1. 飼料添加劑檢測有哪些項目
飼料和飼料添加劑質量標准、檢測方法、質量檢驗報告：
質量標准：生產企業執行標准，一般為生產國國家標准、行業標准或企業標准。
質量標准應包括外觀和感官、理化指標、衛生指標等內容。
產品的外觀和感官：對產品的色澤、氣味、外觀性狀等所做的規定
理化指標：等反應產品質量的主要營養指標和能反應產品的加工質量指標，要規定上限和下限
衛生標准：產品中對天然、次生、外源性污染有毒、有害物質及病原微生物的安全限量規定。產品的衛生標准包括重金屬和有害菌的控制指標。重金屬指標包括鉛、砷、汞、鎘、氟、亞鹽（以NaNo2計，僅限魚粉）；有害菌包括沙門氏菌、細菌總數、黴菌、B1等
檢測方法：要求提供主要營養指標和衛生指標的檢驗方法。檢驗方法為通用的標准時，申請人可提供標准編碼。如產品營養指標為粗蛋白質、粗脂肪、水分、粗纖維和粗灰分，已有國家標准或AOAC、ISO標準的檢驗方法可以只提供執行標準的標准編碼。否則提供檢驗過程中的具體操作步驟、溶液濃度、使用的儀器及計算方法等內容。
產品質量檢驗報告：
對於動物性蛋白飼料（如魚粉、肉骨粉、乳清粉等），檢驗報告要求由生產國的檢測機構出具，檢測結果真實並具有法律效力。
對於其它飼料和飼料添加劑，檢驗報告由生產廠家提供即可，有求報告中檢測的樣品與申請時提供的樣品為同一批次，要求檢驗報告中檢驗項目與產品的質量指標相一致。
健康證明：
對於魚粉，要求證明產品中不含有除魚粉以外的其他動物蛋白和脂肪
對於肉骨粉，要求證明產品為何種動物的肉骨粉（如牛肉骨粉、豬肉骨粉，雞肉骨粉），原料來自非疫區的健康動物。
對於乳清粉，要求證明鮮乳來源於健康動物，產品中不含有乳製品外的其他動物脂肪和動物蛋白。
油脂類的產品要求證明不含有二惡英
對於來源於疫區的懷疑有動物成分的產品要求提供健康證明
2. 求食品添加劑化學檢測方法過程
防腐劑是指能防止食品腐敗、變質，抑制食品中微生物繁殖，延長食品保存期的物質。目前，我國允許使用的品種主要有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對羥基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸鈉、丙酸鈣、脫氫乙酸等。1苯甲酸及苯甲酸鈉的測定 苯甲酸及苯甲酸鈉是目前我國使用的主要防腐劑之一。它屬於酸型防腐劑，在酸性條件下防腐效果較好，特別適用於偏酸性食品(pH4.5～5)。我國《食品添加劑使用衛生標准》(GB2760—1996)規定：苯甲酸及苯甲酸鈉在碳酸飲料中的最大使用量為0.2g/kg，低鹽醬菜、醬菜、蜜餞、食醋、果醬(不包括罐頭)、果汁飲料、塑料裝濃縮果蔬汁中最大使用量為2g/kg(以苯甲酸計)。1.1 酸鹼滴定法1.1.1原理 於試樣中加入飽和氯化鈉溶液，在鹼性條件下進行萃取，分離出蛋白質、脂肪等，然後酸化，用乙醚提取試樣中的苯甲酸，再將乙醚蒸去，溶於中性醚醇混合液中，最後以標准鹼液滴定。1.1.2儀器和試劑(1)儀器①鹼式滴定管。 ②300ml燒杯。③250ml容量瓶。④500ml分液漏斗。⑤水浴箱。⑥吹風機。⑦分析天平。⑧錐形瓶。(2)試劑 ①純乙醚：置乙醚於蒸餾瓶中，在水浴上蒸餾，收取35℃部分的餾液。②鹽酸(6mol/L)。 ③氫氧化鈉溶液(100g/L)：准確稱取氫氧化鈉100g於小燒杯中，先用少量蒸餾水溶解，再轉移至1000ml容量瓶中，定容至刻度。④氯化鈉飽和溶液。⑤純氯化鈉。⑥95％中性乙醇：於95％乙醇中加人數滴酚酞指示劑，以氫氧化鈉溶液中和至微紅色。⑦中性醇醚混合液：將乙醚與乙醇按1：1體積等量混合，以酚酞為指示劑，用氫氧化鈉中和至微紅色。⑧酚酞指示劑(1％乙醇溶液)：溶解1g酚酞於100ml中性乙醇中。⑨氫氧化鈉標准溶液(0.05 mol/L)：稱取純氫氧化鈉約3g，加入少量蒸餾水溶去表面部分，棄去這部分溶液，隨即將剩餘的氫氧化鈉(約2g)用經過煮沸後冷卻的蒸餾水溶解並稀釋至1000 ml，按下法標定其濃度。1.1.3操作步驟(1)樣品的處理 ①固體或半固體樣品：稱取經粉碎的樣品100g置250ml容量瓶中，加入300ml蒸餾水，加入分析純氯化鈉至不溶解為止(使其飽和)，然後用100g／L氫氧化鈉溶液使其成鹼性(石蕊試紙試驗)，搖勻，再加飽和氯化鈉溶液至刻度，放置2h(要不斷振搖)，過濾，棄去最初l0ml濾液，收集濾液供測定用。 ②含酒精的樣品：吸取250ml樣品，加入100g/L氫氧化鈉溶液使其成鹼性，置水浴上蒸發至約100ml時，移入250ml容量瓶中，加入氯化鈉30g，振搖使其溶解，再加氯化鈉飽和溶液至刻度，搖勻，放置2h(要不斷振搖)，過濾，取濾液供測定用。 ③含脂肪較多的樣品：經上述方法制備後，於濾液中加入氫氧化鈉溶液使成鹼性，加入20～50ml乙醚提取，振搖3min，靜置分層，溶液供測定用。(2)提取吸取以上制備的樣品濾液100ml，移入250 ml分液漏斗中，加6mol/L鹽酸至酸性(石蕊試紙試驗)。再加3ml鹽酸(6mol/L)，然後依次用40、30、30ml純乙醚，用旋轉方法小心提取。每次搖動不少於5min。待靜置分層後，將提取液移至另一個250ml分液漏斗中(3次提取的乙醚層均放大這一分液漏斗中)。用蒸餾水洗滌乙醚提取液，每次10ml，直至最後的洗液不呈酸性(石蕊試紙試驗)為止。 將此乙醚提取液置於錐形瓶中，於40～45℃水浴上回收乙醚。待乙醚只剩下少量時，停止回收，以風扇吹乾剩餘的乙醚。(3)滴定於提取液中加入30ml中性醇醚混合液，10ml蒸餾水，酚酞指示劑3滴，以0.05mol/L氫氧化鈉標准溶液滴至微紅色為止。 4)結果計算1.2高效液相色譜法本法可同時用於苯甲酸及山梨酸的測定。1.2.1原理 樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，調pH至近中性，過濾後進高效液相色譜儀，經反相色譜分離後，根據保留時間和峰面積進行定性和定量。1.2.2儀器和試劑(1)儀器 高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)。(2)試劑 ①甲醇：優級純，經濾膜(0.5μm)過濾。②稀氨水溶液(1+1)：氨水加水等體積混合。 ③乙酸銨溶液(0.02mol/L)：稱取1.54g乙酸銨，加水至1 000ml，溶解，經濾膜(0.45μm)過濾。④碳酸氫鈉溶液(20g/L)：稱取2g碳酸氫鈉(優級純)，加水至100ml，振搖溶解。