㈠ 大腸桿菌檢測國家標准
法律分析：大腸菌數指數：指每立升中大腸菌群數，採用乳糖發酵法檢測。 中國衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群，瓶裝汽水和果汁中每100ml大腸菌群不能超過5個。
法律依據：《中華人民共和國食品安全法》 第四條 食品生產經營者對其生產經營食品的安全負責。食品生產經營者應當依照法律、法規和食品安全標准從事生產經營活動，保證食品安全，誠信自律，對社會和公眾負責，接受社會監督，承擔社會責任。
㈡ 乳品中大腸桿菌檢測國標GB/T4789.38-2008的具體步驟及達標的標准
第一法大腸桿菌MPN 計數
操作步驟
6.1、 樣品的稀釋
6.1.1、 固體和半固體樣品：以無菌操作取259 樣品，置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液的無菌均質杯內，8000r / min ～1000r/ min 均質1 min～2 min ，製成l:10 樣品勻液，或置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1 min～2 min 製成1:10 的樣品勻液。
6.1.2、 液體樣品：以無菌吸管吸取樣品25 mL 置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的玻璃珠）中，充分振搖，製成1:10 的樣品勻液。
6.1.3、 樣品勻液的pH 值應在6.5～7.5 之間，必要時分別用1mol/L 氫氧化鈉（NaOH）或1mol/L 鹽酸（HCI）調節。
6.1.4、 用1mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1mL ，沿管壁徐徐注人盛有9 mL 磷酸鹽緩沖液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1mL無菌吸管或吸頭反復吹打，使其棍合均勻，製成1:100 的樣品勻液。
6.1.5、 根據對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次製成10 倍遞增系列樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15 min 。
6.2、 初發酵試驗
每個樣品，選擇3 個適宜的連續稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液）。每個稀釋度接種3 管月桂基磺酸鹽胰蛋白陳（LST ）肉湯，每管接種1 mL（如接種量超過1 mL ，則用雙料LST 肉湯）。36℃±1℃ 培養24h±2h ，觀察小倒管內是否有氣泡產生，如未產氣則繼續培養至48h±2h 。記錄在24h～48h 內產氣的LST 肉湯管數。如所有LST 肉湯管均未產氣，即可報告大腸桿菌MPN 結果；如有產氣者，則進行復發酵試驗。
6.3、 復發酵試驗
用接種環分別從所有培養48h±2h 內發酵產氣的LST 肉湯管中取培養物1 環，移種於已提前預溫至45 ℃ 的EC 肉湯管中，放人帶蓋的44.5℃ ±2 ℃ 水浴箱內。水浴的水面應高於肉湯培養基液面，培養24h±2h ，檢查小倒管內是否有氣泡產生，如未產氣則繼續培養至48h ±2h 。記錄在24h 和48h 內產氣的EC 肉湯管數。如所有EC 肉湯管均未產氣，即可報告大腸桿菌MPN 結果；如有產氣者，則進行EMB 平板分離培養。
6.4、 伊紅美藍平板分離培養
輕輕振搖各產氣管，用接種環取培養物劃線分別接種於EMB 平板，36 ℃ ±1 ℃ 培養18h～24h 。檢驗平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。
6.5、 營養瓊脂斜面或平板培養
從每個平板上挑5 個典型菌落，如無典型菌落則挑取可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位，移種到營養瓊脂斜面或平板上，36 ℃ ±1 ℃ ，培養18h～24h 。取培養物進行革蘭氏染色和生化試驗。
6.6 、生化試驗
6.6.1、 靛基質試驗：將培養物接種蛋白陳水，36 ℃±1℃ 培養24h±2h 後，加Kovacs 靛基質試劑0.2 mL～0.3 mL ，上層出現紅色為靛基質陽性反應。
6.6.2 、MR -VP 試驗：將培養物接種MR -VP 培養基，36 ℃ ±1 ℃ 培養48h±2h 。移取培養物1mL至13 mm×100mm 試管中，加5 % α-蔡酚乙醇溶液0.6mL、40 ％氫氧化鉀溶液0.2mL 和少許肌酸結晶，振搖試管後靜置2h ，如出現伊紅色，為VP 試驗陽性。
將MR 一VP 培養液的剩餘部分再培養48h 後滴加5 滴甲基紅指示劑。培養物變紅色，為甲基紅試驗陽性，若變黃色則為陰性反應。
