出口食品生產廠細菌檢測方法

『壹』 食品中鏈球菌檢測方法

MM_FS_CNJ_0352出口食品 B群鏈球菌 CAMP試驗法

MM_FS_CNJ_0352

出口食品中B群鏈球菌檢驗方法

1.適用范圍

本方法適用於出口肉類、奶和奶制口中B群鏈球菌的檢驗。其他食品可參照使用。

2.主要試劑和儀器

2.1.主要試劑(包括培養基)

Todd,Hewitt肉湯〔參見附錄A(補充件)A1〕;

牛心湯培養基〔參見附錄A(補充件)A2〕;

牛心湯增菌培養基〔參見附錄A(補充件)A3〕;選擇性

牛心湯瓊脂〔參見附錄A(補充件)A4〕;

綿羊血瓊脂平板〔參見附錄A(補充件)A5〕;

β-溶血素帶〔參見附錄A(補充件)A6〕;

溶血素帶〔參見附錄A(補充件)A7〕; β-

綿羊血球〔參見附錄A(補充件)A8〕;

生理鹽水:滅菌的0.85,NaCl;

(補充件)A9〕; 革蘭氏染色液〔參見附錄A

接觸酶(過氧化氫酶)試驗〔參見附錄B(補充件)〕。

2.2.儀器

離心機5000r,min，離心管50mL，10mL;

蔡氏濾器;

微孔濾膜，孔徑0.45μm;

玻璃抽濾瓶;

玻璃水循環真空泵;

電熱恆溫箱;溫度20,60?;

顯微鏡;

定性濾紙;

不銹鋼厭氧菌培養罐;

電冰箱;

乳缽、研棒或均質器;

L形玻璃棒;

金黃色葡萄球菌菌體ATCC,25923。

3.樣品的制備

3.1.肉類

3.1.1.冷凍產品應在2,5?過夜解凍，或在45?及以下經15min解凍，立即檢驗。若不能及時檢驗，應置於,15?左右暫存。其他非冷凍易腐的食品，亦應置於4?冰箱保存。

3.1.2.以無菌操作稱取剪碎的肉類樣品25g，置於滅菌之乳缽內或均質杯內，加入25mL滅菌生理鹽水進行研磨或均質(8000,10000r,min，均質1min)，移

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入盛200mL生理鹽水的5000mL廣口瓶內，混合均勻，製成1?10稀釋液。

3.2.奶和奶製品類

3.2.1.鮮奶、酸奶:以無菌手續去掉瓶罩紙蓋，瓶口經火焰滅菌後，用無菌操作吸取25mL檢樣，放入裝有225mL滅菌生理鹽水的三角燒瓶內，振搖均勻。

3.2.2.奶粉:以無菌手續開封取樣，稱取25g放入盛有225mL溫熱的滅菌生理鹽水且裝有適量玻璃珠的滅菌廣口瓶內，振搖使其充分溶解混勻。

3.2.3.乳酪:先用滅菌刀削去部分表面封蠟，然後用點燃的酒精棉球滅菌表面後，用滅菌刀切開乳酪，再用無菌操作切取表層和深層檢樣25g，置於滅菌乳缽內切碎，加入25mL生理鹽水研成糊狀，移入盛有200mL滅菌生理鹽

水的廣口瓶內，混合均勻。製成1?10的稀釋液。

3.3.其他食品

樣品的制備取決於食品的種類和狀態。固體或半固體食品按3.1.2或3.2.3進行。液體食品按4.2.1進行。

4.過程簡述

.1.增菌培養 4

將上述制備的檢樣各取10mL分別接種於100mL牛心湯培養基內，如檢樣污染較嚴重，可同時按上述量接種於選擇性牛心湯增菌液內，經35?1?培養15h，

-帶或CAMP-點試驗。 再進行CAMP

4.2.CAMP試驗的條件

?1?培將CAMP試驗的綿羊血瓊脂平板置於不銹鋼厭氧菌培養罐內，在35養。

4.3.CAMP-帶試驗

取β-溶血素帶1,2條平行輕貼於綿羊血瓊脂平板上，間距20mm，將樣品或經過增菌的培養物直接在β-溶血素帶兩側(相距3,5mm)處垂直劃線3,4條或塗布接種，經14,18h培養後觀察結果。如在接種線與β-溶血素帶周圍朦朧溶血區重疊處能見到協同產生清晰的「箭頭」狀的增強溶血區為陽性反應，可鑒定為B群鏈球菌。不見增強溶血為陰性反應，判為B群鏈球菌陰性。