⑤苯甲酸標准儲備溶液：准確稱取0.1000g苯甲酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5ml，加熱溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至100ml，搖勻。此溶液每毫升含苯甲酸1mg。⑥山梨酸標准儲備溶液：准確稱取0.1000g山梨酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5ml，加熱溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至100ml，搖勻。此溶液每毫升含山梨酸為1mg。⑦苯甲酸、山梨酸標准混合使用溶液：吸取苯甲酸、山梨酸標准儲備溶液各10.0ml，放人100ml容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/ml經濾膜(0.45μm)過濾。1.2.3操作步驟(1)樣品處理 ①汽水：稱取5.00～10.0g樣品，放入小燒杯中，微溫攪拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)調pH約7。加水定容至10～20ml，經濾膜(0.45μm)過濾。 ②果汁類：稱取5.00～10.0g樣品，用氨水(1+1)調pH約7，加水定容至適當體積，離心沉澱，上清液經濾膜(0.45μm)過濾。 ③配製酒類：稱取10.0g樣品，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水(1+1)調pH約7，加水定容至適當體積，經濾膜(0.45μm)過濾。(2)高效液相色譜分析參考條件 ①色譜柱：YWG—C18 4.6mm×150mm 5μm，或其他型號C18柱。 ②流動相：甲醇+乙酸銨溶液(0.02mol／L)(5+95)。 ③流速：1.0ml/min。 ④進樣量：10μL。 ⑤檢測器：紫外檢測器，波長230nm，靈敏度0.2AUFS。 根據保留時間定性，外標峰面積法定量。 1.2.4結果計算 式中： X—樣品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg； m1—進樣體積中苯甲酸或山梨酸的質量，mg； V2—進樣體積，ml； V1—樣品稀釋液總體積，ml； m—樣品質量，g。2山梨酸及山梨酸鉀的測定山梨酸與山梨酸鉀是目前國際上公認的安全防腐劑,已被很多國家和地區廣泛使用。我國《食品添加劑使用衛生標准》(GB2760—1996)規定：山梨酸及山梨酸鉀用於肉、魚、禽類製品時的最大使用限量為0.075g/kg；水果、蔬菜及碳酸飲料為0.2g/kg,膠原蛋白腸衣、低鹽醬菜類、蜜餞、果汁飲料、果凍等為0.5g/kg；果酒為0.6g/kg；塑料桶裝濃縮果蔬汁、軟糖、魚干製品、即食豆製品、糕點、麵包、乳酸菌飲料等為1.0g/kg。當山梨酸與山梨酸鉀同時使用時，以山梨酸計，不得超過最大使用量。2.1.硫代巴比妥酸比色法2.1.1原理利用自樣品中提取出來的山梨酸及其鹽類，在硫酸及重鉻酸鉀的氧化作用下產生丙二醛，丙二醛與硫代巴比妥酸作用產生紅色化合物，其紅色深淺與丙二醛濃度成正比，並於波長530nm處有最大吸收，符合比爾定律，故可用比色法測定。2.1.2儀器和試劑(1)儀器① 721型分光光度計。②組織搗碎機。③10ml比色管。(2)試劑①硫代巴比妥酸溶液：准確稱取0.5g硫代巴比妥酸於100ml容量瓶中，加20ml蒸餾水，然後再加入10ml氫氧化鈉溶液(1mol/L)，充分搖勻。使之完全溶解後再加入11ml鹽酸(1mol/L)，用水稀釋至刻度。此溶液要在使用時新配製，最好在配製後不超過6h內使用。 ②重鉻酸鉀-硫酸混合液：以0.1mol/L重鉻酸鉀和0.15mol/L硫酸以1：1的比例混合均勻配製備用。③山梨酸鉀標准溶液：准確稱取250mg山梨酸鉀於250ml容量瓶中，用蒸餾水溶解並稀釋至刻度，使之成為1mg/ml的山梨酸鉀標准溶液。④山梨酸鉀標准使用溶液：准確移取山梨酸鉀標准溶液25ml於250ml容量瓶中，稀釋至刻度，充分搖勻，使之成為0.1mg/ml的山梨酸鉀標准使用溶液。2.1.3操作步驟(1)樣品的處理 稱取100g樣品，加蒸餾水200ml，於組織搗碎機中搗成勻漿。稱取此勻漿100g，加蒸餾水200ml繼續搗碎1min，稱取10g於250ml容量並中定容搖勻，過濾備用。（2）山梨酸鉀標准曲線的繪制 分別吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml山梨酸鉀標准使用溶液於200ml容量瓶中，以蒸餾水定容(分別相當於0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/ml的山梨酸鉀)。再分別吸取2.0ml於相應的10ml比色管中，加2.0ml重鉻酸鉀-硫酸溶液，於100℃水浴中加熱7min，立即加人2.0ml硫代巴比妥酸溶液，繼續加熱l0min，立即取出迅速用冷水冷卻，在分光光度計上以530nm測定吸光度，並繪制標准曲線。(3)樣品的測定 吸取樣品處理液2ml於10ml比色管中，按標准曲線繪制的操作程序，自「加2.0ml重鉻酸鉀-硫酸溶液」開始依次操作，在分光光計530nm處測定吸光度，從標准曲線中查出相應濃度。 2.1.4結果計算式中： X1—樣品中山梨酸鉀的含量，g/kg； X2—樣品中山梨酸的含量，g/kg； c—試樣液中含山梨酸鉀的濃度，mg/ml； m—稱取勻漿相當於試樣的質量，g； 2—用於比色時試樣溶液的體積，ml； 250—樣品處理液總體積，ml 1.34—山梨酸鉀換算為山梨酸的系數。2.2.紫外分光光度法2.2.1原理樣品經氯仿(三氯甲烷)提取後，再加人碳酸氫鈉，使山梨酸形成山梨酸鈉而溶於水溶液中。純凈的山梨酸鈉水溶液在254nm處有最大吸收，經紫外分光光度計測定其吸光度後即可測得其含量。2.2.2儀器和試劑(1)儀器 ①紫外分光光度計。②組織搗碎機。(2)試劑 ①三氯甲烷：以三氯甲烷體積50％的碳酸氫鈉(0.5mol/L)提取2次，而後以無水硫酸鈉乾燥，過濾備用。②0.5mol/L碳酸氫鈉：稱取21g碳酸氫鈉於小燒杯中，加少量蒸餾水溶解，移至500ml容量瓶中加水定容至刻度。③0.3mol/L碳酸氫鈉。④山梨酸標准溶液：准確稱取250mg山梨酸，用0.3mol/L的碳酸氫鈉定容至250ml⑤山梨酸標准使用液：准確吸取山梨酸標准溶液25.00ml，用0.3mol/L的碳酸氫鈉定容至250ml，即為100μg/ml的標准使用液。