⑴ 游泳池水中大腸菌群檢驗方法
詳細見SN0169-92,裡面對水的大腸菌群的檢測方法有嚴格的規定。中華人民共和國進出口商品檢驗行業標准
出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群 SN 0169—92
和大腸桿菌檢驗方法 代替 ZB X09 002一88
Method for examination of coliform, fecal coliform
and escherichia coli in food for export
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1 主題內容與適用范圍
本標准規定了出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌的檢驗方法。
本標准適用於出口食品的檢驗。
2 設備和材料
2.1 吸管: 1mL,具0.1mL刻度；5mL和10mL,具1mL刻度。
2.2 水浴箱：44.5±0.5℃。
2.3 培養箱：36±1℃,44.5±0.5℃。
2.4 冰箱: 0～5℃和-15～-20℃。
2.5 均質器。
2.6 乳缽和研棒。
2.7 平皿：直徑90mm。
2.8 天平：感量0.1g。
2.9 顯微鏡。
2.10 稀釋瓶：100mL、200mL和500mL三角燒瓶及廣口瓶。
2.11 玻璃珠：直徑約5mm。
2.12 菌落計數器。
3 培養基及試劑
3.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白(月示)(LST)肉湯。
3.2 煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯。
3.3 EC 肉湯。
3.4 伊紅美藍瓊脂(EMB)。
3.5 營養瓊脂斜面。
3.6 色氨酸肉湯。
3.7 MR-VP培養基。
3.8 Korser氏枸椽酸鹽肉湯。
3.9 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)。
3.10 Butterfield 氏磷酸鹽緩沖稀釋液。
3.11 生理鹽水。
3.12 革蘭氏染色液。
3.13 Kovacs氏靛基質試劑。
3.14 甲基紅指示劑。
3.15 Voges-pros kauer(V-P)試劑。
4 樣品制備
4.1 以無菌操作取有代表性的樣品。如有包裝則用75％乙醇在開口處擦拭後取樣。若不能
及時檢驗,應將冷凍樣品置於-15℃保存；非冷凍而易腐的食品,應置於4℃冰箱保存。檢
驗前冷凍樣品可於2～5℃ 18h內解凍,或在45℃以下15min內解凍。
4.2 不同食品樣品勻液的制備
4.2.1 液體食品
以滅菌吸管取樣25mL放入裝有225mL稀釋劑的滅菌玻璃瓶(瓶內預置適當數量的玻璃珠),
以30cm幅度、於7s內振搖25次(或以機械振盪器振搖),製成1:10的樣品勻液。
4.2.2 固體和半固體食品
以無菌操作取25 g樣品,放入裝有225 mL稀釋劑的滅菌均質杯內,於8000 r/min均質
1～2min,製成1:10樣品勻液(也可用滅菌乳缽研磨的方法代替)。
4.3 稀釋樣品勻液根據對樣品污染情況的估計,用稀釋劑將樣品勻液製成一系列十倍遞
增的樣品稀釋液,如10**-2、10**-3、10**-4……。從制備樣品勻液至稀釋完畢,全過程
不得超過15min。
5 大腸菌群的測定
5.1 大腸菌群MPN值的測定
5.1.1 對每個樣品,選擇適宜的三個連續稀釋度的樣品稀釋液。每個稀釋度接種三管月
桂基硫酸鹽胰蛋白(月示)(LST)肉湯,每管接種1mL。
5.1.2 將接種管置於36±1℃培養48±2h。
5.1.3 觀察試管的產氣情況：檢查倒管內是否有氣泡產生,記錄在24h和48h內產氣的LST
肉湯管數。如所有LST肉湯管均未產氣,則可報告為大腸菌群陰性；如有產氣者,則進一
步作證實試驗。
5.2 大腸菌群的證實試驗
5.2.1 將所有產氣管用直徑為3mm的接種環移種到煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中。
