A. 菌落總數大腸桿菌和致病菌的檢測方法
菌落總數用平皿法,單位是個/ml(每毫升或毫克裡面有多少的完整的菌落),方法是:在無菌操作的前提條件下,吸取1ml的原液加入到9cm的平皿里,在倒入3-5ml(37℃)的營養瓊脂,在37℃的溫箱里培養24小時,取出來計算它的菌落單位總數就行.
大腸桿菌用發酵法,單位是MPN/100ml(每100毫升或毫克的樣品裡面最大可能菌落形成單位)方法是15管法(適合食品)或9管法(適合非食品如游泳池水),用乳糖膽鹽發酵管
致病菌用培養法,只要符合相應的化學，生物試驗就可以判斷為某致病均陽性
B. 菌落總數大腸桿菌和致病菌的檢測方法
大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100mL(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
1
設備和材料
1.1
溫箱：36±1℃。
1.2
冰箱:0～4℃。
1.3
恆溫水浴
:44.5±0.5℃。
1.4
天平。
1.5
顯微鏡。
1.6
均質器或乳缽。
1.7
平皿:直徑為90mm。
1.8
試管。
1.9
吸管。
1.10
廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。
1.11
玻璃珠:直徑約5mm。
1.12
載玻片。
1.13
酒精燈。
1.14
試管架。
2
培養基和試劑
2.1
乳糖膽鹽發酵管:按GB
4789.28中4.9規定。
2.2
伊紅美藍瓊脂平板:按GB
4789.28中4.25規定。
2.3
乳糖發酵管:按GB
4789.28中4.10規定。
2.4
EC
肉湯:按GB
4789.28中4.11規定。
2.5
磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB
4789.28中3.22規定。
2.6
生理鹽水。
2.7
革蘭氏染色液:按GB
4789.28中2.2規定。
3
操作步驟
3.1
檢樣稀釋
3.1.1
以無菌操作將檢樣25mL(或g)放於有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8
000-10
000
r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2
用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3
另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。
3.1.4
根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2
乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖
膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃
溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3
分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃
溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4
證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置
36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5
報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。
4
糞大腸菌群(faecal
coliform)
4.1
用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於EC肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於EC肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置
培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2
結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。
C. 水中糞大腸菌群的測定