2.2.3 操作步驟(1)樣品的處理：稱取50.0g樣品，加450ml蒸餾水於組織搗碎機中，粉碎5min，使成勻漿。稱取10.0g此勻漿於50ml容量瓶中，並以水定容。移取l0ml此溶液於250ml分液漏斗中，用100ml氯仿提取1min。靜置分層。將氯仿層分至125ml錐形瓶中，加人5g無水硫酸鈉，振盪後靜置。(2)標准曲線的繪制：分別吸取山梨酸標准使用液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml於100ml容量瓶中，用0.3mol/L碳酸氫鈉定容(分別相當於0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/ml的山梨酸)。於紫外分光光計中254nm處測定吸光度，以濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標繪制標准曲線。(3)樣品的測定：移取樣品氯仿提取液50ml於125ml分液漏斗中，用25ml碳酸氫鈉(0.3mol/L)提取1min。靜置分層後，小心棄去氯仿層。將碳酸氫鈉提取液於紫外分光光計中254nm處測定吸光度。從標准曲線上查出相應的山梨酸含量。2.2.4結果計算式中：X—山梨酸的含量。g/kg；m1—試液中山梨酸的含量，mg/ml； V1—試樣碳酸氫鈉提取液總量，ml； V2—吸取試樣氯仿提取液體積，ml； V3—試樣氯仿提取液總體積，ml； m—用於測定的試樣水提取液相當於樣品的質量，g。2.3.氣相色譜法2.3.1原理 樣品經酸化後，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用帶氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，然後與標准系列進行比較定量。2.3.2儀器和試劑(1)儀器 氣相色譜儀(具有氫火焰離子化檢測器)。(2)試劑 ①乙醚：不含過量氧化物。②石油醚：沸程30～60℃。③鹽酸。④無水硫酸鈉。⑤鹽酸(1：1)：取100ml鹽酸，加入稀釋至200ml。⑥氯化鈉的酸性溶液(40g/L)：於氯化鈉溶液(40g/L)中加少量鹽酸(1：1)，使之酸化。⑦山梨酸和苯甲酸標准儲備液：准確稱取山梨酸和苯甲酸各0.2000g，置於100ml容量瓶中，用石油醚-乙醚(3：1)混合溶劑溶解後，稀釋至刻度，1ml此溶液相當於200mg山梨酸或苯甲酸。⑧山梨酸和苯甲酸的標准使用液：吸取適量的山梨酸和苯甲酸的標准溶液，以石油醚-乙醚(3+1)混合溶劑稀釋至每毫升相當於50、100、150、200、250mg山梨酸或苯甲酸。2.3.3操作步驟 (1)樣品的處理 稱取2.50g事先混合均勻的樣品，置於25ml帶塞量筒中，加0.5ml鹽酸(1：1)酸化，依次用15ml和10ml乙醚提取，每次振搖1min後，將上層乙醚提取液吸人另一個25ml帶塞量筒中，合並乙醚提取液。用3ml氯化鈉的酸性溶液(40g/L)洗滌2次，靜置15min，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾人25ml容量瓶中，加乙醚至刻度，混勻。准確吸取5ml乙醚提取液於5ml帶塞刻度試管中，置於40℃水浴上揮干，加入2ml石油醚-乙醚(3：1)混合溶劑溶解殘渣，備用。 (2)色譜參考條件 ①色譜柱：玻璃柱，內徑為3mm，長為2m，內裝塗以5％(質量分數) DEGS+l％(質量分數)H3 PO4固體液的60～80目ChromosoybWAW。②載氣：載氣為氮氣，氣流速度為50ml/min(氮氣、空氣及氫氣按各儀器型號不同，選擇各自的最佳比例條件)。③溫度：進樣品溫度為230℃，檢測器溫度為230℃，柱溫為170℃。 (3)測定 ①進樣2μL標准系列中各濃度的標准使用液於氣相色譜儀中，測得不同濃度的山梨酸和苯甲酸的峰高。以濃度為橫坐標，以峰高值為縱坐標，繪制標准曲線。山梨酸和苯甲酸的標准色譜圖如圖8—1所示，山梨酸的保留時間為173s，苯甲酸的保留時間為368s。圖8—1山梨酸和苯甲酸標准色譜圖②進樣2μL樣品溶液，測得峰高，然後與標准曲線比較定量。2.3.4結果計算 式中：X—樣品中山梨酸或苯甲酸的含量，g/kg； m1—測定用樣品溶液中山梨酸或苯甲酸的質量，μg； V1—加入石油醚-乙醚(3+1)混合溶劑的體積，ml： V2—測定時進樣的體積，μL； m2—樣品的質量，g； 由測得苯甲酸的量乘以1.18，即為樣品中苯甲酸鈉的含量。3過氧乙酸的測定 過氧乙酸又叫過醋酸，是過氧化氫、醋酸與微量硫酸的混合水溶液。過氧乙酸對細菌繁殖體、芽孢、真菌、病毒都具有高度殺滅效果，是一種廣譜、高效、速效的殺菌劑。3.1原理 在酸性條件下，過氧乙酸中含有的過氧化氫(H2O2)用高錳酸鉀標准滴定溶液滴定，然後用間接碘量法測定過氧乙酸的含量。 3.2儀器和試劑 3.2.1儀器 ①250ml碘量瓶。 ②50ml棕色滴定管。 ③分析天平。3.2.2試劑 ①硫酸溶液(1+9)：量取1ml硫酸與9ml水混合。 ②碘化鉀溶液(100g/L)。 ③硫酸錳溶液(100g/L)。 ④鉬酸銨溶液(30g/L)。 ⑤高錳酸鉀標准溶液[c(1/5KMnO4)=0.1mol/L]。 ⑥硫代硫酸鈉標准滴定溶液[c(Na2S2O3)－0.1mol/L]。 ⑦澱粉指示液(10g/L)。3.3操作步驟 稱取約0.5g試樣(或稱取相當於含過氧乙酸約0.07g的試樣)，精確至0.000 1g，置於預先盛有50ml水，5ml硫酸溶液和3滴硫酸錳溶液並已冷卻至4℃的碘量瓶中，搖勻，用高錳酸鉀標准溶液滴定至溶液呈穩定的淺粉色。隨即加入10ml碘化鉀溶液和3滴鉬酸銨溶液，輕輕搖勻，於暗處放置5～10min，用硫代硫酸鈉標准滴定溶液滴定，接近終點時(溶液呈淡黃色)加入1ml澱粉指示液，繼續滴定至藍色消失，並保持30s不變為終點。記錄消耗硫代硫酸鈉標准滴定溶液的體積數。3.4結果計算 式中：X—過氧乙酸的質量分數，％； V—消耗的硫代硫酸鈉標准滴定溶液的體積，ml； c—硫代硫酸鈉標准滴定溶液濃度，mol/L； m—試樣的質量，g； M—與1.00ml硫代硫酸鈉標准滴定溶液(c=1.000mol/L)相當的過氧乙酸的摩爾質量(M=0.03803g/mol)； 取2次平行測定結果的算術平均值為測定結果，兩次平行測定結果之差不得大於0.3%。