豬源鏈球菌通用熒光pcr檢測方法

Ⅰ 常見動物源性檢測試劑盒都有哪些

常見的檢測動物源性成分的試劑盒有兩大類，一類是分子生物學方法，一類是免疫學方法。免疫學方法，主要是通過針對動物特定蛋白的抗體，進行識別並顯色，最終達到鑒別物種的目的。但是這種方法，對熟化或鹵汁的處理後，蛋白結構易發生變化，進而抗體不能很好識別，最終導致不能鑒別。分子生物學方法主要是通過對動物特定的保守基因片段，設計引物，通過體外擴增技術，來實現對物種的鑒別。
分子生物學鑒別，目前常見有兩種方法，一種是常規PCR方法，一種是實時熒光定量PCR方法。常規PCR方法，主要通過PCR體外擴增，然後將擴增產物進行電泳，以是否有預期大小的擴增產物產生，進而對產物進行序列測定比對後，達到最終確定。實時熒光PCR方法，則是通過PCR體外擴增，在擴增過程中，摻入會發光的熒光基團，發光多少與摻入的熒光基團多少正相關，摻入熒光基團的多少與擴增的多少正相關，最終能隨著擴增過程，實時得到一條擴增曲線，進而判斷是否擴增了？擴增的量有多少？優點是，避免制膠電泳，節約電泳時間，可初步實現對擴增模板量多少的判斷。
目前看，北京寶科維食安生物能提供的常規PCR方法試劑盒品種很齊全，基本涵蓋了常見的動物種，有：豬源性成分檢測試劑盒，牛源性成分檢測試劑盒，羊源性成分檢測試劑盒，馬源性成分檢測試劑盒，驢源性成分檢測試劑盒，雞源性成分檢測試劑盒，鴨源性成分檢測試劑盒，鵝源性成分檢測試劑盒，兔源性成分檢測試劑盒，海狸鼠源性成分檢測試劑盒，狐狸源性成分檢測試劑盒，氂牛源性成分檢測試劑盒，鼠源性成分檢測試劑盒。
北京寶科維食安生物能提供的實時熒光PCR方法試劑盒品種很齊全，基本涵蓋了常見的動物種，有：豬源性成分檢測試劑盒，牛源性成分檢測試劑盒，羊源性成分檢測試劑盒，馬源性成分檢測試劑盒，驢源性成分檢測試劑盒，雞源性成分檢測試劑盒，鴨源性成分檢測試劑盒，鵝源性成分檢測試劑盒，兔源性成分檢測試劑盒，狐狸源性成分檢測試劑盒，水貂源性成分檢測試劑盒。

Ⅱ 熒光定量PCR技術的熒光定量PCR的方法

接下來我們就來了解一下熒光定量的主要方法，我們如何選擇合適的方法？熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種：熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應的可分為特異類和非特異類兩類，特異性檢測方法是在PCR反應中利用標記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產物；而非特異性檢測方法是在在PCR反應體系中，加入過量熒光染料，熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈後，發射出熒光信號。前者由於增加了探針的識別步驟，特異性更高，但後者則簡便易行。

非特異性SYBR Green I染料法
SYBR Green I是一種結合於所有dsDNA雙螺旋小溝區域的具有綠色激發波長的染料（結合示意圖），在游離狀態下，SYBR Green I發出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結合後，熒光大大增強（作用機理圖）。因此，SYBR Green I的熒光信號強度與雙鏈DNA的數量相關，可以根據熒光信號檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數量。
特異性Taqman水解探針法
Taqman熒光定量技術是以Taqman熒光探針為基礎，Taqman熒光探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個熒光發射基團和一個熒光淬滅基團。探針完整時，發射基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；
PCR擴增時，Taq酶的5』－3』外切酶活性將探針酶切降解，使熒光發射基團和熒光淬滅基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。從而實現定量（如下圖）。常用的熒光基團是FAM, TET, VIC, HEX。

Ⅲ 食品中鏈球菌檢測方法

MM_FS_CNJ_0352出口食品 B群鏈球菌 CAMP試驗法

MM_FS_CNJ_0352

出口食品中B群鏈球菌檢驗方法

1.適用范圍

本方法適用於出口肉類、奶和奶制口中B群鏈球菌的檢驗。其他食品可參照使用。

2.主要試劑和儀器

2.1.主要試劑(包括培養基)