化妝品檢測項目中糞大腸菌群的檢測流程：
10g/mL樣品+90mL滅菌生理鹽水 →10mL+10mL雙倍乳糖膽（含中和劑）培養基→糞大腸菌群 44.5℃，48h培養
註：在化妝品檢測項目中，如果樣品含有油脂性的成分，如精油，在樣品前處理中需加入液體石蠟、吐溫80、生理鹽水進行均質，使樣品能夠均勻分散開來。
糞大腸菌群又是一個什麼樣的微生物呢？下面我們來詳細介紹下：
大腸菌群：大腸菌群並非細菌學分類命名，而是衛生細菌領域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌，這些細菌在生化及血清學方面並非完全一致。
定義（GB2010）：在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。
糞大腸菌群：大腸菌群的一種，又稱耐熱大腸菌群，培養溫度：44.5±0.5℃，糞大腸菌群是化妝品檢測項目中必檢的微生物項目。
大腸埃希氏菌：（(Escherichia. coli )通常稱為大腸桿菌。根據不同的生物學特性將致病性大腸桿菌分為5類：
致病性大腸桿菌(EPEC)、
腸產毒性大腸桿菌(ETEC)、
腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、
腸出血性大腸桿菌(EHEC)、
腸黏附性大腸桿菌(EAEC)。
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水質微生物
一、水質微生物及指示菌
在各種水體，特別是污染水體中存在有大量的有機物質，適於各種微生物的生長，因此水體是僅次於土壤的第二種微生物天然培養基。水體中的微生物主要來源於土壤，以及人類的動物的排泄物及污染。水體中微生物的數量和種類受各種環境條件的制約。
一般認為，水中微生物以革蘭氏陰性桿菌佔有較大優勢。與其他水體相比，河水及溪水中革蘭氏陽性菌相對較多，這是因為陸地微生物沖洗污染的緣故。
水體中的致病性微生物一般並不是水中原有微生物，大部分是從外界環境污染而來，特別是人和其它溫血動物的糞便污染。水中常見的致病性細菌主要包括：志賀氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌、小腸結炎耶爾森氏菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌等。
在實際控制中，對水質衛生質量的評價和控制，是無法對各種可能存在的致病微生物一一進行檢測，而一般利用對指示菌的檢測和控制，來了解水體是否受到過人畜糞便的污染，是否有腸道病原微生物存在的可能，從而評價水的質量，以保證水質的衛生安全。
目前，世界各國一般認為大腸菌群是指示水質受糞便污染較好的指示菌。
我國水質控制也採用大腸菌群作為指示菌，GB5749-85《中華人民共和國國家標准 生活飲用水衛生標准》規定，生活飲用水中大腸菌群每升不得超過3個。
在某些情況下，水體中的細菌總數也可指示水體受糞便等污染物污染的情況。這里的細菌總數其實是指營養瓊脂培養後形成的菌落總數。目前世界各國對於控制飲用水的衛生質量，除採用大腸菌群等指標外，一般還採用細菌總數這個指標。我國GB5749-85《中華人民共和國國家標准 生活飲用水衛生標准》中規定生活飲用水細菌總數每毫升不得超過100個。
二、水質微生物檢驗方法
GB5750-85《中華人民共和國國家標准 生活飲用水標准檢驗法》提供了水質中細菌總數和總大腸菌群的檢測方法。
（一）細菌總數的檢測：
國家標准中，細菌總數是指1ml水樣在營養瓊脂培養基中，於37℃經24h培養後，所生長的細菌菌落的總數。
對生活飲用水，直接吸取1ml水樣於平皿中，加入營養瓊脂後混勻，37℃培養24h，進行計數。
對水源水，根據情況對樣品進行10倍梯度稀釋，選擇適宜稀釋液1ml，加註平皿，營養瓊脂混勻，37℃培養24h，進行計數。
按照規定格式報告每毫升水中細菌總數。
（二）總大腸菌群的檢測：
國家標准中，利用總大腸菌群作為糞便污染的指標。總大腸菌群是指一群需氧及兼性厭氧的，37℃生長時能使乳糖發酵，在24h內產酸產氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。水樣中總大腸菌群數的含量，表明水被糞便污染的程度，而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能。
國家標准提供了多管發酵法及濾膜法檢測總大腸菌群的方法。
