mpo檢測方法

㈠ ANCA相關性小血管炎的檢測方法：

ANCA的檢測方法有許多種，包括IFF、RIA、ELISA、Western印跡法、斑點印跡法及免疫沉澱試驗等。首選方法為IFF，至今仍作為ANCA篩檢的「金指標」。在用IFF法檢測ACNA的同時進行ELISA的檢測將有助於疾病的動態觀察；靶抗原PR3或MPO的分辨將有助於某些特發性壞死性血管炎或壞死性腎小球腎炎的確診。Gross等(1993)作了ANCA和有關疾病的分析。陳素英等(1996)以IFF法檢測ANCA並對其與170例疾病的相關性作了報道。現介紹IFF檢測ANCA。 (1)用肝素抗凝血分離白細胞，以0．01mol/L，pH7．4PBS液洗滌，製成細胞基質片，用95%乙醇固定5min。
(2)將1：20稀釋的血清標本滴加於底物片上，濕盒內37~C孵育30min。
(3)再將基質片分為三組，分別滴加1：10稀釋的FITC-羊抗人IgG、IgA和IgM，37~C孵育30min，洗滌3次。
(4)加2：1緩沖甘油封片，置熒光顯微鏡下觀察。 C-ANCA是診斷多發性肉芽腫(Weaner』s granulomatosis，WG)非常敏感的指標，也少見於微小多動脈炎(microscopic polyarteritis，MPA)，Churg-Strauss綜合征、經典的結節性多發性動脈炎。P-ANCA見於腎性血管炎，急性進行性腎小球腎炎(rapidly pro-Gressive lomemlonephritis，PRGN)，風濕性和膠原性血管疾病。X-ANCA或P-ANCA見於潰瘍性結腸炎，自身免疫性肝炎，原發性硬化膽管炎。
ANCA在風濕病患者血清中陽性率為70．0%，與ANA和抗組蛋白(histone)有交叉重疊現象。在風濕病患者中，ANCA不僅存在於SLE中，類風濕性關節炎及皮肌炎患者的血清也可出現ANCA陽性。在腎臟疾病中，ANCA陽性率為72．85%，其分布較廣泛，多見於新月體腎小球腎炎、紫癜性腎炎、IgA腎病和局灶節段性腎小球硬化，但也可見於微小病變性腎病、急性間質腎炎、腎小球終末期病變等疾病中。
因此，不能以ANCA陽性而確診為局限於腎臟MPA或壞死性腎小球腎炎，腎組織學檢查仍不可缺少。
抗中性粒細胞抗體(ANCA)是指與中性粒細胞及單核細胞胞漿中溶酶體酶發生反應的抗體。當中性粒細胞受抗原刺激後，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶物質及白細胞抗原生成，刺激機體而產生ANCA。 用經典的間接免疫熒光技術（IIF）檢測ANCA，陽性熒光染色模型分兩種：胞漿型（cANCA）和核周型（pANCA）。報道一種特殊的熒光譜稱之為非典型ANCA（xANCA）。ANCA常與疾病的活動性有關，疾病緩解期滴度下降或消失。 cANCA：抗原主要是蛋白酶-3(PR3-proteinase)。cANCA主要見於韋格納肉芽腫（陽性率佔80%，且與病程、嚴重性和活動性有關）。系Wegener(WG)肉芽腫病的特異性抗體。C-ANCA對呼吸道有親合性，致上下呼吸道壞死，肉芽腫形成。C-ANCA陽性也可見於少數顯微鏡下多動脈炎（MPA）、Churg-Strauss綜合征（CSS）、結節性多動脈炎（PAN）、少數巨細胞動脈炎、過敏性紫癜、白細胞破碎性皮膚性血管炎和白塞病。 pANCA：抗原主要為髓過氧化物酶（MPO）。pANCA不如cANCA具有診斷特異性。pANC陽性主要見於特發性壞死性新月體性腎小球腎炎（NCGN）、 顯微鏡下多動脈炎（MPA）。也可見於Churg-Strauss綜合征（CSS）、結節性多動脈炎（PAN）、SLE、RA、SS、SSc。在NCGN、MPA中pANCA和cANCA陽性率幾乎相同。相對而言，pANCA患者的血管炎病變程度重，常有多系統損害。 非典型ANCA（xANCA）：它代表了pANCA和cANCA的混合物。陽性見於潰瘍性結腸炎、自身免疫性肝炎和慢性炎症疾病。

