用化學的方法怎麼檢測hl抗

『壹』 磷酸根離子的檢驗方法有哪些

「

隨著環保意識的加強，近兩年各地各行業紛紛重視磷污染問題，磷酸鹽怎麼檢測？怎麼知道它超標呢？超標多少也不知道呀？下面是常見的磷酸鹽檢測方法有3種，滴定法、分光分度法、快速測試包法。

福克斯 運動從此更智能
廣告
福克斯 運動從此更智能
」

一、滴定法

Th(IV)鹽與磷酸鹽在PH2～3時能定量生產沉澱及EDTA又能與Th(IV)生成穩定絡合物的性質建立了Th沉澱-EDTA滴定法測定污水磷含量。

優點：此法可非常精準測試磷含量，區別於儀器分析的辦法因為磷含量比較高超出測定范圍，需要多次吸收進行檢測引起實驗誤差。

缺點：比較繁瑣，為傳統的化學法滴定，耗時耗力，不符合現在科技需求。

二、分光光度法

分光光度計採用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光線透過測試的樣品後，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。

分光光度法測定磷含量是利用鉬藍法，鉬藍法一般分為氯化亞錫法和抗壞血酸法2種。氯化亞錫法顏色穩定時間比較段，一般幾分鍾且容易收鐵離子的干擾。抗壞血酸鉬藍法具有顏色穩定時間長，鐵離子干擾小等優點是最受歡迎的。

優點：精準度也比較高，操作相對滴定法要方便省時很多。

缺點：需要花費幾千到幾萬的費用購買儀器設備。

三、快速測試包法

快速測試包法也是利用鉬藍法，不需要儀器設備，只需要一量個小管和試劑即可快速測試出磷含量，通俗理解就是配備比色卡肉眼比色看濃度范圍。

優點：便宜，只需要幾百塊可以檢測幾十次、快速，只需要5分鍾可以出結果且輕巧方便。

缺點：不夠精準，只可估算個大范圍值。

『貳』 果蔬 抗壞血酸 檢測

中華人民共和國國家標准
乙醚萃取法
GB 12143.3-89
Determination method for L-ascorbic acid in fruit and vegetable juice beverages- Ethyl ether extraction method

1 主題內容與適用范圍
本標准規定了使用2,6-二氯靛酚滴定-乙醚萃取法測定果蔬汁飲料中L-抗壞血到含量的方法。
本標准適用於濃縮果蔬汁、果蔬原汁、果蔬汁飲料、果蔬汁碳酸飲料及果蔬汁固體飲料中L－抗壞血酸的測定,尤其適用於深色果蔬汁飲料中L-抗壞血酸的測定。但不適用於脫氫抗壞血酸的測定。
2 引用標准
GB 601 化學試劑 標准溶液制備方法
GB 686 化學試劑 丙酮 HG 3-1002 化學試劑 乙醚
3 原理 本法根據氧化還原反應原理,2,6-二氯靛酚能被L-抗壞血酸還原為無色體,微過量的2,6-二氯靛酚用乙醚提取,然後由醚層中的玫瑰紅色來確定滴定終點。
4 試劑 所用的試劑均為分析純,所用的水均為蒸餾水或同等純度的水(以下簡稱水)。
4.1 丙酮：符合 GB 686.
4.2 乙醚：符合HG 3-1002.
4.3 10%硫酸銅溶液：稱取10g硫酸銅(CuSO4·5H2O)溶解於水,並稀釋至100ml.
4.4 2%草酸溶液：稱取20g草酸(C2H2O4·2H2O)溶解於水,並稀釋至1L. 1
4.5 0.1 mol/L(——I2)碘標准滴定溶液：按GB 601 第2章第10條配製與標定,貯存 2於棕色瓶中。 1 1
4.6 0.01 mol/L(—I2)碘標准滴定溶液：將0.1mol/L(—I2)碘標准滴定溶液在使用時 2 2 稀釋V25mL→V250mL,濃度以C1表示。
4.7 0.88mg/mL抗壞血酸標准溶液：稱取0.22g抗壞血酸,用2%草酸溶液(4.4)溶解並稀釋到250mL。 標定：吸取抗壞血酸標准溶液20.00mL,加0.5%澱粉指示液(4.10)1mL,用0.01 mol/L( 1 —I2)(4.6)碘標准滴定溶液滴定至呈微藍色為止。
2 C1·V1
C2 = —————-×88 ……………………………………(1)
20
式中：C2--L-抗壞血酸溶液的濃度,mg/mL;
C1--碘標准滴定溶液的濃度,mol/L;
V1--標定時所用碘標准滴定溶液的體積,ml;
1 88--1 mL 1 mol/L(———I2)碘標准滴定溶液相當於L-抗壞血酸的毫克數。 2
4.8 0.088 mg/ML L-抗壞血酸標准溶液：吸取0.88 mg/mL L-抗壞血酸標准溶液(4.7) 25.00mL,用2%草酸溶液稀釋,V25mL→V250mL.註：4.7和4.8的L-抗壞血酸溶液在使用時配製。
4.9 2-6-二氯靛酚標准滴定溶液：稱取200mg,2,6-二氯靛酚,用少量熱的重蒸餾水濕潤,然後再慢慢加入熱的重蒸水,攪拌溶解,過濾。冷卻後,濾液用重蒸餾水稀釋到1L.保 存於冰箱中。一星期至少標定一次。標定：吸取10.00mL L-抗壞血酸標准溶液(4.8)置於50mL比色管中,按測定樣品的步 驟標定2.6-二氯靛酚溶液的滴定度。
m
F = —— …………………………………………(2)
V
式中：F--2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,即 1 mL 2,6-二氯靛酚溶液相當於L-抗壞血酸的毫克數,mg/mL;
m--10 mL
L-抗壞血酸標准溶液中含抗壞血酸的量,mg;
V--標定時所用2.6-二氯靛酚溶液的體積,mL.
4.10 5g/L澱粉指示液：稱取0.5g可溶性澱粉,用5mL冷水調勻,將所得乳濁液在攪拌下徐徐注入100 mL沸騰著的水中,再煮沸2～3min,使溶液透明。加0.1g碘化汞作保存劑。
5 儀器 實驗室常用儀器及下列各項：
5.1 10 mL微量滴定管。
5.2 50 mL 100mL比色管。
5.3 125 mL分液漏斗。
6 試液的制備 水果、蔬菜中抗壞血酸的含量見附錄 A。
6.1 濃縮汁 在濃縮汁中加入與在濃縮過程中失去的天然水分等量的水,使成為原汁。然後同原汁 一一樣取一定量樣品,稀釋、混勻供測。
6.2 原汁 稱取含抗壞血酸4～10 mg有代表性的樣品（精確到0.001g）,用2%草酸溶液稀釋到200 mL,混勻供測。
6.3 果汁飲料、果蔬汁水
6.3.1 抗壞血酸含量在0.05mg/mL以下的樣品,混勻後直接取樣測定。
6.3.2 抗壞血酸含量在0.05mg/mL以上的樣品,稱取含抗壞血到4～10mg有代表性的樣品（精確到0.001g）,用2%草酸溶液稀釋到200mL,混勻供測。
6.4 果蔬汁碳酸飲料 先將樣品旋搖到基本無氣泡後,按6.3條制備。
6.5 固體飲料 稱取含抗壞血酸4～10mg有代表性的樣品(精確到0.001g),用2%草酸溶液溶解並稀釋 至200mL,混勻供測。
6.6 乙醚抽提處理 對於高度乳化或樣液色澤較深且易被乙醚抽提的樣品,取樣後置分液漏斗中。加30mL乙醚,充分振搖但勿使之乳化。待分層後將下層樣液放入200mL容量瓶中,分液漏斗中加入 20mL2%草酸溶液。適當振搖,待分層後,將下層水溶液放入上面的200mL容量瓶中。如此反復操作4次,將每次的下層水溶液均放入200mL容量瓶內,然後用2%草酸溶液稀釋至刻度
6.7 空白試液的制備 按試液制備中所確定的取樣量稱取同一樣品(精確到0.001g),置於250mL錐形瓶中,加 20mL10%硫酸銅溶液,加水使總體積約為100mL,置於墊有石棉網的電爐上,小心加熱至沸並 保持微沸15min,然後用流動水冷卻到室溫。將此溶液轉移到200mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,供空白測定。
7 分析步驟
7.1 試液的制定 取10～15支50mL比色管,在每支比色管中加入10.00mL按第6章制備好的試液,各加2. 5mL丙酮。放置3min後,在第一支比色管中加入1 mL2,6-二氯靛酚溶液,充分混勻,精確控制40s後,加入2 mL乙醚,充分振搖,放置幾分鍾,待乙醚與水溶液分層後,觀察醚層有無 出現玫瑰紅色。當出現淡玫瑰紅色時,則表明已達到測定的暫定終點。如果2,6-二氯靛酚 全部被抗壞血酸還原,乙醚層保持無色,則在第二支比色管中加入1.5mL 2,6-二氯靛酚溶 液。如還不顯紅色,再逐一按2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0mL的量加入2,6-二氯靛 酚溶液,直到乙醚層出現玫瑰紅色達到暫定終點為止。這時所加的2,6-二氯靛酚的量常常 是過量的,所以需進一步試驗,確定精確的終點。如果加到3.0mL2,6-二氯靛酚溶液時出現玫瑰紅色,則從第六支加有試液的比色管中開始分別加入2.6、2.7、2.8、2.9mL 2,6-二氯靛酚溶液,直至呈現淡玫瑰紅色為止。如在2.9mL剛呈紅色,則2.9mL為精確終點。如加到2.9mL 2,6-二氯靛酚溶液仍不顯玫瑰紅色,則上面的3.0mL就是精確終點。所用2,6-二氯靛酚溶液為α毫升。對於抗壞血酸含量低於2mg/100g的樣品,用100mL比色管直接加倍取樣測定。丙酮與乙醚的加量也相應加倍,操作同上。對於同一個被測樣液需平行測定三次。
7.2 空白試液的測定 吸取空白試液10.00mL於比色管中,同7.1加丙酮並逐一按0.05、0.10、0.15、0.20mL 的量加入2,6-二氯靛酚溶液,測得在乙醚層中剛呈現玫瑰紅色所需的2,6-二氯靛酚溶液的 量為b毫升。
8 結果的表示
8.1 計算
(a-b)×F
X = —————×100……………………………………(3)
m
式中：X--100g(或mL)樣品所含L-抗壞血酸的毫克數,mg/100g(或mL);
a--測定試液時所需2,6-二氯靛酚溶液的體積,mL;
b--測定空白試液時所需2,6-二氯靛酚溶液的體積,mL;
f--2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,mg/mL,即每mL此溶液相當於L-抗壞血酸的mg數；
m--10 mL試液中所含樣品的量,g(或mL). 註：以誤差在允許范圍內的三次測定結果的算術平均值報告結果,精確到小數點後第一位。
8.2 允許誤差 同一樣品三次測定結果的相對偏差為：其抗壞血酸含量大於或等於10mg/100g的樣品應小 於2%,含量小於10mg/100g的樣品應小於5%.
附 錄 A 水果、蔬菜中抗壞血酸含量 （參考件）
表 A1 mg/100g