多管發酵法檢測總大腸菌群，分為三步：初發酵試驗，平板分離，復發酵證實試驗。初發酵試驗，採用乳糖蛋白腖培養液37℃培養24h，觀察產酸產氣情況。對陽性管培養物，接種於品紅亞硫酸鈉培養基或伊紅美藍培養基，觀察菌落特徵，並進行革蘭氏染色和鏡檢。對典型和可疑菌落，接種於乳糖蛋白腖培養液，進行復發酵證實試驗，並根據標准所附檢數表報告結果。
其中，對生活飲用水，初發酵試驗接種水樣總量300ml，即100ml接種2管，10ml接種10管，採用兩個稀釋度，12支發酵管。對水源水，初發酵試驗接種水樣總量55.5ml，即10ml接種5管，1ml接種5管，0.1ml接種10管，共採用三個稀釋度，15支發酵管。兩種接種方法，所用的檢數表是不同的。
濾膜法檢測總大腸菌群，就是利用微孔濾膜，過濾一定量水樣，將水樣中含有的細菌截留在濾膜上，然後將濾膜帖放在選擇性培養基上（如品紅亞硫酸鈉培養基），經培養和證實試驗後，直接計數濾膜上生長的典型大腸菌群菌落，並計算出每升水樣中含有的總大腸菌群數。
三、說明：
1．菌落總數測定中，應選擇合適的稀釋度進行。生活飲用水，國家標准規定每毫升不得超過100個，因此可以直接吸取1毫升到平板進行培養。
2．培養時間。與食品中菌落計數不同，測定水中細菌總數，培養時間採用24h。
3．總大腸菌群的測定方法，由於飲用水和水源水可能的污染程度不同，因此採用不同的接種量，檢數表也不相同。
4．當接種量超過1毫升時，一般採用多倍濃度培養液。如配製3倍濃縮乳糖蛋白腖培養液50mL，加入100mL水樣後，總體積為150mL，培養液恢復到正常濃度。
5．濾膜法檢測總大腸菌群，一般在檢測較大量低濁度水樣時採用，大量水樣濾過濾膜後，水中所含有的所有細菌均截留在濾膜上。
E. 評價食品衛生質量的細菌污染指標及檢測方法
食品中的細菌(包括非致病菌、 條件致病菌和致病菌)，有些是造成食品腐敗變質的直接因素。因而常把污染食品的細菌總數、大腸菌群或大腸桿菌、腸球菌作為評價食品衛生質量的重要指標。
細菌總數，是指該食品上每個活菌細胞在培養基上生成肉眼可見的菌落。即菌落總數來表示。這種「細菌總數」實際上僅指活的雜菌，它可以作為食品污染的程度和新鮮度指標，是判斷食品衛生質量的一項重要依據。
大腸菌群或大腸桿菌:大腸菌群以大腸桿菌為主，包括產氣腸細菌和一些中間類型的細菌。大腸菌群來自人和溫血動物的腸道，一般無病原性。據估計，成人每日從糞便中排出的大腸菌群細菌多達每克糞便中含有1千萬≈1萬萬個。若水或食品中發現大腸菌群的細菌，則表示水或食品被人和溫血動物糞便所污染，而有糞便的污染就可能有腸道病原菌(傷寒桿菌、痢疾桿菌等)。因此大腸菌群或大腸桿菌可以作為腸道致病菌污染食品的指標菌。食品中大腸菌群的污染程度常用菌量表示。
腸球菌:腸球菌是鏈球菌屬中一群革蘭氏陽性球菌，呈長鏈狀或短鏈狀。與食品有關的鏈球菌，主要是糞鏈球菌和糞渣鏈球菌。腸球菌主要來源於糞便。過去和現在，大腸菌群或大腸桿菌長期以來作為糞便污染的指標細菌，廣泛應用於一-般食品的常規細菌檢驗。但是這類細菌是嗜溫菌，在低溫、冰凍狀態下容易死亡，這就降低了它應有的指標作用。將具有抵抗冰凍力的腸球菌作為指標細菌，用於冷凍食品的細菌檢驗，指標效果要優於大腸菌群，但檢驗方法要復雜得多食品衛生標准中，這三種不同的細菌指標，其衛生學意義不同，它們既有聯系，又有區別，應根據實際情況加以應用，以對食品衛生質量作出正確的判斷。
針對這一系列食品安全衛生標准檢控，冠宇儀器微生物致病菌檢測箱是我公司根據市場需求設計的一種專門針對微生物致病菌研製的檢測箱，箱內配有齊全的采樣工具、各類細菌類檢測速測盒（菌落總數測試片、大腸桿菌大腸菌群測試片、食品大腸菌群測試片、餐飲具大腸菌群檢測是紙片、黴菌、酵母菌測試片、沙門氏菌測試片、金黃色葡萄球菌測試片、大腸桿菌O157測試片、副溶血弧菌測試片、阪崎腸桿菌測試片、蠟樣芽胞桿菌測試片、水中大腸菌群檢測試劑盒等）、以及加厚鋁合金外框，堅固耐用滿足食品微生物采樣檢測需求。
F. 可以檢測水質污染程度的微生物是什麼
看你測什麼咯，大腸桿菌的數量是一個很重要的水質標准。（溶解氧及大腸桿菌是兩項可反映海水水質的重要參數。）
然後有人拿草履蟲測銅離子濃度，（銅離子多了也是很有害的。）
要知道水質污染生物監測一般包括：生物群落法、細菌學檢驗法、水生生物毒性測定等等，所以很多生物都用於測定，而且像細菌檢定是不看各個種類的細菌分別有多少的。
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水質污染生物監測
水環境中存在著大量的水生生物群落,各類水生生物之間及水生生物與其賴以生存的環境之間存在著互相依存又互相制約的密切關系.當水體受到污染而使水環境條件改變時,各種不同的水生生物由於對環境的要求和適應能力不同而產生不同的反應,因此可用水生生物來了解和判斷水體污染的類型,程度.