Todd,Hewitt肉湯〔參見附錄A(補充件)A1〕;

牛心湯培養基〔參見附錄A(補充件)A2〕;

牛心湯增菌培養基〔參見附錄A(補充件)A3〕;選擇性

牛心湯瓊脂〔參見附錄A(補充件)A4〕;

綿羊血瓊脂平板〔參見附錄A(補充件)A5〕;

β-溶血素帶〔參見附錄A(補充件)A6〕;

溶血素帶〔參見附錄A(補充件)A7〕; β-

綿羊血球〔參見附錄A(補充件)A8〕;

生理鹽水:滅菌的0.85,NaCl;

(補充件)A9〕; 革蘭氏染色液〔參見附錄A

接觸酶(過氧化氫酶)試驗〔參見附錄B(補充件)〕。

2.2.儀器

離心機5000r,min，離心管50mL，10mL;

蔡氏濾器;

微孔濾膜，孔徑0.45μm;

玻璃抽濾瓶;

玻璃水循環真空泵;

電熱恆溫箱;溫度20,60?;

顯微鏡;

定性濾紙;

不銹鋼厭氧菌培養罐;

電冰箱;

乳缽、研棒或均質器;

L形玻璃棒;

金黃色葡萄球菌菌體ATCC,25923。

3.樣品的制備

3.1.肉類

3.1.1.冷凍產品應在2,5?過夜解凍，或在45?及以下經15min解凍，立即檢驗。若不能及時檢驗，應置於,15?左右暫存。其他非冷凍易腐的食品，亦應置於4?冰箱保存。

3.1.2.以無菌操作稱取剪碎的肉類樣品25g，置於滅菌之乳缽內或均質杯內，加入25mL滅菌生理鹽水進行研磨或均質(8000,10000r,min，均質1min)，移

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入盛200mL生理鹽水的5000mL廣口瓶內，混合均勻，製成1?10稀釋液。

3.2.奶和奶製品類

3.2.1.鮮奶、酸奶:以無菌手續去掉瓶罩紙蓋，瓶口經火焰滅菌後，用無菌操作吸取25mL檢樣，放入裝有225mL滅菌生理鹽水的三角燒瓶內，振搖均勻。

3.2.2.奶粉:以無菌手續開封取樣，稱取25g放入盛有225mL溫熱的滅菌生理鹽水且裝有適量玻璃珠的滅菌廣口瓶內，振搖使其充分溶解混勻。

3.2.3.乳酪:先用滅菌刀削去部分表面封蠟，然後用點燃的酒精棉球滅菌表面後，用滅菌刀切開乳酪，再用無菌操作切取表層和深層檢樣25g，置於滅菌乳缽內切碎，加入25mL生理鹽水研成糊狀，移入盛有200mL滅菌生理鹽

水的廣口瓶內，混合均勻。製成1?10的稀釋液。

3.3.其他食品

樣品的制備取決於食品的種類和狀態。固體或半固體食品按3.1.2或3.2.3進行。液體食品按4.2.1進行。

4.過程簡述

.1.增菌培養 4

將上述制備的檢樣各取10mL分別接種於100mL牛心湯培養基內，如檢樣污染較嚴重，可同時按上述量接種於選擇性牛心湯增菌液內，經35?1?培養15h，

-帶或CAMP-點試驗。 再進行CAMP

4.2.CAMP試驗的條件

?1?培將CAMP試驗的綿羊血瓊脂平板置於不銹鋼厭氧菌培養罐內，在35養。

4.3.CAMP-帶試驗

取β-溶血素帶1,2條平行輕貼於綿羊血瓊脂平板上，間距20mm，將樣品或經過增菌的培養物直接在β-溶血素帶兩側(相距3,5mm)處垂直劃線3,4條或塗布接種，經14,18h培養後觀察結果。如在接種線與β-溶血素帶周圍朦朧溶血區重疊處能見到協同產生清晰的「箭頭」狀的增強溶血區為陽性反應，可鑒定為B群鏈球菌。不見增強溶血為陰性反應，判為B群鏈球菌陰性。

4.4.CAMP-點試驗

將樣品或經過增菌的培養物直接劃線或用L形玻璃棒塗布接種於綿羊血瓊脂平板上，經14,18h培養後，用接種環取β-溶血素滴加在圓形突起，細小的可疑為鏈球菌的單個菌落邊緣，再將平板進行孵育，分別在30，45，60min檢查溶血變化情況。在滴加β-溶血素的菌落邊緣有協同產生「扇形」增強溶血區的為陽性反應，可鑒定為B群鏈球菌。不出現增強溶血現象的為陰性反應，判為非B群鏈球菌。