5.2.2 置BGLB肉湯管於36±1℃培養48±2h。
5.2.3 記錄所有BGLB肉湯管的產氣管數。
5.2.4 結果報告：按BGLB肉湯產氣管數,查MPN表[見附錄B (補充件)]報告每克(毫升)樣
品中大腸菌群的MPN值。
6 糞大腸菌群測定
6.1 用直徑為3mm的接種環將所有48±2h內產氣的LST肉湯管培養物移種於EC肉湯管中。
6.2 將所有接種的EC肉湯管在30min內放入帶蓋44.5±0.5℃水浴箱內,培養24±2h。水
浴箱的水平面應高於肉湯培養基液面。應以已知為44.5℃產氣陽性的大腸桿菌和44.5℃不
產氣的產氣腸桿菌或其他大腸菌群細菌作陽性和陰性對照。
6.3 記錄EC肉湯管的產氣情況。產氣管為糞大腸菌群試驗陽性；不產氣管為糞大腸菌群
試驗陰性。
6.4 結果報告：按產氣管數,查MPN表報告每克(毫升)樣品中糞大腸菌群的MPN值。
7 大腸桿菌測定
7.1 將6.3條中的EC肉湯管繼續培養24h,取其產氣管的培養物劃線接種於伊紅美藍(EMB)
平板,36±1℃培養24±2h。
7.2 檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。
7.3 如有典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個典型菌落；如無典型菌落,則從每個平
板上至少挑取2個可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位,移種到營養瓊脂斜面上,36±1℃
培養18～24h。
7.4 將斜面培養物移種到下列培養基中進行生化試驗。
7.4.1 色氨酸肉湯：在36±1℃培養24±2h後,加Kovacs氏試劑0.2～0.3mL,上層出現紅
色為靛基質陽性反應。
7.4.2 MR-VP培養基：在36±1℃培養48±2h。以無菌操作移取培養物1 mL至13mm×100mm
試管中,加5％α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氫氧化鉀溶液0.2mL和少許肌酸結晶,振搖試
管後靜置2h,如出現伊紅色,為VP試驗陽性。
將MR-VP培養物的剩餘部分再培養48h滴加5 滴甲基紅溶液。如培養物變紅色,為甲基
紅試驗陽性,若變黃色則為陰性反應。
7.4.3 Koser氏枸椽酸鹽肉湯：於36±1℃培養96h記錄有無生長。
7.4.4 LST肉湯：於36±1℃培養48±2h,觀察試管中是否產氣。
7.4.5 革蘭氏染色：取18h營養瓊脂斜面培養物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。
7.4.6 大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下：
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靛 基 質┃ MR ┃ VP ┃ 枸椽酸鹽 ┃ 鑒定(型別)
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
＋ ┃ ＋ ┃ － ┃ － ┃典型大腸桿菌
－ ┃ ＋ ┃ － ┃ － ┃非典型大腸桿菌
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
＋ ┃ ＋ ┃ － ┃ ＋ ┃典型中間型
－ ┃ ＋ ┃ － ┃ ＋ ┃非典型中間型
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
－ ┃ － ┃ ＋ ┃ ＋ ┃典型產氣腸桿菌
＋ ┃ － ┃ ＋ ┃ ＋ ┃非典型產氣腸桿菌
━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━━━
如出現上表以外的生化反應類型,表明培養物可能不純,應重新劃線分離,必要時做
重復試驗。
7.5 結果報告：大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,發酵乳糖產酸產氣,IMViC試驗為＋＋
