mtt檢測方法

Ⅰ 蛋白葯物生物學活性檢測方法有哪些

一、MTT比色法檢測細胞活性
（一）原理
活細胞內線粒體琥珀酸脫氫酶能催化無色的MTT形成藍色的甲肷，其形成的量與活細胞數和功能狀態呈正相關。對細胞活力有影響的表達蛋白活性檢測可以通過MTT比色法進行。
（二）試劑准備
1、青鏈黴素溶液（100X）：青黴素100萬U，鏈黴素100萬U，溶於100mlddH2O中,抽濾除菌。
2、L15基礎培養基：1000mlL15培養基，加2g碳酸氫鈉，10ml 100X青鏈黴素，5mlHEPES。
3、MTT液：5mg/ml溶於L15基礎培養基。
4、SDS處理液：20gSDS，50μl二甲基甲醯胺，加雙蒸水50ml溶解。
5、L-多聚賴氨酸：50μg溶於1ml雙蒸水中。
6、L15基礎培養基溶解的不同濃度的蛋白液。
（三）操作步驟（以背根神經節細胞培養為例）
1、無菌條件下取新生一天的SD大鼠背根神經節（DRG）。
2、鏡下去除神經根和外膜，放入1ml 0.1%膠原酶中37℃消化30min，每5min搖勻一次。
3、洗去膠原酶，吹打分散後，接種於預先塗有L-多聚賴氨酸的96孔培養板中，每孔含100μl無血清L15培養基，細胞約800個。
4、實驗組分別加入純化的表達蛋白（分別以不同的蛋白濃度），陰性對照加入等體積表達蛋白的溶劑。
5、37℃ 5%CO2培養48hr後，每孔加入10μl MTT，37℃ 5%CO2孵育4hr。
6、加入100μl 20%的SDS處理液，37℃孵育20hr。
7、用EL×800微孔酶標儀測定OD570值，數據分析。

Ⅱ mtt法和cck法是否適用於所有細胞進行細胞活性的檢測

是。檢測細胞存活和生長的方法。

MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢（Formazan）並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞碸（DMSO）能溶解細胞中的甲臢，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。

CCK-8法：是MTT的改善，過程簡略，中心不需求吸出孔內的培育基，這么就減小了差錯，別的CCK-8反響時間也短，最短1個小時就夠了，特別適合做急性效果。還有CCK-8對細胞成長沒有影響，測完細胞活性後，去掉含CCK-8的培育基，用新鮮培育基能夠持續培育，並且還能夠持續做其它目標的檢查。MTT就不能。

(2)mtt檢測方法擴展閱讀

國產分裝的CCK-8試劑盒在質量穩定性上有不足。而原產於國內實驗室的CCK-8試劑盒有些具有較好的檢測結果，在批次之間的穩定性上較難控制。至於原裝進口供應CCK-8試劑盒的進口品牌並不多，就連Abcam、Thermo，Sigma等等幾個品牌都不能夠提供CCK-8試劑盒，而其它品牌在性價比上遠遜於Abbkine產品。

作為Abbkine品牌旗下首款細胞分析旗艦產品，Cell Counting Kit (CCK-8)，Abbkine研發工程師為其傾注了大量的投入，不斷摸索優化最佳的配方，每一份努力只為讓科研工作者更加簡單，高效，穩定地獲取珍貴的科研數據。

Ⅲ 細胞能量代謝分析系統檢測效果怎樣

主要有四種檢測，效果都挺好的，方法步驟如下

一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）滲入法
胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的鹼基，也是DNA合成的必需物質。用同位素3H標記TdR即3H-TdR作為DNA合成的前體能摻入DAN合成代謝過程，通過測定細胞的放射性強度，可以反映細胞DAN的代謝及細胞增殖情況。但是具有放射性。
二、MTT檢測法
MTT檢測法主要反映細胞的能量代謝，是檢測細胞增殖活力的一種簡便准確的方法，其原理是在活細胞生長和增殖過程中，線粒體內的脫氫酶可將黃色的MTT分解成蘭紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少與細胞的數量和細胞的活力成正比
三、羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（CFSE）檢測法
羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（CFSE）是一種可穿透細胞膜的熒光染料，具有與細胞特異性結合的琥珀醯亞胺脂基團和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團，使C E成為一種良好的細胞標記物。CFSE進入細胞後可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上。當細胞分裂時，CFsE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半。這樣，在一個增殖的細胞群中，各連續代細胞的熒光強度呈對遞減，利用流式細胞儀在488nm激發光和熒光檢測通道可對其進行分析。
四、Br檢測法
Br中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷，為胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細胞培養加入，而後利用抗Br單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。