1. 碳酸飲料的大腸菌群怎麼檢測 操作過程 需要哪些材料 一定要全面
進入無菌室步驟
1．
進入無菌室前應打開紫光燈進行滅菌，時間為0。5—1小時。
2．
關燈後0•5小時後放可進入。
3．
進入更衣間更換衣服，佩帶口罩、帽子、鞋套
實驗步驟
1，
進入無菌室後，先把酒精燈點燃，然後在用酒精棉進行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脫脂棉中製成）
2，
准備雙料管3根，單料管6根，培養皿7個。
3，
直接從原液中吸取10ml放入雙料管，（3根每根各10ml）
4，
再吸取原液1ml放入單料管中（3根每根各1ml）
5，
再吸取原液1ml放入培養皿中（2個培養皿各1ml）
6，
再吸取原液1ml放入鹽水管中製成－1梯度的樣液
7，
更換一根吸管，從－1梯度的樣液吸取1ml樣液放入單料管中（3根每根各1ml）
8，
再吸取－1梯度樣液1ml放入培養皿中（2個培養皿各1ml）
9，
再把每個培養皿中到入營養瓊脂平鋪底部搖允（注另作3個培養皿：空氣空白，把培養皿打開十分鍾倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。瓊脂空白，把培養皿中倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。鹽水空白，吸1ml生理鹽水放入培養皿中，倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。）
10，
把全部作好的放入培養箱中，溫度36C＋－1×C，大腸24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培養皿中的瓊脂凝固後反轉過來放入培養箱中）
11，
梯度：－1梯度為1ml原液加入9ml生理鹽水配成
－2梯度為1ml－1梯度樣液加入9ml生理鹽水配成
－3梯度－4梯度配製方法和－1、－2梯度的配製方法一樣
12，
如果大腸初發酵產生氣泡，用接種筆沾一個產氣的液在伊紅美蘭平板上畫之字形然後放入培養箱中36C，24H＋－2H
。（接種筆在每次使用前必須在酒精燈上消毒。所畫之形不能劃破伊紅美蘭瓊脂表面）
13，
取出後在用接種筆在伊紅美蘭平板之字形上挑菌，放入乳糖復發酵管中
，然後再培養36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14，
再在伊紅美蘭平板之字形上挑菌，放到載玻片上作鏡檢。（方法見標准）
15，
只有鏡檢成紫紅色和乳糖復發酵管產氣同時成立的情況下，才能斷定這根管是不合格。
16，
清洗消毒這根試管前必須進行消毒黴菌，121C，0。5小時同時不能放氣。
濾膜檢驗法的優點是比發酵法的檢驗時間短，缺點在於不能及時指導生產。
3. 菌落總數大腸桿菌和致病菌的檢測方法
大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100mL(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
1
設備和材料
1.1
溫箱：36±1℃。
1.2
冰箱:0～4℃。
1.3
恆溫水浴
:44.5±0.5℃。
1.4
天平。
1.5
顯微鏡。
1.6
均質器或乳缽。
1.7
平皿:直徑為90mm。
1.8
試管。
1.9
吸管。
1.10
廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。
1.11
玻璃珠:直徑約5mm。
1.12
載玻片。
1.13
酒精燈。
1.14
試管架。
2
培養基和試劑
2.1
乳糖膽鹽發酵管:按GB
4789.28中4.9規定。
2.2
伊紅美藍瓊脂平板:按GB
4789.28中4.25規定。
2.3
乳糖發酵管:按GB
4789.28中4.10規定。
2.4
EC
肉湯:按GB
4789.28中4.11規定。
2.5
磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB
4789.28中3.22規定。
2.6
生理鹽水。
2.7
革蘭氏染色液:按GB
4789.28中2.2規定。
3
操作步驟
3.1
檢樣稀釋
3.1.1
以無菌操作將檢樣25mL(或g)放於有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8
000-10
000
r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2
用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3
另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。
3.1.4
根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2
乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖
膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃
溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3
分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃
溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4
證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置
36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5
報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。
4
糞大腸菌群(faecal
coliform)
4.1
用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於EC肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於EC肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置
培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2
結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。
4. 食品微生物的檢測 大腸菌群的測定最好採用什麼方法啊
請問什麼企業的大腸菌群？通常我們都採用多管發酵法，執行標準是HJ/T347-2007。這個方法是B類，還有紙片法，也有不少環保部門採用，但這個方法是C類方法。首選的還是多管發酵法，它屬於經典方法。
我在環保部門從事細菌學項目的測定工作，就採用這種經典方法。對於河流等地表水，或是地表水飲用水源地、城市污水處理廠及肉禽場等企業，都進行水樣中糞大腸菌群的分析。對於地下水及地下水飲用水源地，都進行總大腸菌群的測定。
希望這些對你有幫助。
5. 食品中大腸桿菌的檢測
用大腸桿菌顯色培養基，檢測原理：蛋白腖和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑;十二烷基硫酸鈉抑製革蘭氏陽性菌;混合顯色底物分別與大腸菌群和大腸桿菌所對應的酶發生特異性反應，水解底物，釋放出顯色基團，在淡黃色平板上大腸菌群產生橙紅色的菌落，大腸桿菌產生藍綠色的菌落。
資料出自環凱官網。
6. 菌落總數大腸桿菌和致病菌的檢測方法
菌落總數用平皿法,單位是個/ml(每毫升或毫克裡面有多少的完整的菌落),方法是:在無菌操作的前提條件下,吸取1ml的原液加入到9cm的平皿里,在倒入3-5ml(37℃)的營養瓊脂,在37℃的溫箱里培養24小時,取出來計算它的菌落單位總數就行.
大腸桿菌用發酵法,單位是MPN/100ml(每100毫升或毫克的樣品裡面最大可能菌落形成單位)方法是15管法(適合食品)或9管法(適合非食品如游泳池水),用乳糖膽鹽發酵管
致病菌用培養法,只要符合相應的化學，生物試驗就可以判斷為某致病均陽性