4.4.CAMP-點試驗

將樣品或經過增菌的培養物直接劃線或用L形玻璃棒塗布接種於綿羊血瓊脂平板上，經14,18h培養後，用接種環取β-溶血素滴加在圓形突起，細小的可疑為鏈球菌的單個菌落邊緣，再將平板進行孵育，分別在30，45，60min檢查溶血變化情況。在滴加β-溶血素的菌落邊緣有協同產生「扇形」增強溶血區的為陽性反應，可鑒定為B群鏈球菌。不出現增強溶血現象的為陰性反應，判為非B群鏈球菌。

每次檢驗時都要用已知陽性菌株作為對照試驗。 4.5.CAMP-帶或CAMP-點試驗陽性反應，再進行革蘭氏染色，鏡檢和接觸酶試驗，以此來與其他溶血性細菌如李斯特氏菌，肉毒梭狀芽胞桿菌和葡萄球菌等區別開。

『貳』 檢測方法，食品微生物檢驗方法，微生物指的是什麼

食品微生物檢測是運用微生物學的理論與方法，檢驗食品中微生物的種類、數量、性質及其對人的健康的影響，以判別食品是否符合質量標準的檢測方法。食品微生物檢驗方法是食品質量管理必不可少的重要組成部分，它是貫徹"預防為主"的方針，可以有效地防止或者減少食物人畜共患病的發生，保障人民的身體健康。食品微生物檢驗是衡量食品衛生質量的重要指標之一，也是判定被檢食品是否食用的科學依據之一。通過食品微生物檢驗，可以判斷食品加工環境及食品衛生情況，能夠對食品被細菌污染的程度作出正確的評價，為各項衛生管理工作提供科學依據。
范圍：
①生產環境的檢驗:車間用水、空氣、地面、牆壁等。
②原輔料檢驗:包括食用動物、穀物、添加劑等一切原輔材料。
③食品加工、儲藏、銷售諸環節的檢驗:包括食品從業人員的衛生狀況檢驗、加工工具、運輸車輛、包裝材料的檢驗等。
④食品的檢驗:對出廠食品、可疑食品及食物中毒食品的檢驗。

『叄』 食品安全檢驗中細菌總數的測定有哪幾中方法

現在一般是用平板計數法，以前的標準是用營養瓊脂，新標准時用平板計數瓊脂。還可以用快速測試紙檢驗。前者比較普遍。

『肆』 如何做菌落檢測

菌落總數的測定，一般將被檢樣品製成幾個不同的10倍遞增稀釋液，然後從每個稀釋液中分別取出1mL置於滅菌平皿中與營養瓊脂培養基混合，在一定溫度下，培養一定時間後（一般為48小時），記錄每個平皿中形成的菌落數量，依據稀釋倍數，計算出每克（或每ml）原始樣品中所含細菌菌落總數。
基本操作一般包括：樣品的稀釋－－傾注平皿－－培養48小時－－計數報告。
國內外菌落總數測定方法基本一致，從檢樣處理、稀釋、傾注平皿到計數報告無何明顯不同，只是在某些具體要求方面稍有差別，如有的國家在樣品稀釋和傾注培養進，對吸管內液體的流速，稀釋液的振盪幅度、時間和次數以及放置時間等均作了比較具體的規定。
檢驗方法參見：
GB4789.2-94 《中華人民共和國國家標准 食品衛生微生物學檢驗 菌落總數測定》
SN0168-92 《中華人民共和國進出口商品檢驗行業標准 出口食品菌落計數》
三、說明
（一）樣品的處理和稀釋：
1．操作方法：以無菌操作取檢樣25g（或25ml)，放於225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內（瓶內預置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內，經充分振要或研磨製成1：10的均勻稀釋液。
固體檢樣在加入稀釋液後，最好置滅菌均質器中以8000~10000r/min的速度處理1min，製成1：10的均勻稀釋液。
用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液
的試管內，振搖試管混合均勻，製成1：100的稀釋液。
另取1ml滅菌吸管，按上項操作順序，制10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管。
2．無菌操作：操作中必須有「無菌操作」的概念，所用玻璃器皿必須是完全滅菌的，不得殘留有細菌或抑菌物質。所用剪刀、鑷子等器具也必須進行消毒處理。樣品如果有包裝，應用75%乙醇在包裝開口處擦拭後取樣。
操作應當在超凈工作台或經過消毒處理的無菌室進行。瓊脂平板在工作台暴露15分鍾，每個平板不得超過15個菌落。
3．采樣的代表性：如系固體樣品，取樣時不應集中一點，宜多采幾個部位。固體樣品必須經過均質或研磨，液體樣品須經過振搖，以獲得均勻稀釋液。
4．樣品稀釋誤差：為減少樣品稀釋誤差，在連續遞次稀釋時，每一稀釋液應充分振搖，使其均勻，同時每一稀釋度應更換一支吸管。
在進行連續稀釋時，應將吸管內液體沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀釋液內，以免吸管外部粘附的檢液溶於其內。
為減少稀釋誤差，SN標准採用取10mL稀釋液，注入90mL緩沖液中。
5．稀釋液：樣品稀釋液主要是滅菌生理鹽水，有的採用磷酸鹽緩沖液（或0.1％蛋白腖水），後者對食品已受損傷的細菌細胞有一定的保護作用。如對含鹽量較高的食品（如醬油）進行稀釋，可以採用滅菌蒸餾水。