6.6.3、 檸檬酸鹽利用試驗：將培養物接種Koser 氏檸檬酸鹽肉湯，36℃±1 ℃ 培養96h±2h,記錄有無細菌生長。
6.7、 大腸桿菌MPN 計數的報告
大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽胞桿菌，發酵乳糖、產酸、產氣，IMViC 生化試驗為＋＋- -或-＋- -。只要有1 個菌落鑒定為大腸桿菌，其所代表的LST 肉湯管即為大腸桿菌陽性。依據LST 肉湯陽性管數查MPN 表，報告每克（或毫升）樣品中大腸桿菌MPN 值。
第二法大腸桿菌VRB - - MUG 平板計數法
8、樣品稀釋
按6.1 進行。
9、 檢驗
選取2 個～3 個適宜的連續稀釋度的樣品勻液，每個稀釋度分別取1 mL 注人兩個無菌平皿。另取1 mL 稀釋液注人一個無菌平皿中，作空白對照。將45 ℃±0.5 ℃ 的VRB 瓊脂10 mL～15 mL 傾注於每個平皿中。小心旋轉平皿，將培養基與樣品勻液充分混勻。待瓊脂凝固後，再加3 mL～4mL VRB-MUG 瓊脂覆蓋平板表層。凝固後翻轉平板，36 ℃±1 ℃ 培養18h～24h 。選擇菌落數為10～ 100 的平板，暗室中360 nm～366 nm 波長紫外燈照射下，計數平板上發淺藍色熒光的菌落。
檢驗時用已知MUG 陽性菌株（如大腸桿菌ATCC 25922 ）和產氣腸桿菌（如ATCC 13048 ）做陽性和陰性對照。
10、 大腸桿菌平板計數的報告
兩個平板上發熒光菌落數的平均數乘以稀釋倍數，報告每克（或毫升）樣品中大腸桿菌數，以CFU/g ( CFU /mL ）表示。
第三法大腸桿菌PetrifilmTM 測試片計數法
12、 樣品稀釋按6.1 進行。
13、 檢驗
13.1、 接種和培養
選取2 個～3 個適宜的連續稀釋度的樣品勻液，每個稀釋度接種兩張測試片。將測試片置於平坦實驗檯面，。揭開上層膜，用吸管吸取樣品勻液1ml勻液垂直滴加在測試片的中央，將上層膜緩慢蓋下，避免氣泡產生和上層膜直接落下，將壓板（平面底朝下）放置在上層膜中央處，輕輕地壓下，使樣品勻液均勻覆蓋於圓形的培養膜表面，切勿扭轉壓板。拿起壓板，靜置至少1 min 以使培養基凝固。將測試片的透明面朝上置於培養箱內，堆疊片數不超過20 片，36℃±1 ℃ 培養。肉、家禽和水產品，培養時間為24h±2h；其他食品，培養時間為48h±2h 。
13.2、 判讀
可肉眼觀察計數，或用菌落計數器、放大鏡、PetrifilmTM 自動判讀儀計數。藍色有氣泡的菌落確認為大腸桿菌，不論藍色的深淺，部分藍色的帶氣泡菌落也判定為大腸桿菌。圓形培養膜邊緣及邊緣以外的菌落不計數。當測試片出現大量氣泡、不明顯的小菌落，培養區呈藍色時，需要進一步稀釋樣品勻液，重新檢驗。 14 大腸桿菌測試片計數的報告
選擇菌落數在15～150 之間的稀釋度，兩張測試片菌落平均數乘以稀釋倍數，即為每克（或毫升）樣品中大腸桿菌數，以CFU/g ( CFU/mL ）表示。
如果所有稀釋度測試片上的菌落數都小於15 ，計數最低稀釋度測試片上的平均菌落數乘以稀釋倍數報告；如果所有稀釋度的測試片上均無菌落生長，以「小於1 乘以最低稀釋倍數」報告；如果所有稀釋度的菌落數都大於150 ，計數最高稀釋度測試片上的平均菌落數乘以稀釋倍數報告。計數菌落數大於150 個的測試片時，可計數一個或兩個具有代表性的方格內的菌落數，換算成單個方格內的菌落數後乘以20 ，即為測試片上估算的菌落數（圓形生長面積為20 cm " ）。
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細菌的分離鑒定
1、標本：
腸道
外感染取中段尿、血液、膿液、腦脊液等，腹瀉者取糞便。
2、分離培養與鑒定：糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液需先經肉湯增菌，再轉種血瓊脂平板。其他標本可同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。37℃孵育18～24小時後，觀察菌落並塗片染色鏡檢。採用一系列生化反應進行鑒定。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要時檢定腸黴毒素。
泌尿系統除確定大腸桿菌外，還應計數，每毫升尿含菌量≥100，000時，才有診斷價值。
衛生細菌學檢查
大腸桿菌不斷隨糞便排出體外，污染周圍環境和水源、食品等。取樣檢查時，樣品中大腸桿菌越多，表示樣品被糞便污染越嚴重，也表明樣品中存在腸道致病菌的可能性越大。故應對飲水、食品、飲料進行衛生細菌學檢查。
1、細菌總數：檢測每毫升或每克樣品中所含細菌數，採用傾注培養計算。中國規定的衛生標準是每毫升飲水中細菌總數不得超過100個。
2、大腸菌數指數：指每立升中大腸菌群數，採用乳糖發酵法檢測。中國的衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群；瓶裝汽水、果汁等每100ml大腸菌群不得超過5個。