標明地理坐標）、樹種、樹齡、取樣部位、取樣時間和取樣人等信息。

4.取樣數量。對需調查疫情發生情況的小班進行取樣時，總數10株以下的要全部取樣；總數10株以上的先抽取10株進行取樣檢測，如沒有檢測到松材線蟲，應當繼續取樣檢測，直至全部取樣檢測為止。

5.樣品的保存與處理。採集的樣品應當及時分離鑒定，樣品分離鑒定後須及時銷毀。樣品若需短期保存，可將樣品裝入塑料袋內，扎緊袋口，在袋上扎若干小孔（若為木段或者圓盤無需裝入塑料袋），放入4℃冰箱。若需較長時間保存，要定期在樣品上噴水保濕，保存時間不宜超過1個月。

（四）分離鑒定。

1.分離。採用貝爾曼漏鬥法或者淺盤法分離松材線蟲，分離時間一般需12小時以上。將分離液體收集到試管或者燒杯中，通過自然沉澱或者使用離心機處理後進行鑒定。

2.鑒定。

（1）常規顯微鏡形態鑒定。僅適用於雌雄成蟲，以雌成蟲為主。將製作好的玻片置於顯微鏡下觀察其形態，判別是否為松材線蟲。若分離的線蟲為幼蟲，需培養至成蟲後進行鑒定。

（2）分子檢測（適用於各蟲態）。採用PCR檢測技術判別是否為松材線蟲。

松材線蟲分離、培養、檢測鑒定的具體方法可參照國家標准《松材線蟲病檢疫技術規程（GB/T 23476）》進行。

其中，PCR檢測技術通常是通過松材線蟲自動化分子檢測系統來完成的，這是能准確無誤測出松材線蟲的一種方法。

4. 根結線蟲病如何識別與防治

（1）為害症狀寄生在植物的根上，形成許多根瘤狀物，即根結。根結初為白色，後成淡褐色，可互相連接成節結狀。被寄生的植株，嚴重時地上部分表現為營養不良，生長勢弱，結瓜少而小，甚至不結瓜。瓜類整個生育期可多次重復被侵染，根結線蟲還可傳播病毒病。（2）防治方法①農業防治。與禾本科作物或蔥、蒜等實行3年以上的輪作或水旱輪作；用雞糞或棉籽餅作基肥，對線蟲有一定的抑製作用；作物收獲後可大水漫灌浸淹1個月，殺滅線蟲；采瓜後，在炎熱季節，翻耕澆灌並覆膜，曬5～7天，殺蟲效果很好。②葯劑防治。在播種和定植前，用殺線蟲劑處理土壤。因殺線蟲劑多為高毒農葯，一定要注意用葯安全。施葯方法，可參看產品使用說明書。