用水生生物來監測研究水體污染狀況的方法較多,如生物群落法,生產力測定法,殘毒測定法,急性毒性試驗,細菌學檢驗等.
2.6.1 生物群落法
(1)指示生物:生物群落中生活著各種水生生物,如浮游生物,著生生物,底棲動物,魚類和細菌等.由於它們的群落結構,種類和數量的變化能反映水質狀況,故稱之為指示生物.
(2) 監測方法
1.污水生物系統法
該方法將受有機物污染的河流按其污染程度和自凈過程劃分為幾個互相連續的污染帶,每一帶生存著各自獨特的生物(指示生物),據此評價水質狀況.
如根據河流的污染程度,通常將其分為四個污染帶,即多污帶,α-中污帶β-中污帶和寡污帶.各污染帶水體內存在著特有的生物種群.
2.生物指數法
是指運用數學公式反映生物種群或群落結構的變化,以評價環境質量的數值.
貝克生物指數(BI)= 2nA + nB BI=0時,屬嚴重污染區域,BI=1-6時,為中等有機物污染區域,BI=10-40時,為清潔水區.
2.6.2細菌學檢驗法
水的細菌學檢驗,特別是腸道細菌的檢驗,在衛生學上具有重要意義.實際工作中,常以檢驗細菌總數,特別是檢驗作為糞便污染的指示細菌,來間接判斷水的衛生學質量.
2.6.2.1 水樣的採集
:嚴格按無菌操作要求進行,防止在運輸過程中被污染,並應迅速進行檢驗.
2.6.2.2 細菌總數的測定
細菌總數是指1mL水樣在營養瓊脂培養基中,於37℃經24小時培養後,所生長的細菌菌落的總數.它是判斷飲用水,水源水,地表水等污染程度的標志.
其操作過程如下:1)滅菌 ;2)制備營養瓊脂培養基 ;3)培養(二份平行樣,一份空白) ;4)菌落計數.
2.6.2.3 總大腸菌群的測定
總大腸菌群是指那些能在35℃,48小時之內使乳糖發酵產酸,產氣,需氧及兼性厭氧的,革蘭氏陰性的無芽孢桿菌,以每升水樣中所含有的大腸菌群的數目來表示.
總大腸菌群的檢驗方法富有發酵法和濾膜法.發酵法可用於各種水樣(包括底泥),但操作繁瑣,費時間.濾膜法操作簡便,快速,但不適用於渾濁水樣.
2.6.2.4其他細菌的測定
2.7 底質監測
底質是沉積在水體底部的堆積物質的統稱,是礦物,岩石,土壤的自然侵蝕產物,是生物活動及降解有機質等過程的產物.一般不包括工廠廢水沉積物及廢水處理廠污泥.底質是水體的主要組成部分.