『伍』 食品中細菌總數和菌落總數是怎麼樣測定的

食品中細菌總數和菌落總數的測定方法如下：

平板培養計數法

實驗方法原理

菌落總數是指食品經過處理，在一定條件下培養後，所得1 g或1 ml檢樣中所含細菌菌落總數。菌落總數主要作為判別食品被污染程度的標志，也可以應用這一方法觀察細菌在食品中繁殖的動態，以便對被檢樣品進行衛生學評價時提供依據。菌落總數並不表示樣品中實際存在的所有細菌總數，菌落總數並不能區分其中細菌的種類，所以有時被稱為雜菌數，需氧菌數等。 實驗材料

瓊脂培養基 食品檢樣

試劑、試劑盒

乙醇生理鹽水氫氧化鈉溶液

儀器、耗材

電熱恆溫培養箱、冰箱、恆溫水浴鍋、托盤、天平、電爐、吸管、廣口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、試管、試管架、酒精燈、均質器、乳缽、滅菌刀、剪刀、滅菌鑷子、酒精、棉球、玻璃、蠟筆、登記薄

實驗步驟

一、檢驗程序

菌落總數檢驗程序見圖5—1

二、檢樣稀釋及培養

1. 以無菌操作，將檢樣25 g(或25 mL)剪碎以後，放於含有225 mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內預先置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內，經充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液後，最好置滅菌均質器中以8 000 r／min—1 0000 r／mln的速度處理1 min做成1：10的均勻稀釋液。

2. 用1 mL滅菌吸管吸取1：10稀釋液1 mL，沿管劈徐徐注入台有9 mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液，下同)，振搖試管混合均勻，做成1：100的稀釋液。

3. 另取1 mL的滅菌吸管，按上項操作順序作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1 mL滅菌吸管。

4. 根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計，選擇2—3個適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液於滅菌平皿內，每個稀釋度作兩個平皿。

5. 稀釋液移入平皿後，應及時將涼至46℃營養瓊脂培養基[可放置在(45土1) ℃水浴鍋內保溫注入平皿15 mI一20 mL，並轉動平皿位混合均勻，同時將營養瓊脂培養基傾入加有1 mL稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內作空白對照。

6. 待瓊脂凝固後，翻轉平板，置(36土1) ℃恆溫箱內培養(48土2) h取出板內菌落數目，乘以稀釋倍數，即得I g(1 mL)樣品所含菌落總數。

注意事項

1. 平板培養計數法只能檢出生長的活菌，不能檢出樣品中全部的細菌數，總是比實際生存在食品中的細菌數要少，這是因為食品中存在多種細菌，它們的生活特性各異，不可能在統一培養條件下全部生長出來。但是，仍能藉此評定整個食品被細菌污染的程度，所以目前一般食品的衛生檢驗中都普遍採用這種方法。

2. 平板菌落計數測定食品中的菌落總數，一般均採用中溫培養，特別是已屬於直接供食用的製成食品，因為這些食品衛生的要求，是嚴格防止消化道傳染病病原菌和食物中毒病原菌污染，這些病原菌都屬於嗜溫性菌，因而測定細菌數時，採用中溫培養是比較合理的。