㈡ 風濕病的免疫檢驗

一、抗核抗體測定

(Antinuclear antibody ,ANA) ANA是抗細胞核多種成分的自身抗體，無種屬及器官特異性。ANA可分為抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗非組蛋白抗體、抗核仁抗體及其他細胞成分抗體。這些抗體共同組成ANA譜。

抗核抗體(ANA)的檢查最常用於篩查全身性風濕病和自身免疫病。ANA的檢查可觀察到能與細胞核內的核酸和蛋白抗原起反應的自身抗體。細胞內可能存在對多種抗原起反應的抗體。只有某種抗體的效價很高時，IFA才能加以鑒別。

1、homogenous(均質型)

又稱彌散型，相應的抗原是雙鏈DNA和組蛋白復合物。常見於SLE，特別是腎臟受累病人。也可見於其它結締組織病，如：風濕性關節炎，MCTD，乾燥綜合征，硬皮病，慢性活動性肝炎及原發性膽汁性肝硬變。

2、Peripheral(周邊型)

相應的抗原為雙鏈DNA，多見於活動性SLE病人。

3、Speckle(斑點型)

主要是針對ENA的抗體，包括Sm，RNP，SSA，SSB，Scl-70。一般認為低效價的斑點型ANA不是結締組織病特有的，實際上不代表臨床異常。高效價的抗Sm抗體多與SLE有關。高效價的抗RNP自身抗體見於MCTD，但也見於SLE。抗SSA和抗SSB抗體，見於S.S，也可見於SLE。當病人有抗SSA抗體時，通常以皮膚表現和光過敏為主。，也存在於ANA陰性狼瘡和新生兒狼瘡。Scl-70抗體與硬皮病有關。

4、Nucleoli(核仁型)

其靶抗原是與RNA分子相關的核蛋白。多見於硬皮病。

5、Centromere(著絲點型)

抗著絲點抗體(ACA)，多見於全身性硬皮病的CREST綜合征。

常用檢測方法為IFA、ELISA、免疫印跡法、RIA、免疫斑點法、膠體金標斑點免疫滲濾法等。其中IFA是應用較廣的一種方法。一般採用鼠肝切片或Hep-2細胞為底物抗原片，當加入病人血清時，病人血清中的ANA可與細胞中相應抗原成分結合。再加入熒游標記抗人IgG，在熒光顯微鏡下可見細胞核內亮綠色熒光。

〖參考值〗 <1:10或陰性

〖臨床意義〗

ANA陽性見於多種疾病，常用於風濕病及自身免疫病的診斷。SLE患者陽性率在95%以上，且效價常在1：80以上。在其他風濕病如RA、系統性硬化症、皮肌炎、乾燥綜合征 (SS)、混合結締組織病(MCTD)等也可陽性。其他如肝病，病毒感染等也可呈低效價陽性。

〖注意事項〗

在大約1%的正常人的體內可測到低效價的非特異性抗核抗體，80歲以上老人的檢出率可高達50%。高效價的ANA一般與活動期SLE密切相關。採用Hep-2細胞檢測ANA，可見到不同的染色模型。

此外，口服避孕葯的婦女也可檢測到ANA。

二、可提取性核抗原(Extractable nuclear antigen ENA)抗體

ENA是細胞內許多小分子的RNA和多肽組成的非組蛋白的酸性核蛋白顆粒。分布在細胞質中的稱為小細胞漿核糖核蛋白(scRNPs);分布在細胞核內的稱為小細胞核核糖核蛋白(snRNPs)。目前已發現的有20餘種，其中常用的抗ENA抗體有如下幾種。

(一)抗Sm抗體

Sm是病人Smith的縮寫。Sm抗原屬於SnRNP，由5個RNA和多肽組成，抗原表位在29KD、28KD和13.5KD多肽上，抗Sm抗體是酸性糖蛋白，是SLE的標記抗體。

(二) 抗nRNP(u1RNP)抗體

u1RNP是u1RNA和蛋白質組成的，抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上，是混合結締組織病(MCTD)的重要血清標志。

(三)抗SSA抗體

SS為乾燥綜合征的縮寫。此抗體又稱抗RO抗體。SSA抗原是RNA和蛋白質復合物，抗原表位在52KD多肽上，主要見於原發性乾燥綜合征患者及SLE。

(四)抗SSB抗體

SSB抗體常伴隨SSA抗體同時出現，又稱抗La抗體，SSB抗原屬於SnRNP，是含有RNA和50KD蛋白質的復合物。抗原表位在45KD、47KD和48KD多肽上。與SSA抗體並存對診斷SS有特異性。