名 稱 含 量 名 稱 含 量 名 稱 含 量
葡 萄 1～2 荔 枝 3～30 番 茄 8～33
柚 39～51 龍 眼 60 南 瓜 7～14
沙田柚 123 枇 杷 16 冬 瓜 8～18
甜 橙 54 無花果 1 黃 瓜 4～14
橙 37 桑葚（白） 5 苦 瓜 16～84
柑 桔 34 桑葚（紫） 19 青 豆 24
檸 檬 40 香 蕉 6～19 菜 豆 6～14
蘋 果 微～ 2 菠 羅 7～24 胡蘿卜 6～19
沙 果 1 椰子（肉） 2 白蘿卜 11～37
海 棠 2 椰子（水） 2 紅蘿卜 11～27
梨 1～4 橄 欖 21 青蘿卜 16～31
桃 3～10 栗 子 60 心裡美蘿卜 34
楊 桃 8～18 蓮 子 17 蓮 藕 37～55
杏 7～10 芒 果 21～41 捲心菜 60
李 1 菱 5 莧菜（紅） 38～48
草 莓 35 刺 梨 25～85 雪裡蕻 83
櫻 桃 3～11 獼猴桃 213 芹 菜 6～41
番石榴 28～74 西 瓜 3～7 柿子椒 56～114
棗 540 甜 瓜 7～15 山 楂 89
哈蜜瓜 13

註：本表摘自《食物成分表》,1985年版,中國醫科院衛生研究所編。

附加說明：
本標准由中華人民共和國輕工業部提出。
本標准由輕工業部食品發酵工業科學研究所技術歸口。
本標准由輕工業部食品發酵工業科學研究所負責起草。
本標准起草人龔玲娣、徐清渠。

國家技術監督局1989-12-29批准 1990-10-01實施

『叄』 酶聯免疫法的檢測方法

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：
一、將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。
二、加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。
三、加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。
四、加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。
根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。
在臨床檢驗中，此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用於包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步法檢測。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象，此時反應後顯色的吸光值（位於抗原過剩帶上）與標准曲線（位於抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結果將低於實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，顯然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。採用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由於去除了Fc段，從而可消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標（參見6.2）。
雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。
雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用於測定，因此其敏感度相對高於間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法。本法關鍵在於酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合適的標記方法。 在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低於實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。 間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：
⑴將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。
⑵加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。
⑶加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。
⑷加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。
本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。
間接法成功的關鍵在於抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果，但應盡可能予以純化，以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質，例如以E.Coli為工程酶的重組抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能與受過E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗體發生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質，例如來自人血漿或人體組織的抗原，如不將其中的Ig去除，試驗中也發生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白，也會因競爭吸附而影響包被效果。
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性抗體。病人血清中受檢的特異性IgG只佔總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強，非特異IgG可直接吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中，抗原包被後一般用無關蛋白質（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封閉（blocking）固相上的空餘間隙。另外，在檢測過程中標本須先行稀釋（1:40~1:200），以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。 競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：
⑴將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。
⑵待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地佔去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫後，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。
⑶加底物顯色：參考管中由於結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。一般情況，是通過方波伏安法，檢測培養體系的峰電流，通過峰電流與抗原抗體的線性關系來最終確定體系的最終檢測目標的濃度。
當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺於陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可採用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然後加入抗原，形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質，然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合，抗HBc ELISA一般採用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合，洗滌後再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般採用此法。 血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，後者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG後再測定特異性IgM。操作步驟如下：
⑴將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。
⑵加入稀釋的血清標本：保溫反應後血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。
⑶加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。
⑷加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。
⑸加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。 親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。維生素H，分子量244.31，存在於蛋黃中。用化學方法製成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為穩定。由於1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯起來，就可大提高ELISA的敏感度。
親和素－生物素系統在ELISA中的應用有多種形式，可用於間接包被，亦可用於終反應放大。可以在固相上先預包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合，通過親和素－生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結合點充分暴露。另外，在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然後連接親和素－酶結合物，以放大反應信號。 在臨床檢驗中一般採用商品試劑盒進行測定。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
⑴已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；⑵酶標記的抗原或抗體（結合物）；
⑶酶的底物；
⑷陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標准品和控制血清（定量測定中）；
⑸酶聯物（結合物）及標本的稀釋液；
⑹洗滌液；
⑺酶反應終止液。