－－或－＋－－,再根據LST肉湯陽性管數查MPN表,報告每克(毫升)樣品中大腸桿菌MPN
值。
8 大腸菌群固體培養基測定法
8.1 樣品制備同第4章。
8.2 計數
8.2.1 選取適宜的三個連續稀釋度的樣品液,每個稀釋度接種兩個滅菌平皿,每皿1mL。
另取1mL稀釋劑加入一個滅菌平皿中,作空白對照。
8.2.2 將冷至45±0.5℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)10～15mL傾注於每個平皿中。小
心旋轉平皿,將培養基與樣液充分混勻。
8.2.3 待瓊脂凝固後,再加3～4mL VRBA覆蓋平板表層。
8.2.4 翻轉平板,置於36±1℃培養18～24h。
8.2.5 選用有30～150個菌落的平板,計數平板上出現的典型大腸菌群菌落。典型菌落為
紫紅色,菌落周圍有紅色的膽鹽沉澱環。菌落直徑為0.5mm或更大。
8.2.6 證實
8.2.6.1 從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落,移種於BGLB肉湯管內, 36±
1℃培養24h和48h,觀察產氣情況。
8.2.6.2 將出現產氣的肉湯管判為大腸菌群陽性。對形成菌膜的陽性管,應進行革蘭氏
染色,以便排除革蘭氏陽性桿菌。
8.2.7 結果報告
經最後證實為陽性(產氣,革蘭氏陰性桿菌) 的試管百分比乘以於8.2.5條中計數的平
板菌落數,再乘以稀釋倍數,即為每克(毫升)樣品中大腸菌群數。
例：10**-4樣品稀釋液1mL,在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落,挑取其中10個接
種BGLB肉湯管,證實有6個陽性管,則該樣品的大腸菌群數為：
100×6/10×10**4/g(mL)＝6.0×10**5/g(mL)
附 錄 A
培養基和試劑
(補充件)
A1 月桂基硫酸鹽胰蛋白(月示)(LST)肉湯
胰蛋白(月示)或胰酪腖(Trypticase) 20g
氯化鈉 5.0g
乳糖 5.0g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 2.75g
磷酸二氫鉀(KH2PO4) 2.75g
月桂基硫酸鈉 0.1g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分溶解於蒸餾水中。分裝到有倒立發酵管的20mm×150mm試管中,每管10mL。
121℃高壓滅菌15min。最終pH6.8±0.2。
A2 煌綠乳糖膽鹽(BGAB)肉湯
蛋白腖 10.0g
乳糖 10.0g
牛膽粉(oxgall或oxbile)溶液 200.0mL
0.1％煌綠水溶液 13.3mL
蒸餾水
將蛋白腖乳糖溶於約500mL蒸餾水中,加入牛膽粉溶液200mL(將20.0g脫水牛膽粉溶於
200 mL蒸餾水中,pH7.0～7.5),用蒸餾水稀釋到975mL,調pH7.4。再加入0.1％煌綠水溶
液13.3mL,用蒸餾水補足到1000mL,用棉花過濾後,分裝到20mm×150mm試管(管內有倒立
的小發酵管)中,每管10mL。121℃高壓滅菌15min。最終pH7.2±0.1。
A3 EC肉湯
胰蛋白(月示)或胰酪(月示) 20.0g
3號膽鹽或混合膽鹽 1.5g
乳糖 5.0g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 4.0g
磷酸二氫鉀(KH2PO4) 1.5g
氯化鈉 5.0g
蒸餾水 1000.0mL
將以上成分溶解於蒸餾水中,分裝16mm×150mm試管(管內有倒立的小發酵管),每管
8mL。121℃高壓滅菌15min,最終pH6.9±0.1。
A4 伊紅美藍瓊脂(EMB)
蛋白腖 10.0g
乳糖 10.0g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 2.0g
瓊脂 15.0g
伊紅γ(水溶性) 0.4g或2％水溶液20mL
美藍 0.065g或0.5％水溶液13mL
蒸餾水 1000.0mL
在1000mL蒸餾水中煮沸溶解蛋白腖、磷酸鹽和瓊脂,加水補足至原量。分裝於三角燒
