核酸檢測是在實驗室的條件下,通過分析致病微生物DNA或者RNA基因學的序列,進行臨床病因學的確診。此種核酸檢測的方法是利用PCR擴增的方法進行檢測,需要很多的步驟,最快也要6個小時才能出結果。此種檢測靈敏度高、成本高,完全手工操作,工作量非常大,同時要求實驗室的條件也非常高。它是目前及早確定病人是否感染病毒,以及及早發現和及早治療最有效的檢測方法新型冠狀病毒核酸檢測的方法,目前採用的是實時PCR熒光法這種PCR熒光法也叫聚合酶鏈式反應,是通過一種分子生物學的技術用來放大這種極少見的RNA病毒。可以將新冠病毒RNA片段擴增到百萬倍以上,這樣更容易檢測出新冠病毒
2. 核酸檢測是怎樣檢測的
眾所周知,新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)是一種烈性呼吸道傳染病,其病原體為新型冠狀病毒。若想證實已出現的感染症狀是由本病毒所引起,最准確的方法是從患者體內分離出活病毒,並進行病毒培養。
然而,此方法並不適合大面積應用,在此次疑似病例的確診工作中,也並不適用。這是因為病毒培養所需時間較長,需要的場所條件也很高(P3級實驗室),時效性遠遠跟不上臨床需要。
而核酸檢測作為病原學的檢測手段之一,效率很高,一般情況下幾個小時就可以知道結果。因此,在此次疫情中,臨床上取得病原學證據的主要方式並不是病毒培養,而是核酸檢測。
核酸是遺傳信息載體,是對DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)的統稱。病毒則主要由遺傳物質和蛋白質組成。而新型冠狀病毒正是一種RNA病毒,其遺傳物質是單鏈RNA。核酸檢測的原理,正是檢測在被測者的咽拭子等樣本中,是否存在病毒的RNA。如果存在,說明被病毒感染。那麼,我們是否已經獲悉了病毒的RNA呢?
△RNA與DNA(圖片來源網路)
在武漢疫情初期,中國疾病預防控制中心應用宏基因組學技術,在短時間內完成該病毒的鑒定,並獲取了全基因組序列。在病毒全基因組序列公布後,實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)試劑被快速研發。
隨後,核酸檢測試劑盒被應用於臨床,並為確診新冠肺炎提供病原學證據。那麼,應用試劑盒進行核酸檢測,究竟是怎樣的一個過程呢?
首先,檢測人員需要在試劑的幫助下,將樣本中的核酸提取出來。再把已經分離出來的核酸加到核酸擴增試劑中,然後將其放到核酸擴增儀內,一般兩個小時內就會有結果。
事實上,在操作步驟中,擴增是很重要的一環。擴增的意義在於能讓微量的遺傳信息成指數增加。只要樣本中有核酸基因片段,就能用PCR法加以放大,從而更清晰地與病毒全基因組序列實現比對。
實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法已在臨床實驗室應用多年,檢測體系成熟,具有特異性強、靈敏度高、檢測周期短和可定量檢測的優點,而且還能對病毒感染程度和治療效果進行動態監測。
中日友好醫院呼吸與危重症醫學科主任醫師陳欣在記者采訪中介紹道:核酸檢測十分敏感,只要在被檢者的分泌物樣本中找到一部分病毒的核酸,就可以通過RT-PCR擴增的方式,整合成序列。
"雖然不確定核酸是否來自於活病毒,但對於有呼吸道感染症狀的患者或疑似患者來說,如果其咽拭子有這種核酸,一般認為來源於活病毒的一部分,間接證實其體內存在著病毒的繁殖和感染。" 陳欣告訴記者。
核酸檢測容易出現"假陰性"
雖然核酸檢測有靈敏度高、檢測周期短等優點,但也存在著一定的弊端。不同於從人體內直接分離出活病毒的方式,核酸檢測採用的是一種間接的方式,有可能造成假陰性。
因為試劑盒存在最低檢測限的問題,所以只有當採到的樣本中,病毒的含量達到一定程度時才能檢測出來。少數情況下,可能康復者並未康復,但由於樣本中病毒載量低,故康復者核酸檢測的結果呈陰性,也就是我們常說的"假陰性"。
因此,在《新型冠狀病毒肺炎診療標准(試行第七版)》中,出院標准之一為連續兩次痰、鼻咽拭子等呼吸道標本核酸檢測陰性(釆樣時間至少間隔24小時)。
而之所以選取呼吸道標本進行核酸檢測,是因為新冠肺炎屬於呼吸道傳染病,故而優先考慮從呼吸道的分泌物中取得標本。呼吸道又分為上呼吸道和下呼吸道,前者主要包括鼻、咽、喉;後者主要包括氣管、主支氣管及肺內各級支氣管。
相應地,現在對疑似患者檢測病毒核酸,標本的採集一般有兩大類,上呼吸道標本和下呼吸道標本。
上呼吸道標本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子(NPS)、鼻咽吸取物(NPA);下呼吸道標本主要包括痰液、氣管吸取物、支氣管肺泡灌洗液(BALF)等。
3. 新冠病毒檢測實驗室的生物安全如何控制
說我安全控制就是防感染做好防護消毒洗手,戴口罩。
4. 核酸檢測有哪些方法
新冠病毒核酸檢測怎麼做?