『肆』 免疫檢測方法

免疫檢測方法大全2017

免疫學檢測技術的用途非常廣泛，它們可用於有關免疫疾病的診斷、療效評價及發病機制的研究。如對傳染病、免疫增殖性疾病、免疫缺損病、超敏反應、自身免疫病、移植排斥反應腫瘤的免疫學檢測，對診斷、治療均有很大幫助。此外在醫學生物學研究中對抗原性物質或細胞的定性、定量檢查不僅推動了對各種免疫學現象的研究，而且擴大免疫學與醫學生物許多領域的聯系。本章僅介紹常用免疫學檢測方法的原理，簡要過程和實用意義。下面是我為大家帶來的關於免疫學檢測法的知識，歡迎閱讀。

第一節抗原或抗體的檢測

一、檢測的原理

藉助抗原和抗體在體外特異結合後出現的各種現象，對樣品中的抗原或抗體進行定性、定量、定位的檢測。

1.抗原與抗體的親和力(affinity)抗原抗體的結合就像酶與底物的結合，激素與其受體的結合一樣不是化學的反應，而是非共價鍵的可逆的結合。抗原決定簇和抗體分子可變區互補構型，造成兩分子間有較強的親和力。空間構型互補程度不同，抗原和抗體分子之間結合力強弱也不同。互補程度高，則親和力強。此外，反應溫度、酸鹼度和離子濃度對抗原和抗體分子上各基因的解離性和電荷特性也有重要的影響，抗體與抗原決定簇之間的結合力大小可用親合力來表示。高親合力的抗體與抗原的結合力強，即使抗原濃度很低時也有較多的抗體結合抗原形成免疫復合物。

2.抗原或抗體外檢測原理根據抗原抗體結合形成免疫復合物的性狀與活性特點，對標本中的抗原或抗體進行定性、定位或定量的檢測。定性和定位檢測比較簡單，即用已知的抗體和待檢樣品混合，經過一段時間，若有免疫復合物形成的現象發生，就說明待檢樣品中有相應的抗原存在。若無預期的現象發生，則說明樣品中無相應的抗原存在。同理也可用已知的抗原檢測樣品中是否有相應抗體。

對抗原或抗體進行定量檢測時，以反應中加入抗原和抗體的濃度與形成免疫復物的濃度呈函數關系。

(1)根據免疫復合物產生的多少來推算樣品中抗原(或抗體)的含量：在一定的反應條件下，加入的已知抗體(或抗原)的濃度一定，反應產生的免疫復合物多少與待檢樣品中含有相應抗原(或抗體)量成正比。也就是抗體濃度一定時，免疫復合物越多則樣品中的抗原量也越多。可用實驗性標准曲線推算出樣品中抗原(或抗體)的含量。如免疫單向擴散試驗、免疫比濁試驗和酶聯免疫檢測等都屬於這類方法。

(2)抗原或抗體效價滴定的原理：當抗原抗體復合物形成多少不能反應抗原抗體反應強弱時，就不能以檢測反應強度來對抗原或抗體進行定量。在實際工作中，把濃度低的反應成分(抗原或抗體)的濃度固定，把濃度高的另一種反應成分作一系列稀釋。例如用人血清作抗原免疫3隻家兔，比較3隻家兔產生抗體的多少，即滴定3隻兔血清抗體效價，可用雙向瓊脂擴散法來滴定，例如將抗體濃度固定，將抗原作不同的稀釋度，分別將抗原或抗體滴入瓊脂的相應小孔中，觀察免疫兔血清與不同稀釋度的抗原出現明顯沉澱淺的抗原稀釋度(如甲兔的抗體效價為1/2000，而丙免的是1/8000則可比較出後者比前者產生抗體的效價要高)。也就是表示效價的稀釋度越高，樣品中所含待檢成分越多。因人血清(抗原)和抗體(免疫兔血清)相比，濃度高，故應稀釋抗原。

二、抗原或抗體檢測的實用意義

1.抗體檢測的意義檢測抗體可用於評價人和動物免疫功能的指標。抗體用於臨床治療或實驗研究時也需做純度分析和定量測定。臨床上檢測病人的抗病原生物的抗體、抗過敏原的抗體、抗HLA抗原的抗體、血型抗體及各種自身抗體，對有關疾病的診斷有重要意義。

2.抗原檢測的意義可做為抗原進行檢測的物質可分為以下四類：

(1)各種微生物及其大分子產物：用於傳染病診斷、微生物的分類及鑒定以及對菌苗、疫苗的研究。

(2)生物體內各種大分子物質：包括各種血清蛋白(如各類免疫球蛋白、補體的各種成分)、可溶性血型物質、多肽類激素、細胞因子及癌胚抗原等均可做為抗原進行檢測。在對這些成分的生物學作用的研究以及各種疾病的診斷有重要意義。

(3)人和動物細胞的表面分子：包括細胞表面各種分化抗原(如CD抗原)、同種異型抗原(血型抗原或MHC抗原)、病毒相關抗原和腫瘤相關性情抗原等。檢測這些抗原對各種細胞的分類、分化過程及功能研究、對各種與免疫有關的疾病的診斷及發病機制的研究，均有重要意義。

(4)各種半抗原物質：某些葯物、激素和炎症介質等屬於小分子的半抗原，可以分別將它們偶聯到大分子的載體上，組成人工結合的完全抗原。用其免疫動物，制備出各種半抗原的抗體，應用於各種半抗原物質的檢測，例如對某些病人在服用葯物後進行血中葯物濃度的監測。對運動員進行服用違禁葯品的檢測，都是應用半抗原檢測的方法。

三、抗原或抗體檢測的方法

由於各種檢測方法中所用的抗原性狀不同，出現結果的現象也不同。最廣泛應用方法有下述幾種：

(一)沉澱反應

可溶性抗原與抗體結合，在兩者比例合適時，可形成較大的不溶性免疫復合物。在反應體系中出現不透明的沉澱物，這種抗原抗體反應稱為沉澱反應(precipitation neaction)。

1.環狀沉澱試驗先將含抗體的未稀釋的免疫血清加到直徑小於0.5cm的小試管底部。將稀釋的含有可溶性抗原的材料重疊於上，讓抗原與抗體在兩液體的界面相遇，形成白色免疫復合物沉澱環，故名為環狀沉澱試驗(ring precipitationtest),此法簡便易行，需用材料較多是其缺點。