瓶中。每瓶100mL或200mL,高壓滅菌15min。最終pH7.1±0.2。使用前將瓊脂融化,於每
100mL瓊脂中加5mL滅菌的20％乳糖水溶液、2mL的2％伊紅γ水溶液和1.3mL0.5％的美藍水
溶液,搖勻,冷至45～50℃傾注平皿。
A5 營養瓊脂斜面
牛肉膏 3.0g
蛋白腖 5.0g
瓊脂 15.0g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分加於蒸餾水中,煮沸溶解。分裝合適的試管。121℃高壓滅菌15min。最終
pH7.3±0.1。滅菌後擺成斜面備用。
A6 色氨酸肉湯
胰腖或胰酪腖 10.0g
蒸餾水 1000.0mL
加熱攪拌溶解胰腖或胰酪腖於蒸餾水中。分裝試管,每管5mL。121℃高壓滅菌15min。
最終pH6.9±0.2。
A7 MR-VP培養基
(月示)腖 7.0g
葡萄糖 5.0g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 5.0g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分溶於蒸餾水中,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,最終pH6.9±0.2。
A8 Koser氏枸椽酸鹽肉湯
磷酸氫銨鈉(NaNH4HPO4·4H2O) 1.5g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 1.0g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.2g
枸椽酸鈉(含2H2O) 3.0g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分溶解於蒸餾水中,分裝試管,每管10 mL,121℃高壓滅菌15min。最終pH6.7
±0.2。
A9 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)
蛋白腖 7.0g
酵母膏 3.0g
乳糖 10.0g
氯化鈉 5.0g
膽鹽或3號膽鹽 1.5g
中性紅 0.03g
結晶紫 0.002g
瓊脂 15～18g
蒸餾水 1000.0mL
將上述成分溶於蒸餾水中,靜置幾分鍾,充分攪拌,調至pH7.4±0.1。煮沸2min,將
培養基冷至45～50℃傾注平板。臨用時制備,不得超過3h。
A10 Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液
貯存液
磷酸二氫鉀(KH2PO4) 34.0g
蒸餾水 500mL
將磷酸二氫鉀溶於蒸餾水中,用1 mol/L氫氧化鈉約175 mL調至pH7.2。用蒸餾水加至
1000mL貯存於冰箱。
稀釋液
取貯存液1.25mL, 用蒸餾水稀釋至1000mL,分裝於合適容器後,121℃高壓滅菌15min。
A11 生理鹽水
氯化鈉 8.5g
蒸餾水 1000.0mL
將氯化鈉溶於蒸餾水中,121℃高壓滅菌15min。
A12 革蘭氏染色液
結晶紫染色液：
結晶紫 1.0g
95％乙醇 20.0mL
1％草酸銨水溶液 80.0mL
將結晶紫完全溶解於乙醇中,然後與草酸銨溶液混合。
革蘭氏碘液：
碘 1.0g
碘化鉀 2.0g
蒸餾水 300.0mL
將碘與碘化鉀先行混合,加入蒸餾水少許充分振搖,待完全溶解後,再加蒸餾水至
300mL。
沙黃復染液：
沙黃 0.25g
95％乙醇 10.0mL
蒸餾水 90.0mL
將沙黃溶解於乙醇中,然後用蒸餾水稀釋。
染色法
a. 將塗片在火焰上固定,滴加結晶紫染液,染1min,水洗。
b. 滴加革蘭氏碘液,作用1min,水洗。
c. 滴加95％乙醇脫色約15～30s,直至染色液被洗掉,不要過分脫色,水洗。
d. 滴加復染液,復染1min,水洗、待干、鏡檢。
結果：革蘭氏陽性菌呈紫色,革蘭氏陰性菌呈紅色。
A13 Kovacs氏靛基質試劑
對二甲氨基苯甲醛 5.0g
戊醇 75.0mL
鹽酸(濃) 25.0mL
將對二甲氨基苯甲醛溶於戊醇中,然後慢慢加入濃鹽酸即可。