4對羥基苯甲酸酯類的測定 對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯和對羥基苯甲丁酯，又名尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯。三者均為苯甲酸的衍生物。我國《食品添加劑使用衛生標准》(GB2760—1996)規定：對羥基苯甲酸乙酯、丙酯和丁酯用於果蔬保鮮時的最大使用量(以對羥基苯甲酸計)為0.012g/kg；食醋0.10g/kg；碳酸飲料、蛋糕、蛋黃餡0.20g/kg；果汁飲料、果醬(不包括罐頭)、醬油等為0.25g/kg；糕點餡為0.5g/kg。4.1.高效液相色譜法4.1.1原理 樣品中對羥基苯甲酸酯類，用乙腈提取，經過濾後進高效液相色譜儀進行測定，與標准比較，以保留時間定性，以峰高定量。4.1.2儀器和試劑(1)儀器 ①組織搗碎機。 ②離心機。 ③高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)。(2)試劑 ①乙腈。全玻蒸餾。 ②對羥基苯甲酸酯類的標准溶液：稱取50mg相應的對羥基苯甲酸酯，溶於100ml容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，混勻。分別吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml上述溶液，置於100ml容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度。該系列標准溶液中每毫升分別含5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μg的對羥基苯甲酸酯。4.1.3操作步驟(1)樣品提取 稱取約20g樣品，粉碎。准確稱取2g樣品於10ml具塞離心管中，加入5.0ml乙腈，塞上塞子。振搖30s後，於500r/min離心5min，將上清液轉移至25.0ml容量瓶中，重復操作3次，用乙腈稀釋至刻度。用0.45μm濾膜過濾，供色譜測定用。(2)高效液相色譜分析參考條件 ①色譜柱：μBondapak C18 30cm×4.6mm。 ②流速：1.4ml/min。 ③檢測波長：254nm。 (3)測定分別進樣10μL對羥基苯甲酸酯標准系列中各濃度的標准溶液，以濃度為橫坐標，峰高為縱坐標繪制標准曲線。同時進樣10μL樣品溶液，與標准曲線比較定性、定量。 對羥基苯甲酸甲酯、丙酯的保留時間分別約為4.2min和7.6min，其標准色譜圖如圖8-2所示。4.1.4結果計算 式中：X—樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，mg/g; m1—被測樣品液中對羥基苯甲酸酯類的含量，μg/ml; m—樣品的質量，g； 25—樣品溶液的體積，ml。4.2.氣相色譜法4.2.1原理 樣品經酸化後，對羥基苯甲酸酯類用乙醚提取濃縮後，用具氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，與標准系列比較定量。4.2.2儀器和試劑 (1)儀器 ①K-D濃縮器。 ②氣相色譜儀：具氫火焰離子化檢測器。(2)試劑 ①乙醚，重蒸。 ②無水乙醇。 ③無水硫酸鈉。 ④飽和氯化鈉溶液。 ⑤碳酸氫鈉溶液(1g/100ml)。 ⑥鹽酸(1+1)：量取50ml鹽酸，用水稀釋至100ml。 ⑦對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的標准溶液：准確稱取對羥基苯甲酸乙酯、丙酯各0.050g，溶於50ml容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，該溶液每毫升相當於lmg對羥基苯甲酸乙酯、丙酯。 ⑧對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的使用溶液：吸取適量的對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標准溶液，用無水乙醇分別稀釋至每毫升相當於50、100、200、400、600、800μg的對羥基苯甲酸乙酯、丙酯。4.2.3操作步驟(1)樣品的提取與凈化。 ①醬油、醋、果汁等：吸取5g預先均勻化的樣品於125ml分液漏斗中，加入1ml鹽酸(1+1)酸化，l0ml飽和氯化鈉溶液，搖勻，分別以75、50、50ml，乙醚提取三次，每次2min，放置片刻，棄去水層，合並乙醚層於250ml分液漏斗中，加10ml飽和氯化鈉溶液洗滌一次，再分別以碳酸氫鈉溶液(1g/100ml)30、30、30ml洗滌3次，棄去水層。用濾紙吸去漏斗頸部水分，塞上脫脂棉，加10g無水硫酸鈉於室溫放置30min，在K—D濃縮器上濃縮近干，用吹氮除去殘留溶劑。用無水乙醇定容至每毫升含1mg對羥基苯甲酸乙酯、丙酯供氣相色譜用。 ②果醬：稱取5g預先均勻化的樣品於100ml具塞試管中，加入1ml鹽酸(1+1)，10ml飽和氯化鈉溶液，搖勻，用50、30、30ml乙醚提取3次，每次2min，用吸管轉移乙醚至250ml分液漏斗中，以下按上法操作。(2)氣相色譜分析參考條件。 ①色譜柱：內徑3mm，長2.6m，內塗以3%SE-30/Chromoserb W AWI)-MCS，60～80目。 ②檢測溫度：柱溫170℃，進樣口和檢測器溫度220℃。 ③氣體流速：氮氣，40ml/min；氫氣，50ml/min；空氣，500ml/min。(3)測定 進樣1μL對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標准系列中各濃度標准使用液於氣相色譜儀中，測定不同濃度對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的峰高。以濃度為橫坐標，峰高為縱坐標繪制標准曲線。 同時進樣1μL樣品溶液，測定峰高並與標准曲線比較定量。4.2.4結果計算 式中：X—樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，g/kg； A—測定樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，μg； V1—樣品制備液體積，ml； V2—樣品進樣體積，μL；m—樣品質量，g。
3. 飼料檢測的國標有哪些呢