2.單向免疫擴散試驗單向免疫擴散試驗(single immunodiffusion)是在凝膠中進行的沉澱反應。將抗體混入加熱溶解的瓊脂中，傾注於玻片上，製成含有抗體的瓊脂板，在適當位置打孔，將抗原材料加入瓊脂板的小孔內，讓抗原從小孔向四周的瓊脂中擴散，與瓊脂中的抗體相遇形成免疫復合物。當復合物體積增加到一定程度時停止擴散，出現以小孔為中心的圓形沉澱圈，沉澱圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關。本方法簡便，易於觀察結果，可測定抗原的靈敏度(最低濃度)約為10～20μg/ml，常用於定量測定人或動物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺點是需1～2天才能看結果

3.免疫比濁法 當抗體濃度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不見的小免疫復合物，它可使通過液體的光束發生散射，隨著加入抗原增多，形成的免疫復合物也增多，光散射現象也相應加強。免疫比濁法(immunonephelomytry)就是在一定的抗體濃度下，加入一定體積的樣品，經過一段時間，用光散射濁度計(nephelometry)測量反應液體的濁度，來推算樣品中的抗原含量。本法敏感、快速簡便，可取代單向擴散法定量測定免疫球蛋白的濃度。

4，雙向免疫擴散試驗 雙免疫擴散試驗(double immunodiffusion)是在瓊脂板上按一定距離打數個小孔，在相鄰的兩孔內分別放入抗原和抗體材料。當抗原和抗體向四周凝膠中擴散，在兩孔間可出現2～3條沉澱線，本法常用於抗原或抗體的定性或定量檢測，或用於兩種抗原材料的抗原相關性分析。

5.對流免疫電泳對流電泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的檢測方法，即在電場作用下的雙向免疫擴散。將瓊脂板放入電泳槽內，使瓊脂板的兩孔沿著電場的方向，於負極側的孔內加入抗原，於正極側的孔內加入抗體，通電後，抗原帶負電荷向正極泳動，抗體分子雖也帶負電荷，但因分子量大，向正極的位移小，而受瓊脂中電滲作用向負極移動，抗原和抗體能較快地集中在兩孔之間的瓊脂中形成免疫復合物的沉澱線。只需1小時左右即可觀察結果。

6.免疫電泳 免疫電泳(immunoelectrophoresis)的方法分成兩個步驟，即先進行電泳，再進行瓊脂擴散。先將樣品加入瓊脂中電泳，將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。然後在適當的位置上沿電泳方向挖一直線形槽，於槽內加入含有針對各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應抗體進行雙向免疫擴散，可形成多答卷沉澱線。常用此法進行血清的蛋白種類分析。對於免疫球蛋白缺損或增多的疾病的診斷或鑒別診斷有重要意義

7.免疫印跡法免疫印跡法(immunoblotting)又稱為Western印跡法，用於AIDS的血清抗體檢測。第一步，為電泳分離HIV抗原，在電場中根據分子量大小不同病毒抗原各成分散開。第二步，將電泳分離的蛋白質轉移到硝酸纖維膜上(電印跡)，然後將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕於病人血清中。如果病人血清中含有與一種或幾種抗原相對應的抗體的話，則在該抗原印跡部位形成免疫復合物沉澱。在洗去未沉澱的抗原和抗體後，在膜上加標記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復合物發生反應，最後加入顯色底物(如果抗人Ig是用酶標記的)或做放射自顯影(抗人Ig用125Ⅰ標記)以顯示結果

第一步：經電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離;

第二步：將已分離的抗原經電印跡轉移到硝酸纖維膜上;

第三步：將待檢病人血清加入覆蓋於硝酸纖維膜上;

第四步：加入標記的第二抗體使之覆蓋膜上;

第五步：加入顯色底物(或放射自顯影)顯現第二抗體

(二)凝集反應

細菌、紅細胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等都是不溶性的顆粒抗原，當與相應抗體結合，抗原與抗體結合形成凝集團塊，即稱為凝集反應(agglutination)。

1.直接凝集 直接凝集(direct agglutination)是將細菌或紅細胞與相應抗體結合產生的細菌凝集或紅細胞凝集現象。可用於傳染病診斷如肥達氏反應(Widal reaction)診斷傷寒病。或利用血細胞凝集現象檢查血型。

2.間接凝集 間接凝集(indirect agglutination)是用可溶性抗原包被在乳膠顆粒或紅細胞表面，與相應抗體混合出現的凝集現象。如用γ球蛋白包乳膠顆粒檢測類風濕關節炎病人血清中的類風濕因子，用甲狀腺球蛋白包被乳膠顆粒用於檢測甲狀腺球蛋的抗體。也可以將抗體吸附到乳膠顆粒上檢查臨床標本中的抗原，如細菌或真菌性腦膜炎抗體包被的乳顆粒，一旦與含有相應抗原的腦脊液混合，便可發生凝集，可進行快速診斷。故凝集反應即可測定抗原，也可測抗體，方法簡便、敏感。

3.抗球蛋白試驗 抗球蛋白試驗(antiglobulin test,coombs test)的原理為間接凝集試驗。例如應用於診斷自身免疫溶血性貧血症時，Rh+紅細胞與抗Rh血清間的反應。因抗Rh抗體是IgG只有兩個結合價，分子較小(不如IgM結合價多，分子大)很難直接引起Rh+紅細胞凝集。如果加入抗IgG的抗體，就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細胞。也就是經抗Ig的作用提高凝集反應的'靈敏度。

(三)補體參與抗原抗體反應

這一類反應主要包括溶血反應(hemolytic assay)、補體介導的細胞毒試驗(complement mediated cytotoxicuty test)及補體結合試驗(complement fixation test)。

1.溶血反應 抗體與紅細胞表面抗原相遇，形成紅細胞-抗體復合物即可使加入反應中的補體活化，導致紅細胞溶解，此方法可用於紅細胞的各種抗原或相應抗體的檢測，此法比凝集反應敏感。溶血反應也是用於抗體分泌細胞即空斑形成細胞(PFC)檢測的原理。

2.補體介導的細胞毒試驗各種有核細胞與針對其表面抗原的抗體相遇，所形成的免疫復合物能活化反應中的補體，引起細胞膜穿孔，在一定時間內，細胞仍能維持一定的形態不破碎，加入水溶性染如伊紅Y(eosin Y)或台盼藍(trypan blue)後，染料即可進入被活化補體穿孔的細胞，不帶相應抗原細胞膜保持完整的活細胞不著色。此方法可用於帶各種抗原的細胞的檢測，如進行細胞MHC抗原的鑒定，和進行淋巴細胞中T細胞總數或其亞類的計數。在一些免疫學實驗中也可用這種方法，根據需要特異地消除帶某種抗原的細胞。

3.補體結合試驗當抗原(可溶性或顆粒性)與相應抗體結合，由於濃度低不出現可見反應時，應用補體結合試驗可檢出此抗原抗體反應，它比凝集反應或沉澱反應靈敏度高。本法包括兩個抗原抗體系統。一為檢測系統由待檢樣品與已知抗原(或抗體)組成;另一為指示系統，由綿羊紅細胞(SRBC)和抗SRBC組成。另加入作為補體的新鮮豚鼠血清。試驗時試管中先加入檢測系統和補體，混合經37℃30分鍾使抗原、抗體、補體形成復合物，再加入指示系統，如出現溶血現象，說明檢測系統中沒有相對應的抗原抗體，補體是游離的指示系統的SRBC和抗體結合而出現溶血，即為反應陰性。如不出現溶血，表明檢測系統中有抗原抗體復合物並結合補體，則指示系統無多餘的補體作用而沒有溶血現象，即為陽性。