新型冠狀病毒肺炎疫情期間,大家在做好個人防護的同時,對於疫情動態也十分關注。原本冬春交際時節就是普通感冒和流感高發的時間段,而控制疫情最重要的手段,就是從眾多呼吸道患者中篩選出真正的新冠肺炎患者。那麼,新冠肺炎是怎麼診斷的呢?
新冠肺炎怎麼診斷?
首先,新冠肺炎患者通常是有症狀的,盡管有一些患者的症狀很輕微。做了血常規以及胸部影像學檢查,就可以提示是否有新冠病毒肺炎的可能性。當然,新冠肺炎的確診還是要靠新冠病毒核酸的檢測。不久之後還可能出現血液抗體的檢測,以幫助確診新冠肺炎。
新冠病毒核酸檢測怎麼做?
新型冠狀病毒的核酸檢測的取樣方法既不需要開刀也不需要打針,只要「輕輕一抹」。
到了發熱門診或者是相應的檢查室,醫生會讓病人張開嘴,用一個像棉簽一樣的拭子去擦拭扁桃體和咽隱窩附近的分泌物,也可以通過鼻腔取鼻咽後部的分泌物,然後放到試管裡面,再交給檢驗科去做相應的病毒核酸的檢查。
X光胸片是否能作為新冠肺炎的診斷手段呢?
其實X光胸片也是可以提示新冠病毒肺炎的。隨著積累的病例的總結,可以發現新冠病毒肺炎在胸片上面的影像很淡薄,分布是周邊的。因此在分布較好的胸片上也是可以看到的。
對於新冠肺炎最好、最敏感的影像學檢查手段就是胸部CT。在胸部CT每個掃描後的層面,可以看到胸片看不到的某些角度以及更淡薄的影子,這樣就可以早期提示患者可能患有病毒性肺炎。一旦出現這些特徵,就要結合核酸的檢測,對病人進行新冠病毒肺炎的確診。
查血能否確診新型冠狀病毒肺炎呢?
有研究證明,新型冠狀病毒肺炎患者的血液中查到病毒的核酸的比例較少,只有15%到20%。機體對新冠病毒入侵後,機體會產生特異性抗體,新冠病毒抗體IgM、IgG是可以在血液中檢測到的。但是,病人感染新型冠狀病毒後5天後才會先出現IgM,隨後才會出現IgG。
目前,我們國家的科研人員做了大量的工作。對於新冠病毒血液檢測的方面,現在我國的科研人員也在集中精力,加快提高檢測的技術的優化,以提高它的特異性和敏感性。
5. 迄今為止,我國檢測新冠病毒有哪些方法
1、熒光PCR法。PCR法指的是聚合酶鏈式反應,能將微量的DNA大幅增加。熒光PCR檢測的原理為——隨著PCR的進行,反應產物不斷累積,熒光信號強度也等比例增加。最後通過熒光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。
2、聯合探針錨定聚合測序法。這種檢測主要是用專門的儀器檢測測序載片上DNA納米球攜帶的基因序列。這種檢測的靈敏度高,不容易漏診,但結果也容易受多種因素的影響而不準。
3、恆溫擴增晶元法。檢測原理是基於核酸之間的互補結合特性開發的一種檢測方式,能夠用於定性或定量測量存在於生物體內的核酸。
4、病毒抗體檢測。抗體檢測試劑是檢測血清中由病毒進入人體後刺激人體產生的IgM或IgG抗體,IgM抗體出現較早,IgG抗體出現較晚。
5、膠體金法。膠體金法是用膠體金試紙進行檢測,也就是常說的快速檢測試紙。這種試紙經過特殊標記,上面有孔,用於滴入受檢者的血清樣本。
6、磁微粒化學發光法。化學發光法是一種高度敏感的免疫檢測,凡具有抗原性的物質都可以用這種方法測定。
6. pcr核酸檢測是什麼意思方法及步驟
核酸檢測是目前全球用來對是否攜帶新冠病毒進行確定的一種有效方式。目前大家主要使用的是鼻拭子、咽拭子以及抗體血清lgm進行參考。但是根據最新的新加坡入境要求是進行pcr核酸檢測,那麼pcr核酸檢測是什麼意思呢?