A14 甲基紅指示劑
甲基紅 0.1g
95％乙醇 300mL
將甲基紅溶解於300mL乙醇中,加水稀釋至500mL。
A15 Voges-Pros kauer(V-P)試劑
甲液
α-萘酚 5.0g
無水乙醇 100.0mL
乙液
氫氧化鉀 40.0g
用蒸餾水加至 100.0mL
附 錄 B
1g檢樣中最近似值(MPN)表
(補充件)
使用三管法,接種量分別為0.1,0.01和0.001g。
━━━━━━━━━┳━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━
陽 性 管 數 ┃ ┃ 陽 性 管 數 ┃
━━━━━━━━━┫ MPN ┣━━━━━━━━━━┫ MPN
0.1 0.01 0.001 ┃ ｜ 0.1 0.01 0.001 ┃
━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━
0 0 0 ┃ ＜3 ┃ 2 0 0 ┃ 9.1
0 0 1 ┃ 3 ┃ 2 0 1 ┃ 14
0 0 2 ┃ 6 ┃ 2 0 2 ┃ 20
0 0 3 ┃ 9 ┃ 2 0 3 ┃ 26
0 1 0 ┃ 3 ┃ 2 1 0 ┃ 15
0 1 1 ┃ 6.1 ┃ 2 1 1 ┃ 20
0 1 2 ┃ 9.2 ┃ 2 1 2 ┃ 27
0 1 3 ┃ 12 ┃ 2 1 3 ┃ 34
0 2 0 ┃ 6.2 ┃ 2 2 0 ┃ 21
0 2 1 ┃ 9.3 ┃ 2 2 1 ┃ 28
0 2 2 ┃ 12 ┃ 2 2 2 ┃ 35
0 2 3 ┃ 16 ┃ 2 2 3 ┃ 42
0 3 0 ┃ 9.4 ┃ 2 3 0 ┃ 29
0 3 1 ┃ 13 ┃ 2 3 1 ┃ 36
0 3 2 ┃ 16 ┃ 2 3 2 ┃ 44
0 3 3 ┃ 19 ┃ 2 3 3 ┃ 53
━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━
1 0 0 ┃ 3.6 ┃ 3 0 0 ┃ 23
1 0 1 ┃ 7.2 ┃ 3 0 1 ┃ 39
1 0 2 ┃ 11 ┃ 3 0 2 ┃ 64
1 0 3 ┃ 15 ┃ 3 0 3 ┃ 95
1 1 0 ┃ 7.3 ┃ 3 1 0 ┃ 43
1 1 1 ┃ 11 ┃ 3 1 1 ┃ 75
1 1 2 ┃ 15 ┃ 3 1 2 ┃ 120
1 1 3 ┃ 19 ┃ 3 1 3 ┃ 160
1 2 0 ┃ 11 ┃ 3 2 0 ┃ 93
1 2 1 ┃ 15 ┃ 3 2 1 ┃ 150
1 2 2 ┃ 20 ┃ 3 2 2 ┃ 210
1 2 3 ┃ 24 ┃ 3 2 3 ┃ 290
1 3 0 ┃ 16 ┃ 3 3 0 ┃ 240
1 3 1 ┃ 20 ┃ 3 3 1 ┃ 460
1 3 2 ┃ 24 ┃ 3 3 2 ┃ 1100
1 3 3 ┃ 29 ┃ 3 3 3 ┃＞1100
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注: ①本表採用3個稀釋度 [0.1g(mL)、0.01g(mL)和0.001g(mL)],每個稀釋度接種3管。
②表內所列檢樣量如改用1g(mL)、0.1g(mL)和0.01g(mL)時,表內數字應相應降低10
倍；如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)和0.0001g(mL)時,則表內數字應相應增加10倍,其餘
類推。
━━━━━━━━━━━
附加說明：
本標准由中華人民共和國國家進出口商品檢驗局提出。
本標准由中華人民共和國秦皇島進出口商品檢驗局、安徽進出口商品檢驗局、山西進
出口商品檢驗局負責起草。
本標准主要起草人李桂生、湯鵬飛、於桂華。
本標准主要參考美國公職分析化學家協會(AOAC)法定分析方法第14版第46章(1984年)。
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中華人民共和國國家進出口商品檢驗局1992-12-28批准 1993-05-01實施
⑵ 碳酸飲料的大腸菌群怎麼檢測 操作過程 需要哪些材料 一定要全面