G. 腸道致病菌的分類及常用檢測方法
根據可培養細菌的數量分類在腸道菌群中，可以培養到的細菌有400餘種，依據其數量多少可以分為主要(優勢)菌群(predominantmicroflora)和次要菌群(sub—dominantmicroflora)。
①主要(優勢)菌群：指腸道菌群中數量大或種群密集度大的細菌，一般在10～10cfu/g以上，包括類桿菌屬、優桿菌屬、雙歧桿菌屬、瘤胃球菌屬和梭菌屬等專性厭氧菌，通常屬於原籍菌群。優勢菌群是對宿主發揮生理功能的菌群，在很大程度上影響著整個菌群的功能，決定著菌群對宿主的生理病理意義。
②次要菌群：數量在10～10cfu/g以下，主要為需氧菌或兼性厭氧菌，如大腸桿菌和鏈球菌等，流動性大，有潛在致病性，大部分屬於外籍菌群或過路菌群。
檢測方法：
1、采樣及稀釋
（1）按無菌操作法將檢樣25g（或25mL）放於含有225mL無菌水的三角瓶中（瓶內預置適當數量的玻璃珠）或滅菌乳缽內，經充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用無菌均質器，以8000～10000r/min的速度離心1min，做成1：10的稀釋液。
（2）用1mL滅菌吸管吸取1：10稀釋液1Ml，注入含有9mL無菌水的試管內，振搖混勻，做成1：100的稀釋液，換用1支lmL滅菌吸管，按上述操作依次作l0倍系列稀釋液。
（3）根據食品的衛生要求或對檢驗樣品污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種3管。也可直接用樣品接種。
2、乳糖初發酵試驗
即通常所說的假定試驗。其目的在於檢查樣品中有無發酵乳糖產生氣體的細菌。將待檢樣品接種於乳糖膽鹽發酵管內，接種量在1mL以上者，用雙倍乳糖膽鹽發酵管。
lmL及1mL以下者，用單倍乳糖膽鹽發酵管。每一個稀釋度接種3管，置36±1℃溫箱內，培養24±2h，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產氣者，則按下列程序進行。
3、分離培養
將產氣的發酵管分別劃線接種於伊紅美藍瓊脂平板，置36±1℃溫箱內培養18～24h，然後觀察菌落形態並作革蘭氏染色、鏡檢並作復發酵試驗。
4、乳糖復發酵試驗
即通常所說的證實試驗，其目的在於證明經乳糖初發酵試驗呈陽性反應的試管內分離到的革蘭陰性無芽胞桿菌，確能發酵乳糖產生氣體。
在上述選擇性EMB培養基上，挑取可疑的大腸菌群菌落1～2個進行革蘭染色，同時接種乳糖發酵管，置36±l℃溫箱內培養24±2小時，觀察產氣情況。
凡乳搪發酵管產氣，革蘭染色為陰性反應的無芽胞桿菌，即報告為大腸菌群陽性；凡乳糖發酵管不產氣或革蘭染色為陽性，則報告為大腸菌群陰性。
(7)水質腸道致病菌檢測方法擴展閱讀：
有益菌菌群的生理功能：
如果腸內有益菌菌群占優，腸內黏膜呈現粉紅色，表示腸內環境相當良好。
1、吸收水分，糞便較軟，較易排泄
在胃部分解消化的食物，經由小腸吸收營養後，成為粘稠狀物體送至大腸。然後再經過18小時將水分及礦物質吸收，就變成容易排泄的糞便。腸道內環境良好時，糞便的軟硬適中，排便會較為順利。
2、緩和的蠕動，能順利將糞便排出
藉由腸的蠕動，將糞便緩慢的推送至肛門。如果蠕動過快或太慢，都將影響糞便的構成，導致便秘或者腹瀉。而如果腸內干凈，則蠕動的速度就相當的有規律，糞便可順利排出。
3、有助維他命的合成
比菲德氏菌等好菌能維護肌膚的健康，並具有合成有助熱量產生的維他命B1、B2及B6等，以及與止血、骨骼形成有關的維他命K等之功用。健康的腸道，好菌會不斷繁殖，維他命的合成也可順利進行。
4、迅速排出有害物質
健康的腸道並非完全沒有壞菌的存在，有害物質多少會產生。當然還包括，吃進體內的食品化學添加物或是無法成為營養成分的物質。只要腸內環境良好，這些物質在開始危害身體前就被排出體外。
5、避免病原菌的侵害
比菲德氏菌等好菌可以刺激並提高身體的免疫機能，而且易引起食物中毒等病原菌因具怕酸特質，所以像是含有好菌的乳酸飲料或健康食品等，都可抑制病原菌在腸內繁殖。
腸道有益菌菌群除了以上功能之外，對人體還有營養作用，如糖尿病、高血壓、高血脂等。B族維生素和非必需氨基酸對人類的毛發具有重要的作用，當缺少這些營養元素，會導致頭發脫落或毛發發黃、發叉，容易折斷等現象。