PCR的意思是聚合酶鏈式反應,能夠用來擴增DNA,從而將微量的DNA擴增到能夠檢測的程度。有些病毒的核酸是DNA,需要採用這個方法進行檢測。所以PCR並不是進行的檢查,而是檢測DNA的一種方法。比如乙肝病毒DNA定量,用的就是這一種方法。檢查DNA的目的,一方面是可以診斷疾病,如果連病原體的DNA都能檢測到,就說明感染了這種病原體;另一方面是判斷病毒復制的多少,從而判斷病情嚴重程度或者治療效果。
進行核酸檢驗,需要經過取樣、留樣、留存、核酸提取、上機檢測五個步驟。
核酸檢測的第一步就是採集人體分泌物,用鼻試子或咽試子擦拭鼻腔或咽後壁及雙側咽扁桃體處。
第二步醫務人員進行留樣,將試子頭浸入細胞保存液中,折斷尾部後立即旋緊管蓋。
第三部要將樣本放入密閉袋中,保存好並及時送檢。
第四步將樣本送進實驗室,提取核酸。
第五步,將提取物進行熒光PCR擴增反應。
核酸(nucleicacid),是一類由核苷酸(nucleotide)構成的生物大分子,分為核糖核酸(ribonucleic
acid,宴前者RNA)和脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic
acid,DNA)兩類,其中RNA多為單鏈結構,DNA多為雙鏈結構。除朊病毒(prion)外,核酸是構成生命所必需的生物大分子,其主要作用是構成生命體的遺傳信息載體,除此之外,還有部分核酸可作為及參與構成具有生物活性的酶分子或晌薯其他分子機器
。
核酸檢測顧名思義就是針對核酸開展檢測。
核酸檢測有何獨特的優勢呢?為何能作為新冠病毒確診的「金標准」呢?
其實每一種檢測方法都有其擅長的應用場景。以病毒檢測為例,通常的免疫學檢測方法(膠體金、ELISA、化學發光等)的檢測對象是病毒的抗原或抗體,相當於「側面描繪」。由於從感染到可檢測存在一個時間窗口期,因此免疫學檢測方法一般不合適作為早期診斷。
1、假陽性
假陽性通常比較少。一般實驗室人員操作不當會導致樣本間交叉污染或擴增產物的遺留污染,該種情況下可能會導致假陽性。
不過假陽性可以通過嚴格控制檢測流程、以及執行若干個陰性樣本隨機參與檢測的策略而有效規避。
2、假陰性
在這里需要說明的是,PCR檢測的假陰性與臨床的假陰性實際上不是一個概念。
以網路上激烈討論的新冠病毒的診斷為例,臨床假陰性是指臨床症狀和影像學高度疑似被感染、但PCR檢測卻多次或始終為陰性的情況;而PCR檢測假陰性是指所採集樣本中存在足夠量的新型冠狀病毒但卻沒有檢出悔簡的情況。
避免核酸檢測的假陰性,主要需要解決:(1)被感染者的細胞中有足量的病毒、(2)採集樣本中可以採集到含有病毒的細胞、以及(3)檢測出樣本中的病毒這三個環節。
其中PCR試劑盒的技術參數優劣主要影響第三個檢測環節。
僅針對第三個檢測環節,若樣本中病毒數量低於一個程度(低於最低檢測限),PCR試劑盒就無法檢出。從這個角度看,PCR檢測的假陰性是無法完全避免的。這也是為何需要補充開發病毒的特異抗體檢測的原因所在。
實驗室建設堅持高標准、嚴要求,嚴格按照國家《醫學生物安全二級實驗室建築技術標准》進行建設,建設面積100餘平方米,分為試劑貯存和准備區、標本制備與提取區、擴增和產物分析區三個區域。實驗室內配置全自動核酸提取儀、實時熒光定量PCR儀、擴增儀、高壓滅菌器、B2型生物安全櫃、超凈工作台、超低溫冰箱等儀器,消毒和防護設施齊全,符合相關生物實驗室安全標准。為防止實驗室外的區域被污染,實驗室的氣壓均為負壓,有效降低感染風險。此外,實驗室配備了污水處理系統,達到了廢液的合理排放和處理。
*目前我國多地區建設了PCR核酸檢測實驗室用以進行新冠病毒核酸檢測