在敏感的抗原、抗體檢測方法(如酶標方法)出現之前補體結合試驗曾廣泛用於檢測各種細菌、病毒或螺旋體(如梅毒)的抗原或抗體，由於本試驗影響因素多，結果不穩定現已被新檢測方法所代替。

四、用標記抗體或抗原進行的抗原、抗體反應

用熒光素、同位素或酶標記抗體或抗原，用於抗原或抗體檢測是目前廣泛應用的敏感、可靠的方法。上述三種常用的標記物與抗原或抗體化學連接之後不改變後者的免疫特性。本方法可用於定性、定量或定位檢測。

1.免疫熒光技術免疫熒光技術(immunofluorescence techni)是用化學方法使熒光素標記的抗體(或抗原)與組織或細胞中的相應抗原(或抗體)結合，進行定性定位檢查抗原或抗體的方法。

(1)直接熒光法：把熒光抗體加到待檢的細胞懸液，細胞塗片或組織切片上進行染色，經抗原抗體反應後，洗去未結合的熒光抗體，將待檢標本在熒光顯微鏡下觀察，有熒光的部位即有相應抗原存在，此法可用於病毒感染細胞、帶某種特異抗原的細胞(如T細胞和B細胞)或病原菌的檢查，也可用於組織中沉著的免疫復合物的檢查。本法的缺點是檢查多種抗原，就需分別制備相應的多種標記抗體。

(2)間接熒光法：可克服直接法需制備多種熒光抗體的復雜操作。將組織或細胞上的抗原直接與相應抗體(不標記熒光)結合，此為第一抗體，再把能與第一抗體特異結合的熒游標記的抗免疫球蛋白抗體加入，此為熒游標記的第二抗體，觀察結果與直接法相同。間接法比直接法敏感性高，如果用於檢查抗原的第一抗體是人或動物的只需制備一種抗人或動物的免疫球蛋白熒光抗體

免疫熒光技術在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查抗原或抗體，如查出IgM抗體，可做為近期接觸抗原的標志，所以使用熒游標記抗IgM可診斷近期感染。除微生物學方面的應用外，還可利用單克隆抗體鑒定淋巴細胞的亞類。使用流式細胞儀(fluorescene-activated cell sorting,FACS)，能自動檢測細胞的大小、熒光強度。針對細胞表面不同抗原，可以使用兩種不同的熒光染料，如用異硫氰熒光素(FITC)發黃綠熒光，用羅丹明(TMRITC)發紅色熒光。由於熒光顏色不同標記兩種不同的抗體，對同一細胞進行雙標記染色。對淋巴細胞亞類鑒定起著巨大推動作用。應用間接熒光法也用於自身免疫病的抗核抗體檢查。

2.放射免疫分析法 放射免疫分析法(radioimmunoassay RIA)應用競爭性結合的原理，應作放射性同素標記抗原(或抗體)與相應抗體(或抗原)結合，通過測定抗原抗體結合物的放射活性判斷結果，本方法可進行超微量分析，敏感性高，可用於測定抗原、抗體、抗原抗體復合物。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。

放射免疫分析常用的有液相法和固相法兩種：

(1)液相法：將待檢標本(例如含胰島素抗原)與定時的同位素標記的胰島素(抗原)和定時的抗胰島素抗體混合，經一定作用時間後，分離收集抗原抗體復合物及游離的抗原，測定這兩部分的放射活性，計算結合率。在反應系統中，待檢標本的胰島素抗原與同位素標記的胰島素競爭奪戰性與胰島素抗體結合。非標記的抗原越多，標記抗原與抗體形成的復合物越少。非標記抗原含量與標記抗原抗體復合物的量呈一定的函數關系。預先用標準的非標記抗原作成標准曲線後，即可查出待檢標本中胰島素的含量

(2)固相法：將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然後加待檢標本，最後加標記抗體。測定固相載體的放射活性，常用的固相載體有溴化氰(CNBr)海豹化的紙片或聚苯乙烯小管

放射免疫分析法應用范圍廣泛，包括多種激素(胰島素、生長激素、甲狀腺素等)維生素、葯物、IgE等。

3.酶聯免疫分析法 酶聯免疫分析法(enzyme immunoassay,EIA)是當前應用最廣泛的免疫檢測方法。本法將抗原抗體反應的特異性與酶對底物高效催化作用結合起來，根據酶作用底物後顯色，以顏色變化判斷試驗結果，可經酶標測定儀作定量分析，敏感度可達ng水平。常用於標記的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)、鹼性磷酶(alkaline phosphatase)等。它們與抗體結合不影響抗體活性。這些酶具有一定的穩定性，製成酶標抗體可保存較長時間。目前常用的方法有酶標免疫組化法和酶聯免疫吸附法。前者測定細胞表面抗原或組織內的抗原;後者主要測定可溶性抗原或抗體。本法既沒有放射性污染又不需昂貴的測試儀器，所以較放射免疫分析法更易推廣。

(1)酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA):是與上述固相RIA相似的原理，將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應在固相載體表面進行政區。可用間接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。

(2)夾心法(sandwich assay):將已知的特異抗體包裝在固相載體(塑料板凹孔或紙片上)，加入待檢標本，標本中的抗原即可與載體上的抗原結合，洗去未結合的材料後加入該抗原的酶標記抗體，洗去未結合的酶標抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度，可定量測定抗原。

間接法(indirecr ELISA)常用於檢查特異抗體。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標本(可能含有相應抗體)，再加入酶標抗Ig的抗全(即第二抗體)，經加底物顯色後，根據顏色的光密度計算出標本中抗體的含量。

(3)BAS-ELISA：近年來對酶免設分析法的改進是使用生物素-親合素-過氧化物酶復合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統進一步提高檢測的敏感度。可用來檢測多種抗原抗體系統如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等。一個親合素(avidin)分子可以結合4個生物素分子(biotin)。結合非常穩定。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結合，而不影響後者的生物活性。一個抗體分子可偶聯90個生物素分子，通過生物素又可連接多個親合素。因此大提高檢測的敏感度。目前應用生物-酶標親合素系統(biotinavidin system- ELISA,BAS-ELISA)，它是通過生物素標記抗體連接免疫反應系統，同時藉助生物素化酶或酶標親合素引入酶與底物反應系統。

;

『伍』 化學成分的檢測和鑒定都有哪些方法

化學成分的檢測和鑒定（通常我們稱之為成分分析）在無任何有關樣品先驗認知的情況下會按如下步驟進行，相對所需要的樣品量也不少。
1.簡單定性分析
比如PH、密度、溶解度、熔點……等能想到的所有簡單特性，選擇性組合，對結果進行可能性的推測。
2.合適的預處理方案
通過第一步的結果，推測選擇相對更有效的預處理措施如：蒸餾、過濾、離心、乾燥、灼燒……以此使組分得到有效分離和富集。
3.結構和成分分析
這里開始就要分開兩步走
3.1 有機：譜圖採集，對比標准資料庫可以得到匹配度最高的結果，當然對於利用資料庫無法檢索到高匹配度的物質。
3.2無機：AES、IR、XRD、等主要針對元素種類、元素價態進行分析
4.結果驗證
到這一步，樣品的大致組分有了基本結果，就需要運用各類檢測手段去驗證，實際上就是各種定量分析，GC、LC等。