『陸』 評價食品衛生質量的細菌污染指標及檢測方法

食品中的細菌(包括非致病菌、 條件致病菌和致病菌)，有些是造成食品腐敗變質的直接因素。因而常把污染食品的細菌總數、大腸菌群或大腸桿菌、腸球菌作為評價食品衛生質量的重要指標。
細菌總數，是指該食品上每個活菌細胞在培養基上生成肉眼可見的菌落。即菌落總數來表示。這種「細菌總數」實際上僅指活的雜菌，它可以作為食品污染的程度和新鮮度指標，是判斷食品衛生質量的一項重要依據。
大腸菌群或大腸桿菌:大腸菌群以大腸桿菌為主，包括產氣腸細菌和一些中間類型的細菌。大腸菌群來自人和溫血動物的腸道，一般無病原性。據估計，成人每日從糞便中排出的大腸菌群細菌多達每克糞便中含有1千萬≈1萬萬個。若水或食品中發現大腸菌群的細菌，則表示水或食品被人和溫血動物糞便所污染，而有糞便的污染就可能有腸道病原菌(傷寒桿菌、痢疾桿菌等)。因此大腸菌群或大腸桿菌可以作為腸道致病菌污染食品的指標菌。食品中大腸菌群的污染程度常用菌量表示。
腸球菌:腸球菌是鏈球菌屬中一群革蘭氏陽性球菌，呈長鏈狀或短鏈狀。與食品有關的鏈球菌，主要是糞鏈球菌和糞渣鏈球菌。腸球菌主要來源於糞便。過去和現在，大腸菌群或大腸桿菌長期以來作為糞便污染的指標細菌，廣泛應用於一-般食品的常規細菌檢驗。但是這類細菌是嗜溫菌，在低溫、冰凍狀態下容易死亡，這就降低了它應有的指標作用。將具有抵抗冰凍力的腸球菌作為指標細菌，用於冷凍食品的細菌檢驗，指標效果要優於大腸菌群，但檢驗方法要復雜得多食品衛生標准中，這三種不同的細菌指標，其衛生學意義不同，它們既有聯系，又有區別，應根據實際情況加以應用，以對食品衛生質量作出正確的判斷。
針對這一系列食品安全衛生標准檢控，冠宇儀器微生物致病菌檢測箱是我公司根據市場需求設計的一種專門針對微生物致病菌研製的檢測箱，箱內配有齊全的采樣工具、各類細菌類檢測速測盒（菌落總數測試片、大腸桿菌大腸菌群測試片、食品大腸菌群測試片、餐飲具大腸菌群檢測是紙片、黴菌、酵母菌測試片、沙門氏菌測試片、金黃色葡萄球菌測試片、大腸桿菌O157測試片、副溶血弧菌測試片、阪崎腸桿菌測試片、蠟樣芽胞桿菌測試片、水中大腸菌群檢測試劑盒等）、以及加厚鋁合金外框，堅固耐用滿足食品微生物采樣檢測需求。

『柒』 食品微生物檢驗內容與檢測技術方法

食品微生物檢驗內容與檢測技術方法

近年來，世界各地出現了諸多嚴重的食品安全事故，由於食品微生物污染而造成的質量事故嚴重威脅著人們的身體健康，如何做好食品微生物檢驗，確保食品質量安全，就需要社會各界共同努力。根據國際和國內衛生組織的相關規定和要求，所有的食品生產廠商都要對食品的質量進行嚴格的檢驗，對於生產出來食品的菌落種類、細菌數量、大腸菌群、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等進行檢測，必須達到要求的合格標准才能進入市場進行出售。下面是我為大家帶來的食品微生物檢驗內容與檢測技術方法的知識，歡迎閱讀。

需要注意的問題

一是工作人員及活動規定。必須保證參加檢測的人員具有相應的資格，並通過相關的考試後，持證上崗才能開展相關活動。同時要求工作人員不僅需要具有高超的專業技術，還應該有良好的職業道德修養，盡可能降低人為問題的制約。檢測過程需要按照相關的活動規范和流程進行，使用無菌設備認真地進行抽樣活動，採用先進技術獲取相關信息。二是存放裝置。若想檢測過程順利進行，除了確保實驗室有必要的設施外，還應該重點考慮裝置存放的條件和要求。三是裝置和葯品的配置。在各項裝置進行安裝時應該對氣溫進行調節，確保其安穩，對裝置氣溫穩定性合乎規定要用的具體時間詳細記錄。同時在規定的時間內對各種裝置進行消毒處理，並通過感應設備對其運作狀態進行監測。對於葯品的配置，培養基往往在121℃下採用高壓濕熱滅菌法滅菌15分鍾;較為敏感的'培養基一般採用膜過濾法。四是樣本的處理。在樣本收集過程中，需要確保抽樣活動是在無菌環境下展開的，有效避免了樣本被污染。在樣本輸送時，應該防止樣本受到光線的影響而出現污染現象，抽樣之後就應該及時將其送至測試場地。一般樣本輸送時間要控制在3h內，如果無法及時送到，要確保在近乎之前的氣溫時將其完整的存放。