飼料檢測的國家標准相對較多，飼料檢測帶有GB的屬於國家強制標准，GB/T屬於國家推薦標准。
一、飼料檢測的國家強制標准主要有:
GB 10648-2013 飼料標簽
GB 13078-2017 飼料衛生標准
GB 19081-2008 飼料加工系統粉塵防爆安全規程
二、飼料檢測的國家推薦標准主要有:
GB/T 10647-2008 飼料工業術語
GB/T 16764-2006 配合飼料企業衛生規范
飼料檢測除了以上幾部總標准外，還分飼料檢測方法國家標准、飼料產品國家標准及飼料原料國家標准等三大類，以下列舉其中供大家參考
1.飼料檢測方法國家標准主要有：
GB/T 13093-2006 飼料中細菌總數的測定方法
GB/T 13091-2002 飼料中沙門氏菌的檢測方法
GB/T 13092-2006 飼料中黴菌檢測方法
GB/T 6435-2006 飼料中水分的測定方法
GB/T 6438-2007 飼料中粗灰分測定方法
GB/T 26427-2010 飼料中蠟樣芽孢桿菌的檢測
GB/T 26426-2010 飼料中副溶血性弧菌的檢測
GB/T 26425-2010 飼料中產氣莢膜梭菌的檢測
GB/T 18823-2010 飼料檢測結果判定的允許誤差
GB/T 5917.1-2008 飼料粉碎粒度測定法
GB/T 23182-2008 飼料中獸葯及其他化學物檢測試驗規程
GB/T 28642-2012 飼料中沙門氏菌的快速檢測方法.聚合酶鏈式反應（PCR）法
GB/T 20190-2006 飼料中牛羊源性成分的定性檢測.定性聚合酶鏈式反應(PCR)法
GB/T 21101-2007 動物源性飼料中豬源性成分定性檢測方法 PCR方法
GB/T 21100-2007 動物源性飼料中駱駝源性成分定性檢測方法 PCR方法
GB/T 21104-2007 動物源性飼料中反芻動物源性成分(牛、羊、鹿)定性檢測方法 PCR方法
GB/T 21102-2007 動物源性飼料中兔源性成分定性檢測方法 實時熒光PCR方法
GB/T 21107-2007 動物源性飼料中馬、驢源性成分定性檢測方法 PCR方法
GB/T 21105-2007 動物源性飼料中狗源性成分定性檢測方法 PCR方法
GB/T 21106-2007 動物源性飼料中鹿源性成分定性檢測方法 PCR方法
GB/T 21103-2007 動物源性飼料中哺乳動物源性成分定性檢測方法 實時熒光PCR方法
2.飼料產品檢測國家標准主要有：
GB/T5915-2008仔豬、生長肥育豬配合飼料
GB/T 5916-2008 產蛋後備雞、產蛋雞、肉用仔雞配合飼料
GB/T 16765-1997 顆粒飼料通用技術條件
GB/T 20804-2006 奶牛復合微量元素維生素預混合飼料
GB/T 20807-2006 綿羊用精飼料
3.飼料原料檢測國家標准主要有：
GB/T 17890-2008 飼料用玉米
GB/T 19164-2003 魚粉
GB/T 20193-2006 飼料用骨粉及肉骨粉
GB/T 20411-2006 飼料用大豆
GB/T 19541-2004 飼料用大豆粕
飼料檢測方法國家標准具體比較多，只是列舉部分檢測標國家標准。
4. 微生物生長的常用檢測方法
一、生長量測定法
1.1體積測量法：又稱測菌絲濃度法。
通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養液（如10毫升）放在有刻度的離心管中，設定一定的離心時間（如5分鍾）和轉速（如5000rpm），離心後，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為（10-v）/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物，結果會有一定偏差。
1.2稱乾重法：
可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10-20%。在離心法中，將一定體積待測培養液倒入離心管中，設定一定的離心時間和轉速，進行離心，並用清水離心洗滌1-5次，進行乾燥。乾燥可用烘箱在105℃或100℃下烘乾，或採用紅外線烘乾，也可在80℃或40℃下真空乾燥，乾燥後稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾後用少量水洗滌，在40℃下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣，通常獲取的微生物產品為菌體時，常採用這種方法，如活性乾酵母（activitydryyeast,ADY）,一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。
1.3比濁法：
微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時，可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。如我所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計，在波長600nm處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600，以此監控E.Coli的生長及誘導時間。
1.4菌絲長度測量法：
對於絲狀真菌和一些放線菌，可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度，或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管，到入合適
的培養基，卧放，在開口的一端接種微生物，一段時間後記錄其菌絲生長長度，藉此衡量絲狀微生物的生長
二、微生物計數法
2.1血球計數板法:
血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個平台，兩嵴的表比兩平台的表面高0.1mm，每個平台上刻有不同規格的格網，中央0.1mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察，統計一定大格內微生物的數量，即可算出1毫升菌液中所含的菌體數。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數，並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。