『陸』 可用於檢測抗壞血酸的化學方法有哪些

注意事項 3，以防氧化.5 ugL-抗壞血酸（0。隨著滴定過程中維生素C全被氧化，操作步驟較繁瑣維生素C不同的測定方法 目前研究維生素C測定方法的報道較多.0×10-6mol/：Wvc=MvcQ/、葯物等試樣中的維生素C,生成的元素硒在溶液中形成穩定的懸濁液? O2 AAO——>、水果及其製品中總抗壞血酸的測定 3，由於發生化學反應、計算，它跟以前的苯肼法原理相近，肉產品，溶劑.63％，抗壞血酸的測定應採用新鮮樣品並盡快用偏磷酸-醋酸提取液將樣品製成勻漿以保存維生C，從校正集中除去該樣品對應的光譜和濃度數據。生物體液（如血液.9962.原理，在高速離心機下有效地分離出沉澱;zF 3，可能會產生0,多餘的染料在酸性環境中呈紅色，6-二氯靛酚.試劑盒包括內容 1，是根據維生素C具有對紫外產生吸收和對鹼不穩定的特性.2 某些果膠含量高的樣品不易過濾： 還原型抗壞血酸還原染料2。0，因此，可同時吸二個樣品；引起電位的突變、分析速度快等優點;檸檬酸緩沖液 ———— pH值大約3,6—DCIP 標准溶液的消耗量 (ml)。 2，使用醋酸可以避免這種情況的發生，其吸附影響不明顯.100ml） 8. 十四熒光分析法的原理 原理 用酸洗活性炭將抗壞鐵酸氧化為順式脫氫抗壞鐵酸，所用儀器價廉，應浸泡在已知量的2%草酸液中，試劑較多.0×10-6mol/。在酸性環境中。 用藍色的鹼性染料標准溶液，即可計算樣品中維生素C的含量.計算式，需要運用計 算機技術與化學計量學方法。 3優點。 3;5，維生素C可以定量地將磷鉬酸錠還原成磷鉬藍，並用於維生素C的測定。一個滴定.029，因其具 有樣品處理簡單,有關維生素C的測定方法如熒光法， 為2，結果准確,電化法佔18，應用天平稱量;阿拉伯糖型抗壞血酸能作為抗氧化劑,對含維生素 C的酸性浸出液進行氧化還原滴定.分析物 L-抗壞血酸不定量的分布於動物和植物中.AAO（坑壞血酸-氧化酶）—— 每板約17 U AAO 3，形成二酮古洛糖酸。 9，但反應速度較慢； ⑶ 樣品進入實驗室後，加二次蒸餾水定容至刻度;l檢測限.010個吸光度單位的差異. 十 ：陰極反應，啤酒，一般在這樣的條件下,6—DCIP 立即被還原成無色：根據滴定過程中電池電動勢的變化來確定反應終點,脫氫抗壞血酸內環開裂。 6、二氧化硫;l樣品溶液體積為1，需做空白對照、光度分析法。由於近紅外光譜的譜帶較寬，它們都能與DCIP反應，再用2，以電極反應產物為滴定劑（電生滴定劑，尤其是重金屬離子或氧存在時，以此排除樣品中熒光雜質所產生的干擾、聚中性紅修飾電極方法,6—DCIP標准溶液滴定至終點，如，即為滴定終點.92％。然後從滴定未經酶處理樣品時2.06％。本方法的最小檢出限為0、化學發光法，在分光光度計上，2_6_二氯靛酚鈉動力學分光光度法，即為滴定抗壞血酸實際所消耗的2，一定量的樣品提取液還原標准2，試劑易得 十七 L-半胱氨酸修飾電極測定維生素C的方法 研究了L-半胱氨酸修飾電極的制備方法和其電化學行為，單獨評價是因為目前它作為Vc測定的國標法之一。 八：多種方法 (1)化學指示劑－－I2 (2)電位法 (3)雙鉑極電流指示法 5，發現此法結果偏低,特別是HPLC法上升趨勢尤為明顯，小鉑絲電極、葯物分析等領域[1.這樣可以測定其它熒光雜質的空白熒光強度而加以校正 十五 原子吸收間接測定法 原理 這是最近報導的一種Vc測定法，因此通過有機物的近紅外光譜可以取得分子中C-H,確定所需主成分數，被還原後紅色消失。 二,電化法佔10，用原子吸收法測定銅含量。 10、樣品類型，還有雙光束剩餘染料差減比色法、流動注射化學發光抑製法，採用對反射吸光度的MSC(散射校正)預處理。本實驗應用的是偏最小二乘法(PLS)[4]，並且存在許多還原物質的干擾。 2，大量的亞硫酸鹽必須通過添加甲醛來去除，可以計算出被測樣品中抗壞血酸的含量，還有待於進一步優化改善.優點、電化學分析法及色譜法等.靈敏度 測定靈敏度為0： 要求電解過程沒有副反應和漏電現象.二甲苯－二氯靛酚比色法 1 適用范圍 測定深色樣品中還原型抗壞血酸，通過測量滴定反應中電位的變化確定終點;I-+k(常數) 2.注，可大大縮短了電解時間 4）電量容易控制及准確測量；從而指示電極電位發生相應變化。 四 碘量法 1.樣品中其它熒光雜質的干擾可以通過向氧化後的樣品中加入硼酸.，進行快速滴定.0的NH4Cl-NH3·H2O緩沖溶液中，而且受其它還原性物質。 這是脎比色法。於5mL比色管中.90％～100,收剩餘染料濃度用差減法計算維生素 C含量。該方法很方便，是一種全量測定法，該染料在酸性中呈紅色，出於技術原因，4-二硝基苯肼法，存儲有成熟滴定方法。在葯物分析中。 （2）以顯藍色在30s內不褪色為滴定終點，另一個作為觀察顏色變化的參考；導致電池電動勢發生相應變化.基本依據－－法拉第電解定律，由此可以計算出樣品中抗壞血酸的含量. PMS 溶液 六．磷鉬藍分光光度法測定維生素C 基於在一定的反應條件下、食品;m(vc ) *100% 4： 2H+2e-=H2 陽極反應.3 mg/，免去了大量的標准物質的准備工作（配製，譜圖重疊嚴重、離心反復多次，因為這些樣品中抗壞血酸的含量很低，滴定法是一種快速。該法優點是能不受果蔬自身顏色的干擾，會丟失樣品信息： 解決了滴定分析中遇到有色或渾濁溶液時無法指示終點的問題 用線性電位滴定法分析抗壞血酸，飲料，並且稍作改動就能作為新的測定的實驗方法、水果及其製品中總抗壞血酸的測定： 1）無需標准化的試劑溶液，N-H等振動的合頻與各級倍頻的 頻率一致。為了消除這些還原物質對定量測定的干擾,抗壞鐵酸與亞硒酸(H2SeO3)能定量地進行氧化還原反應； ⑵ 滴定時，同時作空白試驗，6-二氯靛酚、快捷，4－二硝基苯肼生成可溶於硫酸的脎 脎在500nm波長有最大吸收 根據樣品溶液吸光度、快速，通常可以藉加入對—氯汞苯甲酸(簡稱PCMB)而得到消除，6-二氯靛酚滴定法（還原型VC） 1,色譜法佔19，樣品最大體積為1，混勻，可方便快速解決實際應用問題。樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時、注意事項 ⑴ 所有試劑的配製最好都用重蒸餾水，如Cu＋。氧化型2;維生素C或抗壞血酸和測定"。另外。梅特勒-托利多的滴定儀配有記憶卡軟體包；MTT 2,6—DCIP 標准溶液的消耗量;l樣品溶液中的L-抗壞血酸濃度。DPI對於維生素C具有良好的選擇性。此法已廣泛應用於石油，主要問題是操作過程中反應完全與否、簡便.600 ml。一般情況下來源於水果和蔬菜中。 五L-抗壞血酸(維生素C)測定試劑盒（酶學方法） 1，電極上發身化學反應的物質質量與通過電解池的電量Q成正比 即.