科研檢測蛋白的方法

1. 蛋白質的檢測方法有哪些

1、凱氏定氮法

凱氏弊余乎定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨，隨水蒸氣蒸餾出來並為過量的硼酸液吸收，再以標准鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量。

由於蛋白質含氮量比較恆定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。

優點：可用於所有食品的蛋白質分析中；操作相對比較簡單；實驗費用較低；結果准確，是一種測定蛋白質的經典方法；用改進方法（微量凱氏定氮法）可測定樣品中微量的蛋白質。

缺點：凱氏定氮法只是一個氧化還原反應,把低價氮氧化並轉為氨鹽來測定,而不能把高價氮還原為氮鹽的形式,所以不可以測出物質中所有價態的氮含量。

2、雙縮脲法

雙縮脲法是一個用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個鹼性的含銅試液，呈藍色，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。

當底物中含有肽鍵時（多肽），試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋白質單位1-10mg。

優點：測定速度較快，干擾物質少，不同蛋白質產生的顏色深淺相近。

缺點：①靈敏度差； ② 三羥甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等會干擾該反應。

3、酚試劑法

取6支試管分別標號，前5支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，不加標准蛋白溶液，在室溫下放置30分鍾，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，於650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。

優點：靈敏度高，對水溶性蛋白質含量的測定很有效。

缺點：①費時，要精確控制操作時間；②酚法試劑的配製比較繁瑣。

4、紫外吸收法

大多數蛋白質在280nm波長處有特徵的最大吸收，這是由於蛋白質中租悉有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用於測定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白質溶液。

取9支試管分別標號，前8支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液，1號試管不加標准蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，而不加標准蛋白溶液，每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致，將液體混合均勻，在280nm波長處進行比色，記錄吸光度值。

優點：簡便、靈敏、快速，不消耗樣品，測定後能回收。 

缺點：①測定蛋白質含量的准確度較差，專一性差； ②干擾物質多，若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物質，會出現較大的干擾。

5、考馬斯亮藍法

考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250 定量結合。當考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合後，其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變為 595nm。

在考馬斯亮藍 G-250 過量且濃度恆定的情況下，當溶液中的蛋白質濃度不同時，就會有不同量的考馬斯亮藍 G-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉變成吸收峰為 595nm 的形式，而且這種轉變有一定的數量關系。

一般情況，當溶液中的蛋白質濃度增加時，顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加，因此可以用考馬斯亮藍 G-250 顯色法來測定溶液中蛋白質的含量。

優點：靈敏度高，測定快速、簡便，干擾物質少，不受酚類、游離氨基酸和緩沖劑、絡合劑的影響，適合大量樣品的測定。

缺點：由於各毀謹種蛋白質中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此用於不同蛋白質測定時有較大的偏差。

2. 蛋白質檢測方法

蛋白質檢測方法有凱氏定氮法、雙縮脲法、考馬斯亮藍法等。

1、凱氏定氮法

是一種模簡測定總氮含量的方法，可以在混合物或化合物中檢測。即在催化劑條件下，用濃硫酸消化標本，將標本中的裂早有機氮轉化為無機銨鹽，然後在鹼性環境下將無機銨鹽轉化為氨，用蒸汽蒸餾吸收硼酸溶液，然後用標准鹽酸滴定，計算氮含量。

2、雙縮脲法

是一種用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑呈藍色，是一種鹼性含銅測試溶液，它由幾滴1%硫酸銅，1%氫氧化鉀和酒石酸鉀鈉製成。

2、蛋白質能夠幫助人體所需的催化人體內化學反應的酶進行調節，構成重要的生理活性物質。蛋白質也是人體一些重要細胞的基本構成物質之一，補充蛋白質也能夠幫助受傷後的傷口癒合。日常適量補充蛋白質對機體有益，但不宜補充過量，以免加重腸胃和腎臟負擔，引起身體不適。