進入無菌室步驟
1．
進入無菌室前應打開紫光燈進行滅菌，時間為0。5—1小時。
2．
關燈後0•5小時後放可進入。
3．
進入更衣間更換衣服，佩帶口罩、帽子、鞋套
實驗步驟
1，
進入無菌室後，先把酒精燈點燃，然後在用酒精棉進行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脫脂棉中製成）
2，
准備雙料管3根，單料管6根，培養皿7個。
3，
直接從原液中吸取10ml放入雙料管，（3根每根各10ml）
4，
再吸取原液1ml放入單料管中（3根每根各1ml）
5，
再吸取原液1ml放入培養皿中（2個培養皿各1ml）
6，
再吸取原液1ml放入鹽水管中製成－1梯度的樣液
7，
更換一根吸管，從－1梯度的樣液吸取1ml樣液放入單料管中（3根每根各1ml）
8，
再吸取－1梯度樣液1ml放入培養皿中（2個培養皿各1ml）
9，
再把每個培養皿中到入營養瓊脂平鋪底部搖允（注另作3個培養皿：空氣空白，把培養皿打開十分鍾倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。瓊脂空白，把培養皿中倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。鹽水空白，吸1ml生理鹽水放入培養皿中，倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。）
10，
把全部作好的放入培養箱中，溫度36C＋－1×C，大腸24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培養皿中的瓊脂凝固後反轉過來放入培養箱中）
11，
梯度：－1梯度為1ml原液加入9ml生理鹽水配成
－2梯度為1ml－1梯度樣液加入9ml生理鹽水配成
－3梯度－4梯度配製方法和－1、－2梯度的配製方法一樣
12，
如果大腸初發酵產生氣泡，用接種筆沾一個產氣的液在伊紅美蘭平板上畫之字形然後放入培養箱中36C，24H＋－2H
。（接種筆在每次使用前必須在酒精燈上消毒。所畫之形不能劃破伊紅美蘭瓊脂表面）
13，
取出後在用接種筆在伊紅美蘭平板之字形上挑菌，放入乳糖復發酵管中
，然後再培養36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14，
再在伊紅美蘭平板之字形上挑菌，放到載玻片上作鏡檢。（方法見標准）
15，
只有鏡檢成紫紅色和乳糖復發酵管產氣同時成立的情況下，才能斷定這根管是不合格。
16，
清洗消毒這根試管前必須進行消毒黴菌，121C，0。5小時同時不能放氣。
⑶ 怎樣用便捷的方法檢測大腸桿菌超標的自來水
檢測原理：
大腸菌群是一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，該菌主要來源於人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。食品中的大腸菌群數系以100ml(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
2.儀器設備與器具：
2.1 恆溫培養箱：36±1℃。
2.2 1000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。
2.3 接種針。
2.4 顯微鏡。
2.5 超凈工作台。
2.6 玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。
2.7 天平：感量0.01g。
2.8 滅菌釜。
2.9 培養皿（直徑為90mm）、試管，經121℃、30分鍾滅菌。
2.10試管夾、酒精燈、秒錶、載玻片 3.培養基及試劑：
3.1 乳糖膽鹽發酵管：按照製造廠家使用說明進行配製，滅菌。
3.2 伊紅美蘭瓊脂平板： 按照製造廠家使用說明進行配製，滅菌。
3.3 乳糖發酵管： 按照製造廠家使用說明進行配製，滅菌。
3.4 革蘭氏染色液。
3.4.1 結晶紫染色液：
結晶紫 1g
95%乙醇 20ml
1%草酸銨水溶液 80ml
將結晶紫溶解於乙醇中，然後與草酸銨溶液混合。