食品微生物檢驗內容

一是檢驗食品污染程度指示菌。細菌總數即菌落總數，是食品和生活飲用水檢樣處理後，在特定培養條件下，所得1g或者1mc檢樣中所含有的細菌菌落個數，這就是判斷食品和生活飲用水污染程度的關鍵指標。大腸菌群系是在37℃下培養24h的一群發酵乳糖、產氣、產配以及需氧或者厭氧的革蘭氏染色陰性無芽胞桿菌。這種菌群主要來源於人和牲畜的糞便，因此，可以用糞便的污染指標菌對食品的衛生質量進行評價。二是檢測食品中治病菌。在食品微生物相關檢驗標准中已經明確規定某些微生物的數量，因此在對食品污染程度指示菌檢測的同時，還應該對一些治病菌進行測定，如沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等。

食品微生物檢測技術方法

很長時間以來，開展的此項檢測活動，是按照瓊脂平板的措施來進行的，通常要兩到三天的時間才可以完成。最近，許多的專家和組織都不斷地對工藝以及措施進行深化分析，獲取了非常高的成就，對許多措施進行了改進，切實提升了檢測的精準性以及安穩性特徵，而且獲取了許多全新的工藝，具體有如下的措施：

1.採用電阻抗法。具體的講，它是指細菌繁衍的時候，將會使培養基中的火分電惰性物質如碳水化合物、蛋白質和脂類等，代謝為具有電活性的小分子物質，其能增加培養基的導電性，進而導致阻抗出現改變，因此，可以通過檢測培養基的電阻抗變化情況來判定細菌在培養基中的生長繁殖特性，即可檢測出相應的細菌。

2.採用快速酶觸反應及代謝產物的檢測。細菌在生長繁殖過程中可合成和釋放某些特異性的酶，所以根據其特性來選用相對應的底物和指示劑，而且合理的記載信息。

3.採用分子生物學技術。它涵蓋兩項內容：1)核酸探針技術。結合鹼基互補相關的概念，使用獨特的措施來對物體進行標注。2)聚合酶鏈式反應(PCR)技術。其原理為通過加熱使雙鏈DNA經裂解成兩條單鏈，成為引物和DNA聚合酶的模板;接下來把氣溫變低，使寡聚核苷酸引物與DNA分子上的互補序列退火。通常狀態中，當退火的氣溫非常高的話，它的擴增特性就十分的優秀。

4.採用免疫學方法檢測細菌抗原和抗體的技術。具體有三項措施：1)熒光抗體檢測技術(IFA)，它又有兩種，分別是直接的以及間接地。其中第一種是直接在樣本上滴加已知特異性熒游標記的抗血清，然後對其清洗，進而獲取信息。而後一種措施是在檢樣上滴加已知細菌特異性抗血清，等到發生反映之後再仔細地清洗，再加入熒游標記的抗體後在熒光顯微鏡下觀察結果。2)免疫酶技術(EIA)，其是將抗原、抗體特異性反應和酶的高效催化作用原理結合，此法非常的獨特，而且功效非常好。通過共價結合將酶與抗原或抗體結合，形成酶標抗原或抗體，或通過免疫方法使酶與抗酶抗體結合，形成酶抗體復合物。3)免疫磁珠分離法(IMS)，即應用抗體包被的免疫磁珠，用一個磁場裝置收集鐵珠。

5.採用儀器法。1)微型全自動熒光酶標分析儀(Mini-VIDAS)，其主要採用具有優異的敏感性和特異性的酶聯熒光技術(ELFA)，得到的熒光和抗原的比例是一種順向的關系。2)全自動微生物分析系統(Vietk-AMS)。它能夠一次對非常多的樣本開展分析，而且檢測的時間不需要非常久，通常在兩到三個小時即可，此法的效率非常好，同時也將成為檢測行業全行的發展趨勢。