每次檢驗時都要用已知陽性菌株作為對照試驗。 4.5.CAMP-帶或CAMP-點試驗陽性反應，再進行革蘭氏染色，鏡檢和接觸酶試驗，以此來與其他溶血性細菌如李斯特氏菌，肉毒梭狀芽胞桿菌和葡萄球菌等區別開。

Ⅳ 熒光檢測方法

熒光檢測是一種自然發光反應，通過熒光素酶與 ATP進行反應，可檢測人體細胞、細菌、黴菌、食物殘渣，在15秒鍾內得到反應結果。光照度通過專用設備進行測量，並以數字形式予以表示，在1975年首先被應用到食品工業中，在1985年在化妝品製造業中得到應用。
熒光定量：採用國際主流的熒光定量PCR技術，迅速提升技術水平。
結果穩定：檢測結果CV值與進口全自動PCR儀接近，具有自檢功能，避免錯誤數據的輸出。
封閉操作：全部檢測過程均為閉管操作，於反應管處檢測熒光，有效防止污染，解決PCR技術中最棘手之難題。
准確定量：滿足臨床對量化的需求，定量盪圍寬，可涵蓋大部分病原微生物，自動曲線擬合。
靈敏度高：利用光譜信號靈敏性的優勢，有效提高檢測靈敏度。
安全：全程無毒檢測。
操作簡便：省去後處理的煩瑣過程。
直接列印：直接列印結果，無須記錄大量數據。
升級版：FS1000有與電腦連接的數傳輸口，可以連接電腦，根據用戶需要提供先進分析軟體，全面分析實驗數據。（電腦和列印機選配件）
故障率低：維護非常簡單。
節約資源：可利用現用PCR擴增儀，最大限度節約資源。

Ⅳ PCR產物的檢測方法有哪些都有什麼原理

1.瓊脂糖凝膠電泳 同時點分子量marker，根據marker條帶判斷產物分子量大小，從而大致判斷是不是你要的
2.酶切 已知你產物的序列，看上面有什麼酶切位點，用一個酶或者兩個酶切斷，看與理論預測的條帶數目和大小是否一致。一般檢測有以上兩步就行了，如果需要知道確切的需要進行3
3.測序 連接到pMD-18t 載體上，轉到大腸桿菌中。拿到公司去測序，測序結果通過gene bank比對看與哪個基因一致，這種方法最准確
4.表達 pcr產物連到真核或者原核表達載體上，適宜條件表達出來以後的蛋白做質譜分析，看與理論產物表達的蛋白是否有一致的片段

Ⅵ 非洲豬瘟的檢測方法有哪些非洲豬瘟疫情防控方法是什麼

熒光定量 PCR 方法，該方法是將光譜技術引入到PCR 反應中，通過熒光信號的強弱變化定量測定特異性擴增產物的量，解決了常規 PCR 方法敏感性低和電泳檢測中溴化乙錠對環境的污染問題。

等溫擴增法，該方法是一種新興的分子生物學檢測方法，等溫擴增方法不需要 PCR 中的變性、退火步驟，即可完成對靶序列的循環擴增，大幅縮短了時間，整個擴增反應時間一般少於 60 min，而常規PCR 方法的反應時間一般需要 2 h 以上。等溫擴增試劑盒適合現場檢測，靈敏度高，能夠大幅提高豬瘟防控的可行性。

要減少場外人員和車輛進入豬場，要對人員和車輛入場前徹底消毒，要對豬群實施全進全出飼養管理，要對新引進生豬實施隔離，要按規定申報檢疫。

非洲豬瘟防控注意事項

養殖場應該堅持全進全出，自繁自育的養殖模式，構建完善的封鎖隔離措施，避免豬和野豬直接接觸。養殖場在生豬調運過程中，盡量不要跨省引進種豬，必須引種時，一定要進行嚴格的產地檢疫、疫情檢測，嚴格執行落地報告制度和隔離觀察制度。

殖場內部如果發現非洲豬瘟可疑疫情，嚴格按照《非洲豬瘟疫情應急預案》進行處置，迅速採取應急措施，預防疫情傳播和蔓延。