3.4.2 革蘭氏碘液：
碘 1g
碘化鉀 2g
蒸餾水 300ml
將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解後，再加蒸餾水至300 ml。
3.4.3 沙黃復染液：
沙黃 0.25g
95%乙醇 10ml
蒸餾水 90ml
將沙黃溶解於乙醇中，然後用蒸餾水稀釋。
3.5 生理鹽水。
4.檢驗程序：
檢樣
↓
稀釋
↓
乳糖膽鹽發酵管，36±1℃，24±2hr
↓ ↓
不產氣 產氣
↓ ↓
大腸菌群陰性 伊紅美蘭瓊脂平板，36±1℃，24±2hr
↓
報告 ↓ ↓
革蘭氏染色 乳糖發酵管，36±1℃，24±2hr
↓
↓ ↓ ↓ ↓
G+ G-，無芽孢桿菌 產氣 不產氣
↓ ↓
大腸菌群陰性 大腸菌群陰性
↓ ↓ ↓
報告 大腸菌群陽性 報告
5.測定方法：
5.1 檢樣稀釋：
5.1.1 以無菌操作將檢樣25ml(或25g)放於含有225ml滅菌生理鹽水的滅菌塑料燒杯中，經充分振搖成1：10均勻稀釋液。
5.1.2 用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水的 試管中，振搖成1：100稀釋液。
5.1.3 重復5.1.2的操作，使成1：1000稀釋液。
5.2乳糖膽鹽發酵試驗：根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計，選擇二個稀釋度，每一稀釋度接種3管，接種量在1ml以上者，用雙料乳糖膽鹽發酵管。1ml及1ml以下者，用單料乳糖膽鹽發酵管。然後置於36±1 ℃培
養箱內，培養24±2hr，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌
群陰性；如有產氣者，則可按以下程序進行。
5.3分離培養：將產氣的發酵管分別接種於伊紅美蘭瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內，培養24hr後取出，觀察菌落形態，並作革蘭氏染色。
5.4證實試驗：在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1～2個進行革蘭氏染色同時接種乳糖發酵管，置於36±1℃溫箱內培養24±2hr，觀察產氣情況。乳糖發酵管產氣，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。
5.5報告：根據證實為大腸菌群陽性的管數，查MPN檢索表，報告每100ml(g)大腸菌群的最可能數。
⑷ 大腸菌群的檢驗是比較常見的微生物檢驗，但誰能給個詳細的操作步驟或者圖片啊，越詳細越好！
在這里有比較詳細的，大腸菌群顯色培養基是青島海博生物公司改良的培養基，用於食品、水、牛奶、冰激凌和肉製品中大腸菌群的快速檢測。大腸菌群顯藍綠色，其它菌顯黃色或無色，革蘭氏陽性菌被抑制。
成份 (g/L)
特殊營養物質 47.55
顯色劑 0.35
瓊脂 13.0
pH 7.0-7.2 25 ℃
此配方可以進行改良或增加營養成份以獲得最佳的結果。
注意
此培養基僅供實驗室使用。
用法
稱取本品 47.9g 加入 1000ml 蒸餾水，加熱溶解並不停攪拌，煮沸不要超過 1 分鍾。分裝三角瓶， 116 ℃ 高壓滅菌 15 分鍾。取 1ml 制備好的樣品液加入直徑為 9cm 無菌平皿中心，傾入冷卻至 45 -50 ℃ 培養基約15ml ，混勻，凝固後， 36 ± 1 ℃ 倒置培養 18 ～ 24h 。或冷卻至 45-50 ℃時，傾入無菌平皿，瓊脂完全凝固後，在 37 ℃的培養箱中倒置放置 1-2 小時，加入適當稀釋度的樣品液 1ml ，塗布於培養基上， 36 ± 1 ℃培養 18 ～ 24h 。
貯存
制備好的平板應立即使用，應避免光線直接照射。乾燥培養基應放置於陰暗乾燥處， 保存溫度 2-8 ℃，注意避光保存。
失效
乾燥培養基超過保質期、結塊和顏色變化都不能使用。
操作步驟
1 、按國家標准、 SN 標准、 FDA 標准或其它方法制備樣品液
2 、取樣品液 1ml 加入 冷卻至 45-50 ℃顯色培養基中混勻或 塗布於平板上