2.2染色計數法：
為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數，而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足，人們發明了染色計數法。藉助不同的染料對菌體進行適當的染色，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液，染色後在顯微鏡下觀察，活細胞為無色，而死細胞為藍色。
2.3比例計數法：
將已知顆粒（如黴菌孢子或紅細胞）濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的'細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標准。
2.4液體稀釋法：
對未知菌樣做連續十倍系列稀釋，根據估計數，從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15隻裝培養液的試管中，經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數，然後查最大或然數表MPN（mostprobablynumber）得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。
2.5平板菌落計數法：
這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋，取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合，或將菌液塗布於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後，用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9cm的平板上出現50-500個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養，獲得了單克隆。
2.6試劑紙法：
在平板計數法的基礎上，發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基，其中加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，無色）待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標准紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷准確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。
2.7膜過濾法：
用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品，經丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會發橙色熒光，而死細胞則發綠色熒光。
2.8生理指標法：
微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化，例如酸鹼度，發酵液中的含氮量，含糖量，產氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。
2.9測定含氮量：
大多數細菌的含氮量為乾重的12.5%，酵母為7.5%，黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱後產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。
2.10測定含碳量：
將少量（乾重0.2-2.0mg）生物材料混入1毫升水或無機緩沖液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在1000C下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標准樣品做標准曲線。
2.11還原糖測定法：
還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用於大規模工業發酵生產上微生物生長的常規監測。方法是，離心發酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鍾，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨近終點時加入澱粉溶液，繼續加Na2S2O3至終點，查表讀出還原糖的含量。
2.12氨基氮的測定：
方法是，離心發酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02N的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02N的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。
2.13其他生理物質的測定：
P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙醯胞壁酸）等含量以及產酸，產氣，產CO2（用標記葡萄糖做基質），耗氧，黏度，產熱等指標，都可用於生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化，最終產氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如我所在BMP-2的發酵生產上，隨時監測溶氧量的變化和酸鹼度的變化，判斷細菌的長勢。
拓展：微生物的現代定義
肉眼難以看清，需要藉助光學顯微鏡或電子顯微鏡才能觀察到的一切微小生物的總稱。微生物包括細菌、病毒、真菌和少數藻類等。（但有些微生物是肉眼可以看見的，像屬於真菌的蘑菇、靈芝等。）病毒是一類由核酸和蛋白質等少數幾種成分組成的「非細胞生物」，但是它的生存必須依賴於活細胞。根據存在的不同環境分為空間微生物、海洋微生物等，按照細胞結構分類分為原核微生物和真核微生物。
微生物的主要特徵
