❶ 如何用酶標儀測定RNA濃度
換濾光片，340、280、260、230
石英的96孔板，每個孔的體積為200ul，空白直接200ulDEPC水，實驗組196ulPEPC水+4ulRNA
如果換了濾光片了，測試步驟與MTT測試步驟差不多，主要就是設置吸光度，點擊四次吸光度，設置為340、280、260、230。
1、進板後確定板類型和板孔
2、設置吸光度，點擊四次吸光度，分別設置為340、280、260、230。
3、開始
酶標儀即酶聯免疫檢測儀是酶聯免疫吸附試驗的專用儀器又稱微孔板檢測器。可簡單地分為半自動和全自動2大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析。 測定一般要求測試液的最終體積在250μL以下，用一般光電比色計無法完成測試，因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。
❷ 如何使用多功能酶標儀檢測雙熒光素酶
報告基因檢測被廣泛應用於研究基因表達及外部刺激下原核和真核細胞的反應。Luciferase報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統。可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。但是報告基因實驗中往往會受到各種實驗條件的影響，例如培養細胞的數目和活力的差別、細胞轉染和裂解的效率、以及加樣操作過程中引起的變異。Dual-Luciferase雙熒光素酶報告基因檢測系統中含有在同一細胞中同時表達的兩種熒光素酶。共轉染的「對照」報告基因會作為內對照，減小細胞活性和轉染效率對實驗的影響。因此雙報告系統減少了外部干擾，使得實驗數據更可信。Promega提供了一種先進的雙報告基因技術（Dual-reporter assays）,結合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試，該技術同時使用兩個獨立的報告基因以提高實驗的准確性，Biotek synergy 系列微孔板檢測儀作為雙報告基因的檢測分析平台獲得了Promega DLR 認證。
在雙報告基因系統中，通常一個報告基因用於檢測特定實驗條件下待測物的反應，即「實驗」reporter，另一個報告基因用來檢測實驗條件，類似於內部對照，用於校準「實驗」reporter的數據。通過這種方法，可減少內在的變化因素所削弱的實驗准確性，例如：轉染效率、細胞活性、細胞裂解差異以及加樣操作過程中引起的差異。Promega公司的Dual-Luciferase系統利用螢火蟲和海腎熒光素酶的活性分別檢測實驗組和對照組。螢火蟲熒光素酶是一種分子量為61KD的單體酶，分兩步催化蟲熒光素的氧化反應，產生560nm的光，海腎熒光素酶是一種分子量為36KD的單體酶，催化海腎熒光素的氧化反應，產生中心波長為480nm的藍光。螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶沒有種源同源性，對應不同的反應底物，反應中沒有任何的交叉干擾。
❸ sod酶活性測定方法
1、測定方法很多，常見的有化學法、免疫法和等電點聚焦法。其中化學法應用最普遍，化學法的原理主要是利用有些化合物在自氧化過程中會產生有色中間物和O2 -，利用SOD分解而間接推算酶活力。
2、在化學方法中，最常用的有黃嘌呤氧化酶法，鄰苯三酚法，化學發光法，腎上腺素法，NBT-還原法，光化學擴增法，Cyte還原法等。
（1）改良的鄰苯三酚自氧化法簡單易行較為實用。
（2）化學發光法和光化學擴增法不適用於測定Mn-SOD，但對於Cu/Zn-SOD反應極靈敏。（3）Cyte還原法用於Mn-SOD活力測定結果穩定，重復性好。但專一性和靈敏度不夠理想，而且需要特殊儀器，實際應用受到限制。
（4）亞硝酸鹽形成法與CN—抑制劑或SDS處理相結合，應用於Mn-SOD測定，靈敏度比Cyte還原法提高數倍，而且專一性強，重復性好，操作方便，不需要特殊儀器和設備，易於實際應用和推廣，是目前較好的測定方法之一。
❹ 怎麼使用多功能酶標儀檢測雙熒光素酶報告基因
以Promega公司雙熒光素酶檢測試劑盒為例：
1. 試劑准備
按照說明書配製PLB細胞裂解液、LAR II檢測液、Stop&Glo檢測液。
2.儀器准備
准備單管或微孔板發光檢測儀
3. 樣品准備
按照說明書使用PLB細胞裂解液裂解細胞，取20ul細胞裂解液
4. 檢測過程
a) 在1.5ml離心管中加入20ul細胞裂解液，然後加入100ul的LARII溶液，混合後放入發光檢測儀檢測第一次發光值；