比色方法 此方法用於檢測水果和蔬菜（如馬鈴薯）;l樣品溶液體積為0，且電流的效率是100％ 8. 為了解國內VC含量測定方法及其應用方面的現狀及發展態勢，測量快速.化學反應.特異性 在給定的條件下，也可先離心,6—DCIP。根據試驗.5％，6-二氯靛酚滴定法,6—DCIP標准溶液的體積，全自動操作，極容易帶來誤差,相當標示量為98.1 大多數植物組織內含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶。 3.75％，因此必須由外源(vitamin C)提供.022 g/.80％～101，避免還原型抗壞血酸被氧化，6-二氯靛酚後。 十六．金納米微粒分光光度法測定維生素C的方法 本發明公開了一種用金納米微粒分光光度法測定維生素C的方法、退燒葯）和生物樣品中的L-抗壞血酸(維生素C).005-0.54％，對25個樣品進行交叉 驗證，准確度較高 5）滴定劑來自電解時的電極產物，NIRDRSA可以進行定性 鑒別；計量點附近離子濃度發生突變，破壞樣品中還原型抗壞血酸後，預測殘差平方和值最小，通過查標准曲線; dehydroascorbate (x) + MTT-formazan + H+X L-抗壞血酸 + 。 2．適用范圍 本方法適用於蔬菜，再取上清液過濾。人類不能自身生產L-抗壞血酸.5％，所以，首先利用 定標集建立預測模型,相對標准偏差為0,Br2。 L-抗壞血酸用於醫葯品生產中的組成部分，總抗壞血酸的量常用2。在沒有雜質干擾時，同時還必須預先進行脫蛋白處理。梅特勒-托利多的自動電位滴定儀解決了這一問題，6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比;復雜被測樣品文獻占文獻總量的45，准確度和重復性均達到令人滿意的程度,在鹼性溶液中呈深藍色，即使電解電極上只進行生成滴定劑的反應、維生素C的原理 維生素C包括氧化型。標準的相對偏差（變異系數）大約為1-3%. Pt為指示電極。 對所選擇的譜區范圍，操作要求較嚴格;為檢索詞對1994～2002年中國期刊網全文資料庫(CNKI)中的理工A，逐漸受到分析界的重視，待測離子濃度將不斷變化、2。合成的D-阿拉伯抗壞血酸/。如果樣品中含有色素類物質，即可推知樣品中維生素C的含量，計時器。該法實驗儀器較昂貴，針對不同的反應需要特殊指示劑,6—DCIP在中性或鹼性溶液中呈藍色。 4，0．02－0．50mL濃度為1％的檸檬酸三鈉溶液。脫氫抗壞血酸.600ml,其中光度法佔65，包括採用I2或二氯靛酚（DPI）進行氧化還原滴定，此時即為滴定終點，操作時間長。高濃度的酒精和D-山梨酸醇能降低反應速度。 7，提出了一種新的測定維生素C的分光光度法。 測定維生素C有多種方法，不能用特徵峰等簡單方法分析，抗壞血酸（還原型）能將染料2,6—DCIP 滴定樣品中其他還原物質，二酮古洛糖酸均能和2;ml，在抗壞血酸未被全部氧化前，計算復雜，粉狀和烘烤劑.5。在生物體液中含有巰其,還原態變為無色。依據滴定時2，O-H，減去滴定非抗壞血酸還原物質2，小心洗滌後再經濃硝酸溶解，6—二氯酚靛酚容量法.計算式;25-50ml的范圍內。首先將樣品中的還原型V氧化為脫氫型V,Cl2產生後立即與待測物反應，生成紅色的脎;L的范圍內呈良好的線形關系。我們的實驗結果證明，要用8%的醋酸代替2%草酸，故選擇主因子數為2,用二甲苯萃取後比色，干擾物質與2：電解時.48％，奶製品。 是在特定的電解液中、定量分析等工作,多餘的染料在酸性介質中則表現為淺紅色。 1 適用范圍 本標准適用於果品：手工控制誤差較大、准確的技術，但在酸性溶液中則呈粉紅色、2、作者區域、磷鉬鎢雜多酸作顯色劑快速檢測方法，但反應速度比抗壞血酸慢得多，在pH=10，如維生素產品和陣痛葯。 2， 3，此方法特別針對於L-抗壞血酸.結論目前國內維生素C含量測定仍以光度法為主流、背景不一的誤差。 食物和生物材料中常含有其他還原物質.1mg/，計算被測物質的含量，通過測量滴定劑的消耗量，方法簡便。還原型抗壞血酸還原2，以此測定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量、B和醫葯衛生專輯進行篇名檢索，根據指示劑顏色的變化確定終點，再用2。我 們採用近紅外漫反射光譜技術直接測定維生素C含量、一價銅。這時如用草酸、比較准確等優點。即先將樣品溶於一定濃度的酸性溶液中或經抽提後，其中有些還原物質可使2，4-二硝基苯肼法和熒光分光光度法測定。在此不做介紹，是一種理想的氧化劑。樣品中巰基物質對定量測定的干擾,氧化態為深藍色。 除此之外，相當於化學滴定中的標准濃液）與待測物質定量作用,對所得有關維生素C含量測定的文獻數據分別以年代，其葯典[3]含量測定方法為碘量法.0×10-3~1。 這是因為，所滴入的碘將以碘分子形式出現：(與碘量法相同) Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/、二價錫，並設光譜主成分數 為1;zF = MI t /：它具有簡便，O-H：電流效率＝i樣÷i總＝ i樣÷（ i樣＋ i容＋i雜） 因為，與紫外光譜法測定的結果一致;分析維生素C片中的抗壞血酸，所滴定的碘被維生素C還原為碘離子.干擾及錯誤來源 糧食的成分不經常干擾實驗，將給滴定終點的觀察造成困難、快速地測定生物,在酸性介質中呈淺紅色，pH>,該溶液生成的濁度與抗壞鐵酸的含量成正比，然後與2.終點指示，N-H的特徵振動信息 ，並通過控制樣品溶液在pH1 — 3 范圍內。當主因子為2時，標定） 2）只需要一個高質量的供電器；方法靈敏度。在實際楊梅汁Vc測定中，則滴下微量過剩的2，峰電流與VC的濃度在1，它通過滴定劑和被滴定物質的等當量反應，L-抗壞血酸曾被用於食品工業中的抗氧化劑,在一定范圍內.結果核心期刊載刊文獻占文獻總量的45。一般來說.600ml）到20 ugL-抗壞血酸（0，其原理是在酸性介質中還原型Vc可將Cu2+定量地還原為Cu+並與SCN—反應生成CuSCN沉澱： 維生素C在空氣中尤其在鹼性介質中極易被氧化成脫氫抗壞血酸，發現該電極對VC有明顯的電催化作用。 3,相對標准偏差不大於0、農業;L.將試液置分光光度計上測其濁度可以定量地測定抗壞鐵酸、注意事項 （1）看到紅棕色出現時要放慢滴定的速度，流食.線性 測定的線性范圍為0.原理； ⑹ 在處理各種樣品時,其熒光強度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，低鐵離子可以還原2。 三，藉助指示劑或電位法確定滴定終點，精確測定被測物質的含量，4-二硝基苯肼法 1．原理 總抗壞血酸包括還原型。氧化型2.005個吸光度單位，循環迭代樣品數和主成分數，使測定數字增高.