3 、 36 ± 1 ℃ 培養 18 ～ 24h ，選用有 30 ～ 200 個菌落的平板，計數平板上出現的典型大腸菌群菌落。大腸菌群典型菌落為藍綠色，其它細菌為無色或黃色菌落。
總大腸菌群 = 藍綠色菌落
4 、對可疑大腸菌群菌落可劃線接種到營養瓊脂平板上， 36 ± 1 ℃ 培養 12-16 小時，挑取單菌落做大腸菌群 BGLB 發酵試驗。
質量控制
1 、外觀
此乾燥培養基的粉末均勻，具有良好的流動性，呈乳白色。制備好的平板呈透明無色固體培養基。
2 、微生物試驗
在 36 ± 1 ℃ 培養 18 ～ 24h 小時：
質控菌株 ATCC 生長情況 菌落顏色
單增李氏菌 27853 -/+ 無色
金黃色葡萄球菌 25923 -/+ 無色
大腸桿菌 25922 +++ 藍色
沙門氏菌 +++ 無色
大腸菌群 +++ 藍色
方法的局限性
本培養基鑒定 大腸菌群 ，少數情況下可能會出現假陽性，但不會出現假陰性，有時可能需做其它補充試驗。
典型特徵
大腸菌群典型菌落為藍綠色，其它細菌為無色或黃色菌落。
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⑸ 食品衛生微生物學檢驗.大腸菌數測定
微生物
一、大腸菌群的檢測GB4789.3-2010
第一法 大腸物寬察菌群MPN計數法 第二法 大腸菌群平板計數法
1.1月桂基硫酸鹽胰蛋白腖（LST）肉湯:稱取35.6g溶於1000ml蒸巧拆餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝於有倒立發酵管的試管中，每管10ml，121℃高壓滅菌15min後備用。雙料除蒸餾水外其他成分加倍。
1.2煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯：稱取30g溶於1000ml蒸餾水中分裝 ，經115℃15min高壓滅菌備用。
1.3無菌生理鹽水：稱取8.5gNaCl溶於1L蒸餾水中。分裝於250ml的錐形瓶中，121℃高壓滅菌15min後備用
1.4結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）：稱取41.6g溶於1L蒸餾水中，充分搖勻，加熱煮沸2min冷卻至50℃，傾注平板。
無菌 1 mol/L NaOH：稱取40 g氫氧化鈉溶於1 000 mL蒸餾水中，121 ℃高壓滅菌15 min。
無菌 1 mol/L HCl：移取濃鹽酸90 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，121 ℃高壓滅菌15 min。
二、大腸菌群的檢測GB4789.3-2003 第一法 大腸菌群MPN計數法
2.1稱取乳糖膽鹽發酵培養基35.0g溶於1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝於有倒立發酵管的試管中，每管10ml，115℃高壓滅菌15min後備用。雙料除蒸餾水外其他成分加倍。
2.2伊紅美藍瓊脂平板：稱取伊紅美藍瓊脂37.5g溶於1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝、115℃高壓滅菌15min後備用。
2.3乳糖發酵管：稱取乳糖發酵培養基35.0g溶於1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝於有倒立發酵管的試管中，每管10ml，115℃高壓滅菌15min後備用
2.4無菌生理鹽水：稱取8.5gNaCl溶於1L蒸餾水中。分裝於250ml的錐形瓶中，121℃高壓滅菌15min後備用
2.5革蘭氏染色按GB/T4789-2003中罩茄2規定。
⑹ 食品中大腸桿菌的檢測
用大腸桿菌顯色培養基，檢測原理：蛋白腖和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑;十二烷基硫酸鈉抑製革蘭氏陽性菌;混合顯色底物分別與大腸菌群和大腸桿菌所對應的酶發生特異性反應，水解底物，釋放出顯色基團，在淡黃色平板上大腸菌群產生橙紅色的菌落，大腸桿菌產生藍綠色的菌落。
資料出自環凱官網。