3. 一般採用什麼方法檢驗蛋白質即鑒定

一般用雙縮脲試劑鑒定，雙縮脲試劑可以和蛋白質發生紫色反應。

4. 鑒定蛋白質有哪些方法

蛋白質含量的測定：
1 凱氏定氮法
根據氮在蛋白質分子中含量恆定（平均佔16%），因此測定出樣品中氮的含量後，即可求出樣品中蛋白質含量。
2 雙縮脲法
3 福林-酚試劑法
福林-酚試劑包括兩種試劑：鹼性銅試劑，磷鉬酸及磷鎢酸的混合試劑。鹼性銅試劑與蛋白質產生雙縮脲反應。這種被作用的蛋白質中的酚基（酪氨酸），在鹼性條件下易將磷鉬酸和磷鎢酸還原成藍色的鉬藍和鎢藍，所生成藍色的深淺，與蛋白質的含量成正比。在650nm和660nm波長下測定光吸收值，即可測定蛋白質含量。
4 紫外吸收法
酪氨酸，色氨酸在280nm處左右具有最大吸收。由於在各種蛋白質中這幾種氨基酸含量差別不大，所以280nm的吸收值與濃度呈正相關。可用於蛋白質濃度的測定。

5. 鑒別蛋白質的方法有哪些

常見的蛋白質鑒定方法有：

一、最簡單的方法就是對所要鑒定的物體進行灼燒

二、使用化學葯劑進行化學反應來鑒定蛋白質

三、較為精準的方法是使用儀器進行蛋白質鑒定，如質譜儀等

在生物學研究中經常會遇到一些關於蛋白質鑒定的問題，如單一蛋白質或者簡單混合物的鑒定；對單一蛋白質的序列分析等。這一類蛋白質鑒定，在精密度上要求較高，所以幾乎都是採用質譜儀器，來對蛋白質進行精密鑒定。

質譜技術是鑒定蛋白質的其中一種平台技術。可用到的質譜儀有Thermo Fisher的Q Exactive質譜儀，LTQ Orbitrap Velos質譜儀，以及AB SCIEX的6500 Q TRAP質譜儀。所在鑒定機構的不同，在硬體品牌的使用上也會有不同。

蛋白質鑒定的流程一般分三大步：蛋白質提取、純化、鑒定。這個流程是一個將蛋白質層層「解剖」的過程，從中我們可以對蛋白分子量進行測定，蛋白膠點、膠條、IP樣品蛋白質進行鑒定，非變性質譜分析以及Pull-down靶蛋白質譜鑒定等，較為細致的去分析蛋白質中的各種物質、性質等。

6. 蛋白質含量的測定方法有哪些

蛋白質含量測定的方法有微量凱氏定氮法、雙縮脲法、folin―酚試劑法、考馬斯亮蘭法、紫外吸收法等。

1、微量凱氏定氮法：含氮有機物即分解產生氨（消化），氨又與硫酸作用，變成硫酸銨。經強鹼鹼化使之分解放出氨，借蒸汽將氨蒸至酸液中，根據此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。

2、雙縮脲法：雙縮脲是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物。在強鹼性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。

3、folin―酚試劑法：這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法，由於其試劑乙的配製較為困難，近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。

4、考馬斯亮蘭法：1976年由bradford建立的考馬斯亮蘭法，是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的。這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質測定法。

5、紫外吸收法：蛋白質分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵，使蛋白質具有吸收紫外光的性質。吸收高峰在280nm處，其吸光度（即光密度值）與蛋白質含量成正比。

7. 蛋白質的測定方法

測定蛋白質含量的方法有凱氏定氮法、雙縮脲法、考馬斯亮藍法等。

2、雙縮脲法：是一種用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑呈藍色，是一種鹼性含銅測試溶液，它由幾滴1%硫酸銅，1%氫氧化鉀和燃握敬酒石酸鉀鈉製成。

3、考馬斯亮藍法：基本原理是基於蛋白質可以與考馬斯亮藍G-250定量結合。