① xpert檢測是什麼pcr方法
xpert檢測是GeneXpert實時熒光定量PCR快速檢測。
目的對GeneXpert實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)在快速檢測臨床糞便標本中艱難梭菌的應用進行評估。
方法採用雙拭子蘸取臨床未成形糞便標本,一支拭子用於GeneXpert實時熒光定量PCR檢測艱難梭菌毒素基因tcdB,另一支用於常規厭氧菌培養檢測;
對GeneXpert實時熒光定量PCR檢測結果與常規厭氧菌培養結果的一致性進行統計學分析,並計算GeneXpert實時熒光定量PCR的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值等參數。
結果臨床收集到141例未成形糞便標本,GeneXpert實時熒光定量PCR檢出艱難梭菌毒素基因tcdB陽性42例,其中常規厭氧菌培養陽性34例,兩者一致性較好(Kappa=0.775 0,P0.01)。
GeneXpert實時熒光定量PCR的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為87.2%、92.2%、81.0%和94.9%。
結論 GeneXpert實時熒光定量PCR直接檢測糞便標本中的艱難梭菌具有檢測快速、操作簡便等優點,有重要的臨床應用價值。
PCR的每個循環過程包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三個不同的事件:
1、變性:加熱使模板DNA在高溫下(94℃左右)雙鏈間的氫鍵斷裂而形成兩條單鏈;
2、退火;使溶液溫度降至50~60℃,模板DNA與引物按鹼基配對原則互補結合;
3、延伸:溶液反應溫度升至72℃,耐熱DNA聚合酶以單鏈DNA為模板,在引物的引導下,利用反應混合物中的4種脫氧核苷三磷酸(dNTP),按5'一3』方向復制出互補DNA。