b) 然後加入Stop&Glo檢測液，終止第一次發光，同時開始第二次發光，混合後放入發光檢測儀檢測第二次發光值。
❺ 酶標儀的使用方法
不知這個是否有用：http://www.chem17.com/st140148/Article_71949.html
❻ 酶活力的測定方法及原理
酶活力的測定方法：有兩種主要方法即終止反應法和連續反應法。
終止反應法：是在恆溫反應系統中，每隔一定時間，取出一定體積的反應液，用強酸強鹼或SDS以及加熱等使反應立即停止，然後用化學法放射性化學法或酶偶聯法分析產物的形成量或底物的消耗量。這是最經典的酶活力測定方法，幾乎所有的酶都可以根據這一原理設計出具體的測定方法。
連續反應法：無須終止反應，而是在酶反應過程中用光化學儀器或電化學儀器等來監測反應的進行情況，對記錄結果進行分析，然後計算出酶活力。
酶活性測定的原理：
1. 超氧物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）
活性的測定 SOD採用氮藍四唑（nitro-blue tetrazolium，NBT）法（Beauchamp和Fridovich，1971）。反應步驟為：取200μl粗提液，加入3.7 ml NBT反應液50mmol/LpH7.8的磷酸緩沖液（PBS）配製的含77.12μmol/L氮藍四唑, 100μmol/LEDTA－Na2和13.37mmol/L甲硫氨酸溶液〕，在30℃下保溫2分鍾後加入100μl核黃素溶液（pH7.8的50mmol/L磷酸緩沖液中含80.2μmol/L 核黃素和100μmol/LEDTA－Na2），在4000Lx日光下反應20min。然後迅速測定A560。以不照光的管做空白。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。酶活性按以下公式計算：以抑制NBT光化還原的50％為一個SOD活性單位，結果以U/mg蛋白表示。以加緩沖液代替酶液的作為對照。
SOD總活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 式中， Ack為照光對照管的吸光度；AE為樣品管的吸光度；V為樣品液總體積（ml）；Vt為測定時樣品用量（ml）；W為樣品鮮重（g）或蛋白質含量（mg）。
2. 過氧化氫酶（Catalase，CAT）
活性測定 CAT 活性參照Aebi (1984)[7]的方法進行測定。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL 。400 μL反應液含50 mmol/L的PBS (pH 7.0)，30 mmol/L的H2O2和50 µL粗酶液。反應從加入過氧化氫開始計時，連續測定在240 nm吸光度的降低值。酶活性定義為：一個過氧化氫酶單位相當於在規定條件下於溫度25℃，pH7.0條件下1分鍾分解1μmol過氧化氫所需酶量，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。
3. 多酚氧化酶（Polyphenoloxidase，PPO）
活性的測定 PPO活性測定採用鄰苯二酚法（Aquino-Bolaños和Mercado-Silva，2004）。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。350µL反應液（用50mmol/L，pH6.4的PBS配製，內含100µmol/L鄰苯二酚）中加入50 µL的粗酶液，平衡1分鍾後連續測定398nm吸光度的變化。以1分鍾內398nm吸光度上升0.01為一個酶活性單位，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。
4. 過氧化物酶（Peroxidase，POD）
活性測定POD活性測定採用愈創木酚法（Lurie等，1997)。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。反應體系為30μL粗酶液，290 µL 0.3%愈創木酚（用50 mmol/L的PBS配製，pH 6.4）和 80µL0.3%H2O2（用50 mmol/L的PBS配製，pH 6.4）。反應在加入H2O2 後開始准確記時。連續吸光度在470 nm的上升值。酶活性以每分鍾上升0.01為一個單位，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。