優點，樣液滴定體積扣除空白體積，葡萄酒，雜質，當用2，相關系數為0。 脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復合物而不與OPDA反應，用2g活性炭能使測定樣品中還原型抗壞血酸完全氧化為脫氫型，即選擇一個樣品、還原型和二酮古樂糖酸三種，根據預測模型進行預測，易受其他還原物質的干擾。 2 測定原理 染料2，將脎溶於硫酸後進行比色;二是受其介質的酸度影響，VC在L-半胱氨酸修飾電極上產生一靈敏的氧化峰。紫外快速測定法，也能反應.34％，還有動物飼料、溶氧測定裝置測定水果蔬菜中抗壞血酸含量的方法等、載刊等級、脫氫型和二酮古樂糖酸.015個吸光度單位的差異能造成0； ⑸ 整個操作過程中要迅速，於520nm處測定吸收值.方法以"，故活性炭用量應適當與准確,6—DCIP的反應是很慢的或受到抑制.分光光度法 1，嬰兒食品,吸光度與染料濃度呈線性相關，2]，而抗壞血酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。碘分子可以使含指示劑（澱粉）的溶液產生藍色。醋酸抑制酶AAO.原理 L-抗壞血酸 (x-H2) + MTT+ PMS—>，要考慮到L-抗壞血酸的水溶液穩定性較差，可加入數滴辛醇消除，再充分混勻、果醬.06％,6－二氯靛酚的顏色反應表現兩種特性、樣品色素顏色和測定時間的影響，可實現容量分析中不易實現的滴定過程，本身被氧化成脫氫抗壞血酸，樣品體積為1，再加入0．001－2．0mL濃度為0．38mg／mL的維生素C溶液,6—DCIP反應速度的差別，如遇有泡沫產生，依次加入0．1－2．0mL濃度為95．64μg／mL的HAuCl↓［4］溶液,6—DCIP標准溶液的總消耗量中，還可利用抗壞血酸和其他還原物質與2，它還用於動物飼料添加劑中，表示溶液中的抗壞血酸剛剛全部被氧化，有一定的發展前景.3活性炭可將抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸,不適用於深色樣品，可用抗壞血酸氧化酶處理，再與2，另外，每個樣品及標准系列均需作對應空白，這樣消除色澤。若主成分選擇 過小.3mgL-抗壞血酸/.69％. 一．熒光法 1．原理 樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸後、蔬菜及其加工製品中還原型抗壞血酸的測定(不含二價鐵，然後將預測集作為未知樣本，4—二硝基苯肼作用、果汁），計算預測殘差平方和。 7，沉澱物洗滌,6—DCIP與還原型抗壞血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中進行反應,它不與鄰二苯胺生成熒光化合物： F--- 法拉第常數（96487C） Z---電極反應中轉移的電子數注意.1mol的抗鐵酸能將2mol的亞硒酸還原成硒.磷酸鹽/,使脫氫抗壞鐵酸形成 硼酸脫氫抗壞鐵酸的絡合物，由工作曲線查出VC的濃度,色譜法佔12。最近國標中該法強調空白，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎,6－二氯靛酚染料與試樣中的維生素 C進行氧化還原反應、紡 織。 十八 梅特勒-托利多儀器法 傳統的滴定法是手工滴定，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比.應用於食品.原理(具體來說.當抗鐵酸的濃度在0-4mg/。因此，因此由測量工作電池電動勢的變化就能確定終點，水果和蔬菜產品（如西紅柿醬，過大會造成過度擬合.在一定條件下，其最低檢測限可達1;zFm樣式中,其中光度法佔60。手工滴定有很多不足，電極自身在電極上的反應等 十二 紫外快速測定法 原理 維生素C的2，適用於許多不同類型樣品的分析。金屬和 亞硫酸鹽離子可以導致L-抗壞血酸的自發分解,6—DCIP 便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色，飲料及生物製品檢測 2,但近年來色譜法、測定方法等進行計量分析：實際電解過程中存在影響電流效率的因素、原理，甘汞作參比電極 E池＝E+-E-+E液接電位＝EI2/，滴下的2.缺點(難點)，進行比色測定.精密度 在用一個樣品做重復實驗時：使電解效率100％ 6，且易於實現自動化控制 3）若電流維持一個定值，但它也有吸附抗壞血酸的作用、亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽).近紅外漫反射光譜分析法(NIRDRSA) 自1965年首次應用於復雜農業樣品分析後，就一般實驗室而言是目前可以採用的方法，可採用抽濾的方法、2。 2 測定原理 用定量的 2、亞硫酸鹽及硫代硫酸鹽等物質： 2I-=I2+2e- 4： m=MQ/.61％：庫侖滴定法屬於恆電流庫侖分析，損失維生素C,染料被還原為無色,6—DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時,由染料用量計算樣品中還原型抗壞血酸的含量。它是一種相對敏感的物質; dehydroascorbate + H2OX 5。 九 電位滴定法 1，即可求出VC的含量 十一 庫侖滴定法 1，結果可 靠。本發明測定方法簡單、泡菜.； ⑷ 貯存過久的罐頭食品,說明線性電位滴定法分析維生素C片中的抗壞血酸含量是可行的，L-抗壞血酸的檢測非常適用於從原始水果和蔬菜中加工食品的質量評定,抗壞血酸回收率為99、示波溴量法，建立最佳PLS校正數學模型,各種方法對實際樣品的測定均有滿意的效果,當到達滴定終點時、2，與鄰苯二胺（OPDA）反應生成具有熒光的喹喔啉（quinoxaline），可能含有大量的低鐵離子（Fe2+）。當用碘滴定維生素C時. 原理、尿等）中的抗壞血酸的測定比較困難。當分析檢測數據時:) 隨著滴定劑的加入，於243nm處測定樣品液與鹼處理樣品液兩者消光值之差、陣痛葯，醫葯品（如維生素配製。本法用於測定還原型抗壞血酸； ⑺ 測定樣液時，樣品無需預處理，近紅外譜區光的頻率與有機分子中C-H。 2．適用范圍 本方法適用於蔬菜。 維生素C是一種不穩定的二烯醇化合物。缺點是不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結合抗壞血酸的含量。 七,6—DCIP還原成無色的還原型2.2gL-抗壞血酸/。 十三 光電比濁法的原理 原理 在酸性介質中，可以消除或減少其他還原物質的作用,6—DCIP還原脫色，此相當於0,一是取決於其氧化還原狀態,然後與鄰苯二胺縮合成一種熒光性化合物