細胞因子風暴的檢測方法

Ⅰ 細胞內細胞因子的流式細胞怎樣檢測

胞內流式分析法是用抗細胞因子抗體與細胞表面或胞內特定亞群標志組合，即可檢測不同細胞亞群細胞因子的分泌，同時採用特殊的化學與抗體選擇，確保靜止與無細胞因子分泌細胞的最小熒光背景。具有其它方法難以比擬的優點： 快速：流式定量檢測細胞內細胞因子可在一天內完成，實驗流程需6-8小時，實際操作時間為1-2小時，快速簡便; 簡便：無需組織培養，可以全血分析，無需分離PBMCs; 靈敏度高：高度靈敏的熒游標記與檢測系統; 高效：可以在同一個細胞內同時檢測兩種或更多種細胞因子，也可根據細胞免疫表型區分分泌細胞因子的細胞的亞型，進行多參數相關分析; 安全：減少樣本處理與生物源性污染 接近生物體的分析條件：全血檢測保留細胞及生化微環境更准確反映了體內狀況。 生物幫上面有這方面的詳細內容，SDS提取法 http://www.bio1000.com/experiment/hesuan/241857.html

Ⅱ Th細胞的Th細胞胞外細胞檢測

胞外細胞因子的檢測：主要檢測血漿（血清）和其他本液中的細胞因子，血漿（血清）中細胞因子的測定。可確切反應細胞因子的表達狀態，某些體液標本如腦脊液、滑膜組織液、支氣管灌洗液、胸腹水等與特定疾病直接相關。 流式細胞術（flow cytometery，FCM）其基本原理是：用刺激劑PMA、ionomycin（離子黴素）體外激活淋巴細胞，用蛋白轉運抑制如黃能黴素（monensin）阻止細胞因子分泌到細胞外，細胞內蛋白質轉運方式被打亂，引起細胞因子向高爾基體積聚，用流式細胞儀便可測出增強細胞因子。這一技術的發展使得以往通過T細胞克隆方式在幾個月才能回答的問題，在幾個小時內就能得以解決。該技術成為單細胞水平上檢測細胞因子產生的標准分析方法，盡管細胞因子標記流式細胞技術具有其他方法無可比擬的優越性，但是在操作過程中，需要對細胞進行刺激、阻斷、固定、穿透和標記，任何一個環節都會影響實驗結果[8]。流式細胞儀法常用檢測指標為以CD4設門進行FCM分析。通過CD4+ 細胞中IFN-γ和IL-4的表達來確定TH1/ TH2細胞的百分率[9-10]。以CD3/CD8設門，用FCM檢測分析TH1/ TH2細胞的表達率，結果准確可靠，操作方便快捷，是檢測TH1/ TH2細胞較理想的方法[11-12]。近年來發現CD4+T細胞向不同的方向極化，細胞表面表達不同趨化因子受體（chemokine receptor），趨化因子受體CCR5主要表達於TH1細胞表面，是TH1細胞的特異性標記[14]，因此，利用針對趨化因子受體的特異性單克隆抗體來測定TH不同亞群特異笥較高，而且操作較簡單。CCR5和CCR3抗體是最近開發出來的，但只能反映TH細胞數量上的變化，其與功能（細胞因子分泌）的變化不否一致，有待進一步的研究。

Ⅲ 如何檢測組織中炎症細胞因子

檢測細胞因子的方法主要有生物學檢測法、免疫學檢測法和分子生物學檢測法。
1、生物學檢測法
2、免疫學檢測法
3、分子生物學方法

Ⅳ 測細胞因子含量常用的 elisa 方法為

有一個朋友來找我咨詢用流式檢測細胞因子的問題，他之前用ELISA 檢測細胞因子的話，發現樣本量需求很多，然而有些樣本量又比較少怎麼辦呢，那麼接下來我來對比幾種檢測細胞因子的優缺點，供各位大大們閱讀參考啦~

細胞因子（cytokine，CK）：是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經刺激而合成（一般是免疫細胞）、分泌的一類生物活性物質分泌的蛋白質，在體內廣泛參與免疫調節及炎症反應、組織修復、刺激造血系統、刺激細胞的增殖與凋亡等重要生理活動，在抵抗外來病原及維持機體內環境平衡中均起重要作用。

細胞因子的作用方式：自分泌作用、旁分泌作用、內分泌作用。

細胞因子的作用特點：多效性、重疊性、協同性、拮抗性和雙重性。

根據產生細胞因子的細胞種類不同分類：白細胞介素（interleukin, IL)、干擾素（interferon, IFN)、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF)、轉化生長因子-β家族（transforming growth factor-β family, TGF-β family)、集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF)、趨化因子（chemokinefamily)、生長因子（growth factor,GF）等。

細胞因子的檢測方法一般分為生物學、分子生物學測定法及免疫學（重點介紹）

1、生物學測定法 其原理是根據細胞因子對特定的依賴性細胞株(即靶細胞)的促增殖作用,以增殖細胞中的DNA的合成或酶活性為指標,間接推算出細胞因子的活性單位,如對IL-1、IL-2等細胞因子活性的檢測。亦可根據某些細胞因子對特定靶細胞的殺傷效應或對病毒的抑製作用進行測定,如對腫瘤壞死因子及干擾素的生物活性測定。

2、分子生物學測定法 目前採用的技術有各種印跡法、斑點雜交、原位雜交和PCR等。通過檢測細胞內細胞因子的基因組成或mRNA量,推算出細胞因子的合成量。

3、免疫學檢測法 其基本原理是將細胞因子作為抗原進行定量檢測。如免疫斑點法、ELISA法、免疫印跡法和流式細胞儀等均已用於細胞因子的檢測。

細胞因子的檢測方法對比

1、酶聯免疫吸附實驗（ELISA）

原理：使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由於酶的催化頻率很高，故可放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。

優點：避免特異性抗體直接標記，便宜。

缺點：所需樣本量多、每次僅能測定一項細胞因子、操作步驟和測定時間過長、酶聯反應所致的人工假象

2、流式細胞儀（CBA）

原理：利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，並利用流式細胞儀檢測類似「三明治」的顆粒——待測物復合體所散發的熒光，從而測定待測物的數量。

優點：所需樣本量少、快速（實驗6-8h可以完成）操作簡便、靈敏度高、重復性好、高效（同一個樣品可以同時檢測多個因子）、安全、接近生物體的分析條件（全血檢測保留細胞及生化微環境更准確反應了體內狀況）。