體小面大
一個體積恆定的物體，被切割的越小，其相對表面積越大。微生物體積很小，如一個典型的球菌，其體積約1mm，可是其表面積卻很大。這個特徵也是賦予微生物其他如代謝快等特性的基礎。
吸多轉快
微生物通常具有極其高效的生物化學轉化能力。據研究，乳糖菌在1個小時之內能夠分解其自身重量1000-10000倍的乳糖，產朊假絲酵母菌的蛋白合成能力是大豆蛋白合成能力的100倍。
生長繁殖快
相比於大型動物，微生物具有極高的生長繁殖速度。大腸桿菌能夠在12.5-20分鍾內繁殖1次。不妨計算一下，1個大腸桿菌假設20分鍾分裂1次，1小時3次，1晝夜24小時分裂24×3=72次，大概可產生4722366500萬億個（2的72次方），這是非常巨大的數字。但事實上，由於各種條件的限制，如營養缺失、競爭加劇、生存環境惡化等原因，微生物無法完全達到這種指數級增長。 已知大多數微生物生長的最佳pH范圍為7.0 (6.6~7.5)附近，部分則低於4.0。
微生物的這一特性使其在工業上有廣泛的應用，如發酵、單細胞蛋白等。微生物是人類不可或缺的好朋友。
適應強 易變異
分布廣 種類多
微生物對我們生活的影響
微生物對人類最重要的影響之一是導致傳染病的流行。在人類疾病中有50%是由病毒引起。微生物導致人類疾病的歷史，也就是人類與之不斷斗爭的歷史。在疾病的預防和治療方面，人類取得了長足的進展，但是新現和再現的微生物感染還是不斷發生，像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治療葯物。一些疾病的致病機制並不清楚。大量的廣譜抗生素的濫用造成了強大的選擇壓力，使許多菌株發生變異，導致耐葯性的產生，人類健康受到新的威脅。一些分節段的病毒之間可以通過重組或重配發生變異，最典型的例子就是流行性感冒病毒。每次流感大流行流感病毒都與前次導致感染的株型發生了變異，這種快速的變異給疫苗的設計和治療造成了很大的障礙。而耐葯性結核桿菌的出現使原本已近控制住的結核感染又在世界范圍內猖獗起來。
微生物千姿百態，有些是腐敗性的，即引起食品氣味和組織結構發生不良變化。當然有些微生物是有益的，它們可用來生產如乳酪，麵包，泡菜，啤酒和葡萄酒。微生物非常小，必須通過顯微鏡放大約1000 倍才能看到。比如中等大小的細菌，1000個疊加在一起只有句號那麼大。
微生物能夠致病，能夠造成食品、布匹、皮革等發霉腐爛，但微生物也有有益的一面。最早是弗萊明從青黴菌抑制其它細菌的生長中發現了青黴素，這對醫葯界來講是一個劃時代的發現。後來大量的抗生素從放線菌等的代謝產物中篩選出來。抗生素的使用在第二次世界大戰中挽救了無數人的生命。一些微生物被廣泛應用於工業發酵，生產乙醇、食品及各種酶制劑等；一部分微生物能夠降解塑料、處理廢水廢氣等等，並且可再生資源的潛力極大，稱為環保微生物；還有一些能在極端環境中生存的微生物，例如：高溫、低溫、高鹽、高鹼以及高輻射等普通生命體不能生存的環境，依然存在著一部分微生物等等。看上去，我們發現的微生物已經很多，但實際上由於培養方式等技術手段的限制，人類現今發現的微生物還只佔自然界中存在的微生物的很少一部分。
微生物間的相互作用機制也相當奧妙。例如健康人腸道中即有大量細菌存在，稱為正常菌群，其中包含的細菌種類高達上百種。在腸道環境中這些細菌相互依存，互惠共生。食物、有毒物質甚至葯物的分解與吸收，菌群在這些過程中發揮的作用，以及細菌之間的相互作用機制還不明了。一旦菌群失調，就會引起腹瀉。
隨著醫學研究進入分子水平，人們對基因、遺傳物質等專業術語也日漸熟悉。人們認識到，是遺傳信息決定了生物體具有的生命特徵，包括外部形態以及從事的生命活動等等，而生物體的基因組正是這些遺傳信息的攜帶者。因此闡明生物體基因組攜帶的遺傳信息，將大大有助於揭示生命的起源和奧秘。
工業微生物涉及食品、制葯、冶金、采礦、石油、皮革、輕化工等多種行業。通過微生物發酵途徑生產抗生素、丁醇、維生素C以及一些風味食品的制備等；某些特殊微生物酶參與皮革脫毛、冶金、採油采礦等生產過程，甚至直接作為洗衣粉等的添加劑；另外還有一些微生物的代謝產物可以作為天然的微生物殺蟲劑廣泛應用於農業生產。通過對枯草芽孢桿菌的基因組研究，發現了一系列與抗生素及重要工業用酶的產生相關的基因。乳酸桿菌作為一種重要的微生態調節劑參與食品發酵過程，對其進行的基因組學研究將有利於找到關鍵的功能基因，然後對菌株加以改造，使其更適於工業化的生產過程。國內維生素C兩步發酵法生產過程中的關鍵菌株氧化葡萄糖酸桿菌的基因組研究，將在基因組測序完成的前提下找到與維生素C生產相關的重要代謝功能基因，經基因工程改造，實現新的工程菌株的構建，簡化生產步驟，降低生產成本，繼而實現經濟效益的大幅度提升。對工業微生物開展的基因組研究，不斷發現新的特殊酶基因及重要代謝過程和代謝產物生成相關的功能基因，並將其應用於生產以及傳統工業、工藝的改造，同時推動現代生物技術的迅速發展。
經濟作物柑橘的致病菌是國際上第一個發表了全序列的植物致病微生物。還有一些在分類學、生理學和經濟價值上非常重要的農業微生物，例如：胡蘿卜歐文氏菌、植物致病性假單胞菌以及中國正在開展的黃單胞菌的研究等正在進行之中。日前植物固氮根瘤菌的全序列也剛剛測定完成。借鑒已經較為成熟的從人類病原微生物的基因組學信息篩選治療性葯物的方案，可以嘗試性地應用到植物病原體上。特別像柑橘的致病菌這種需要昆蟲媒介才能完成生活周期的種類，除了殺蟲劑能阻斷其生活周期以外，只能通過遺傳學研究找到毒力相關因子，尋找抗性靶位以發展更有效的控制對策。固氮菌全部遺傳信息的解析對於開發利用其固氮關鍵基因提高農作物的產量和質量也具有重要的意義。[10]
在極端環境下能夠生長的微生物稱為極端微生物，又稱嗜極菌。嗜極菌對極端環境具有很強的適應性，極端微生物基因組的研究有助於從分子水平研究極限條件下微生物的適應性，加深對生命本質的認識。
5. 乳酸菌的檢測方法和培訓資料！（越詳細越好）
摘要：
〔目的〕探索用細菌學方法檢測酵母浸出粉中維生素B族的存在。〔方法〕採用五種乳酸菌接種於含有被測的五種中外產的酵母粉培養基，用細菌學靈敏度、菌落計數和菌落直徑測定的方法進行比較。〔結果〕經統計學處理，生長波度、菌落計數和菌落直徑試驗結果說明五種酵母粉之間有顯著性差異，而靈敏度試驗則未見顯著性差異。〔結論〕酵母浸出粉中維生素B族生長因子的細菌學實驗方法估計，可以參考生長濃度、菌落計數和菌落直徑等綜合性實
指標。
關鍵詞：
乳酸菌；酵母浸出粉；維生素B族生長因子；生長濃度；菌數計數；菌落直徑
看到的