(五)抗Scl-70抗體

Scl-70抗原表位在86KD、70KD的片段上，是DNA拓撲異構酶I的降解產物，抗Scl-70抗體幾乎僅見於硬皮病，陽性率30%左右。

(六)抗Jo-1抗體

Jo-1抗體是組氨醯tRNA合成酶，抗原表位在55KD多肽，抗Jo-1抗體是多發性肌炎和皮肌炎的標記抗體，陽性率25-40%。

(七)抗核糖體抗體

核糖體在核仁合成，然後轉入胞漿，抗原表位在大亞基上的38KD、16KD和15KD多肽上。抗核糖體抗體陽性主要見於SLE，陽性率20-30%。

檢測以上抗體的方法主要有：對流免疫電泳法(CIE)、雙相免疫擴散法，免疫印跡試驗(IBT)，免疫斑點技術和ELISA法等。一般採用兔胸腺或牛胸腺提取物或細胞提取物作為抗原。近年來，應用分子重組抗原制備的試劑盒已投入市場。

〖參考值〗陰性

〖臨床意義〗

1. 抗n RNP抗體：見於35-40%的SLE病人，在MCTD病人中陽性率可達95-100%，也可見於其他風濕性疾病。

2. 抗Sm抗體：主要見於SLE及重疊綜合征，急性期病人75%為陽性。一般SLE患者30-40%陽性率。但Sm抗體陽性者90%以上為SLE，故稱之為SLE的標記抗體。

3. 抗SSA和抗SSB抗體：見於40-45%的SS病人。抗SSA抗體也可見於25%的SLE病人及其他風濕性疾病;抗SSA抗體與新生兒狼瘡和先天性傳導阻滯有關。抗SSA抗體也可見於病毒感染等非風濕性疾病。抗SSB抗體對原發性乾燥綜合征較特異，但陽性率僅27%左右。

4. 抗Scl-70抗體：一般僅見於系統性硬化症病人，陽性率20-60%。

5.抗Jol-1抗體見於30%的多發性肌炎病人及10%的皮肌炎病人。抗Jol-1抗體與多發性肌炎病人間質性肺炎的發生率增加有關。

6.抗rRNP 抗體：主要見於SLE患者，陽性率20%左右，與中樞神經系統病變有關，多在疾病活動期出現。

〖注意事項〗

判斷試驗結果時要結合臨床表現作出評價，也應根據試驗方法來作出解釋。對流免疫電泳法和雙相擴散法敏感性低，但特異性較高;免疫印跡法、斑點免疫法及ELISA方法敏感性提高，但特異性相對減少。

三.抗雙鏈DNA抗體(Antidouble-stranded DNA ， A-dsDNA，)

A-dsDNA 對SLE有高度特異性，是針對細胞核脫氧核糖核酸的自身抗體。臨床上常用的檢測方法有：①Farr¡®s法：125I-DNA與待檢標本中的A-dsDNA形成免疫復合物，加飽和硫酸銨使復合物沉澱，以γ計數器分別測定上清中游離及沉澱物中已結合的125I-DNA含量，可計算出血清中A-dsDNA的結合活性。

②ELISA法：將小牛胸腺DNA包被在微孔板中，加入病人血清，如有A-dsDNA則結合到微孔板上，加入酶標抗人IgG，加入底物顯色後經酶標儀比色可知血清中A-dsDNA抗體的量。

③免疫熒光法：採用馬疫錐蟲或短膜蟲作為基質，加入病人血清。血清中的A-dsDNA與膜上的天然DNA結合，加入熒游標記抗人IgG。馬疫錐蟲和短膜蟲的動基體會發出綠色熒光。

④金標斑點法：雙鏈DNA包被於硝酸纖維膜上，加入病人血清，加入金標記抗人IgG，如有A-dsDNA存在，會顯示紅色斑點。

〖參考值〗依方法不同參考值也有不同。

Farr¡®s法：≤ 0.20 免疫熒光法：<1:10ELISA法：依試劑盒而定，一般<70u

金標法：陰性

〖臨床意義〗

A-dsDNA 陽性對 SLE 有較高的特異性。大約60%的活動性 SLE 病人會出現 A-dsDNA。其他風濕性疾病也會出現，但陽性率非常低，如RA、S.S。

〖注意事項〗

假陽性結果非常少見，但陰性亦不能排除SLE的診斷。

四.抗中性粒細胞胞漿抗體( Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA) 測定

ANCA是針對中性粒細胞胞漿多種成分的 自身抗體，主要有髓過氧化物酶(MPO)和蛋白酶3( Proteinase 3 ，PR3)的抗體 。主要用於診斷Wegener 肉芽腫和系統性血管炎，特別是伴有腎病、呼吸疾病或其他類型血管炎引起多器官損害的患者。檢測方法有IFA、ELISA、 IBT等。

〖參考值〗 陰性。

〖臨床意義〗

免疫熒光法檢查ANCA陽性一般分為兩種熒光類型，一種是胞漿型，稱為cANCA，一種是核周型，稱為pANCA。cANCA產生彌漫性細胞漿染色，是針對PR3的抗體 ，一般見於wegener肉芽腫病(WG)，特別是腎和肺受累的病人。pANCA產生核周染色，是針對MPO的抗體 ，主要見於系統性血管炎病人。

在WG病人中，cANCA陽性率在活動期可達80%，且有較高的抗體效價。在緩解期抗體陽性率低，且效價下降，或完全消失。

〖注意事項〗

ANCA 陽性也可見於 Good-Pastare¡®s 綜合征和SLE病人。WG的診斷不能單純依賴ANCA的結果，還要結合其他臨床表現，試驗室檢查和組織病理學檢查才能確定。ANCA效價不能完全反應疾病的活動以及對治療的反應。pANCA 陽性不是特異性的抗MPO抗體，也可以是抗粒細胞胞漿中其他酶的抗體，如彈性蛋白酶，組織蛋白酶G等。ANCA檢測應注意排除其他自身抗體的交叉反應，如ANA。因其可產生假陽性應注意鑒別，並進行ANA檢測。

五、抗線粒體抗體(Antimitochondrial antibody,AMA)

AMA是以細胞漿中的線粒體為抗原的一種自身抗體，無器官和種屬特異性。一般採用大鼠腎及胃作為抗原基質，採用IFA檢測，陽性可見大鼠腎和胃的細胞漿呈現細顆粒狀熒光。

採用免疫印跡法可將與線粒體抗原的反應分為從M1到M9九種類型，高效價的M2和M9型自身抗原與原發性膽汁性肝硬變相關。目前已有檢測M2的ELISA試劑盒供應。

〖參考值〗 陰性 >1：10 為陽性

〖臨床意義〗

AMA是原發性膽汁性肝硬化的標記抗體，陽性率達90%，並且50%患者抗體效價達1：1280或更高。此外，也可見於慢性活動性肝炎、隱匿性肝硬化。肝外阻塞性黃疸患者AMA常陰性，因此可作為鑒別診斷的一個指標。正常人中陽性率<10%，且效價較低。

六.抗平滑肌抗體(Antismooth muscle antibody，ASMA )

ASMA是抗肝細胞膜上一種肌動球蛋白的自身抗體。這種肌動球蛋白與平滑肌有交叉抗原性，因此與平滑肌有反應。一般採用IFA法，以大鼠胃作為抗原基質，陽性可見胃壁平滑肌呈現亮綠色熒光。

〖參考值〗 陰性，>1：10為陽性

〖臨床意義〗

主要見於明顯活動期的自身免疫性肝炎患者，陽性率在80%以上，效價 在1：80以上。急性病毒性肝炎早期ASMA也可陽性，且早於 HBsAg出現。其他疾病如傳染性單核細胞增多症、SS、RA、支原體肺炎、腫瘤和病毒感染者也有不同程度的.陽性率。正常人中僅有2%陽性。

㈢ 如何有效測試光纖線路質量

一根光纖熔接效果如何、光纖中間是否有斷開的地方、光纖實際使用對光的衰耗是否能夠達標，需要用儀表進行測試。
一般常用測試設備連接光纖，通過對光纖打光（發射一定波長的光信號）進行測試。「光纖打光」是在光纖維護測試是說的俗語，其實就是把光纖接到紅光筆或光源上，來判斷光纖通斷和光纖衰耗情況。根據使用設備不同，有如下幾種方法：
1、用紅光筆「打光」。紅光筆發射的是可見光，用來判斷短距離光纖中間是否有斷開的地方。
2、用激光光源「打光」。光纖另一頭接光功率計測試，根據光源發光強度和光功率計接收到的光源強度，來測試折斷光纖衰耗情況。
3、用OTDR設備「打光」，這種方法一般用於比較長距離的光纖測試。光纖一端接設備，設備發射光信號，通過設備檢測光信號在光纖裡面不同衰耗點和斷點處反射回來的光信號，計算出該點距離測試點的實際長度。從而，可以快速判斷出光纖斷點或熔接不好的位置。
網線、光纖熱縮管、MPO/MTP、光纖跳線、光纖適配器、光纖配線箱、光纖光纜等相關的最好用達標高質量的，這樣才可以保障我們的通信傳輸