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http://www.cnki.com.cn/Article/CJFD2002-RPGY200201006.htm
乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學檢驗
1 主題內容與適用范圍
本標准規定了乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗的技術要求。
本標准適用於以鮮乳、乳粉或輔以大豆等為原料，經乳酸菌發酵加工製成的具有相應風味的活性乳酸菌飲料。
2 引用標准
GB 4789.28 食品衛生微生物學檢驗 染色法、培養基和試劑
3 術語
乳酸菌：一群能分解葡萄糖或乳糖產生乳酸，需氧和兼性厭氧，多數無動力，過氧化氫酶陰性，革蘭氏陽性的無芽胞桿菌和球菌。
乳酸菌菌落總數：檢樣在一定條件下培養後，所得1mL檢樣中所含乳酸菌菌落的總數。
4 設備和材料
4.1 溫箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恆溫水浴：46±1℃。
4.4 電爐：可調式。
4.5 吸管：容量為1，10和25mL。
4.6 廣口瓶或三角瓶：容量為500mL。
4.7 平皿：直徑為9cm。
4.8 試管：18×180mm。
4.9 顯微鏡。
5 培養基和試劑
5.1 改良TJA培養基(改良番茄汁瓊脂培養基)。
5.2 改良MC培養基(Modified Chalmers培養基)。
5.3 0.1%美蘭牛乳培養基。
5.4 6.5%氯化鈉肉湯。
5.5 pH9.6葡萄糖肉湯。
5.6 40%膽汁肉湯。
5.7 澱粉水解培養基。
5.8 精氨酸水解培養基。
5.9 乳酸桿菌糖發酵管。
5.10 七葉苷培養基。
5.11 革蘭氏染色液：按GB 4789.28規定執行。
5.12 3%過氧化氫溶液：按GB 4789.28規定執行。
5.13 蛋白腖水、靛基質試劑：按GB 4789.28規定執行。
5.14 明膠培養基：按GB 4789.28規定執行。
5.15 硝酸鹽培養基、硝酸鹽試劑：按GB 4789.28規定執行。
5.16 生理鹽水：定量分裝於三角瓶和試劑管內滅菌。
6 乳酸菌菌落總數的測定
6.1 檢驗程序
乳酸菌菌落總數檢驗程序如下：
（略）
6.2 操作步驟
6.2.1 以無菌操作將經過充分搖勻的檢樣25mL(或25g)放入含有225mL滅菌生理鹽水的滅菌廣口瓶內作成1∶10的均勻稀釋液。
6.2.2 用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液)。
6.2.3 另取1mL滅菌吸管，按上述操作順序，作10倍遞增稀釋液，如此每遞增一次，即換用1支1mL滅菌吸管。
6.2.4 選擇2～3個以上適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液於滅菌平皿內，每個稀釋度作兩個平皿。
6.2.5 稀釋液移入平皿後，應及時將冷至50℃的乳酸菌計數培養基(改良TJA或改良MC)注入平皿約15mL，並轉動平皿使混合均勻。同時將乳酸菌計數培養基傾入加有1mL稀釋液檢樣用的滅菌生理鹽水的滅菌平皿內作空白對照，以上整個操作自培養物加入培養皿開始至接種結束須在20min內完成。
6.2.6 待瓊脂凝固後，翻轉平板，置36±1℃溫箱內培養72±3h取出，觀察乳酸菌菌落特徵(見表1)，選取菌落數在30～300之間的平板進行計數。計算後，隨機挑取5個菌落數進行革蘭氏染色，顯微鏡檢查並做過氧化氫酶試驗。革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，無芽胞的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據證實為乳酸菌菌落計算出該皿內的乳酸菌數，然後乘其稀釋倍數即得每毫升樣品中乳酸菌數。例如，檢樣10－4的稀釋液在改良TJA瓊脂平板上，生成的可疑菌落為35個，取5個鑒定，證實為乳酸菌的是4個，則1mL檢樣中乳酸菌數為：
6.3 乳酸菌在改良TJA和改良MC培養基上菌落生長形態特徵見表1。
表1 乳酸菌在不同培養基上菌落特徵
（表略）
7 乳酸菌的鑒定
對上述分離到的乳酸菌需進行菌種鑒定時，則作以下試驗。
7.1 菌種制備：自平板上挑取菌落，接種於改良TJA或改良MC瓊脂斜面，於36±1℃，24～48h培養，刮取菌苔，分別進行下列試驗。
7.2 乳酸桿菌鑒定試驗：極少見還原硝酸鹽，不液化明膠，不產生靛基質和硫化氫。
7.3 常見乳桿菌屬內種的碳水化合物反應，見表2。
7.4 產乳酸的鏈球菌的鑒別試驗，見表3。
表2 常見乳桿菌屬內種的碳水化合物反應
（表略）
表3 乳酸的鏈球菌的鑒別表
（表略）
參考資料：http://www.hopebiol.com/asphtml/refere85.htm
6. 飼料含量的檢測有哪些方法
1、顯微檢測技術。將飼料樣品放在顯微鏡下，對其細胞和外表形態進行觀察，該項檢測技術用於黴菌的檢測。
2、物理檢測技術。常用的物理檢測技術有比重及容量檢測，通過對飼料的密度進行檢測，從而可判斷飼料是否合格。
3、感官檢測技術。主要憑借檢測經驗，從飼料外表、顏色、氣味、手感等感官進行初步檢測。
4、化學檢測技術。需要專業的檢測儀器，由於不同元素產生的光譜不同，對飼料中的成分進行光譜分析，即可識別出其中是否含有有害物質。
5、生物檢測技術。主要包含DNA檢測、微生物檢測及免疫檢測。
6、近紅外光譜檢測技術。對飼料檢測樣品進行近紅外線照射，觀察其產生的光譜即可判定飼料中所含元素種類。
7. 飼料添加劑檢測包括哪些內容
飼料添加劑檢測主要是針對飼料添加劑中的微生物、重金屬、營養成分、農殘等項目進行檢測。飼料添加劑確定好檢測項目，檢測是按照國家標准還是企業標准來進行檢測，這些內容確定好後，就可以進行飼料樣品送檢。飼料送檢一般需准備300g左右，需要標記好飼料名稱等相關內容，准備兩份300g飼料進行送檢。國聯質檢飼料檢測機構提供
8. 飼料感官檢測方法有哪些，如何進行
具體方法是:
1.眼檢法觀察飼料顆粒的大小、形狀、色澤是否正常,有無發霉生蟲、異物混入等。為了提高檢查效果,應在被檢樣品的下面墊一層顏色相反的襯紙,並注意檢查時的光線,必要時可加入微量的水,以觀察樣品色澤的變化。
2.鼻檢法檢查飼料有無刺激或腐敗性氣味,在判斷困難的情況下,可加入適量的溫水。