① 細菌內毒素檢測鱟試劑實驗方法有哪些
鱟試劑法就是細菌內毒素檢測方法,它包括凝膠法和光度測定法。
凝膠法又分為限度實驗和半定量實驗。
光度測定法是定量實驗,分為濁度法和顯色法,其中濁度法又分為動態濁度法和終點濁度法,顯色法又分為動態顯色法和終點顯色法還有重組鱟試劑法
② 細菌內毒素的檢測
細菌內毒素是革蘭氏陰性菌的細胞壁成分,當細菌死亡或自溶後便會釋放出內毒素。因此,細菌內毒素廣泛存在於自然界中。如自來水中含內毒素的量為1至100EU/ml。當內毒素通過消化道進入人體時並不產生危害,但內毒素通過注射等方式進入血液時則會引起不同的疾病。內毒素小量入血後被肝臟枯否細胞滅活,不造成機體損害。內毒素大量進入血液就會引起發熱反應—「熱原反應」。因此,生物製品類、注射用葯劑、化學葯品類、放射性葯物、抗生素類、疫苗類、透析液等制劑以及醫療器材類(如一次性注射器,植入性生物材料)必須經過細菌內毒素檢測試驗合格後才能使用。由於家兔對熱原的反應與人基本相似,所以半個世紀以來用家兔來檢測熱原,為保障葯品質量和用葯安全發揮了重要作用。
1956年美國人Bang發現美洲鱟血液遇革蘭氏陰性菌時會產生凝膠。其後Levin和Bang又搞清楚微量革蘭氏陰性菌內毒素也可以引起凝膠反應,從而創立了鱟試劑檢測法。由於鱟試劑法簡單﹑快速﹑靈敏﹑准確,已廣泛用於臨床、制葯工業葯品檢驗等方面。
在美國,鱟試驗被稱作為「細菌內毒素試驗(Bacterial Endotoxin Test)收載於1980年20版美國葯典。隨後英、德、意、日以及中國相繼在葯典中收載了這一檢查法。此後鱟試驗逐漸替代家兔熱原試驗,但由於部分葯品由於自身特殊性無法通過稀釋法消除干擾,因此鱟試驗還無法完全取代家兔熱原試驗。2005年版中國葯典規定168個品種進行細菌內毒素檢查法,並收錄了2種細菌內毒素檢查法:包括凝膠法和光度測定法兩種方法。前者利用鱟試劑與細菌內毒素產生凝集反應的原理來定性檢測或半定量內毒素,後者包括濁度法和顯色基質(比色)法,系分別利用鱟試劑與內毒素反應過程中的濁度變化及產生的凝固酶使特定底物釋放出呈色團的多少來定量測定內毒素。比色法又可分為終點顯(比)色法和動態比色法。該方法靈敏度、精密度高。國內如廈門鱟試劑廠早在05年即有顯色基質(終點顯色)鱟試劑盒上市。
③ 內毒素的檢測
由於內毒素是細菌死亡裂解或自溶引起的,因此環境中大量存在內毒素。當內毒素通過機體消化道等方式時並無危害,少量通過注射等方式進入血液後被肝臟枯否細胞滅活,不造成機體損害。內毒素大量進入血液就會引起發熱反應—「熱原反應」。內毒素大量進入、集聚於血液中,超過機體各自衛系統的清除能力,則可導致不同程度的內毒素血症。對於易於引入內毒素的葯品醫療器械等必須通過內毒素檢測。內毒素的檢測常用家兔熱原法和鱟試驗法。中國葯典收錄的細菌內毒素檢查法包括2種方法:凝膠法和光度法,使用鱟試劑來定性或定量檢測內毒素。
④ 室內甲醛檢測方法哪種精準
酚試劑分光光度法檢測甲醛,數據的高低、精準與否除了與密閉時間長短、檢測環境有直接關系外,還與如下7個因素有關系。
1、檢測環境因素。GB/T18883-2002要求夏冬兩個極端季節溫濕度條件分別為,夏季溫度保持22-28℃,相對濕度40-80%RH;冬季溫度保持16-24℃,相對濕度30-60%RH。所以檢測時一定要關注現場實際環境,盡最大努力讓室內環境達到或者接近規范所要求的檢測條件。
2、酚試劑因素。檢測所用的酚試劑主要成分為:鹽酸3-甲基苯並瞻唑胺,為采樣時吸收甲醛的主要耗材,無論是單點位的配置還是多點位的配置,其配比的濃度會絕對影響數值的精準。所以一定要嚴格按照實驗室要求的濃度進行配比。
3、酚試劑配比的純水因素。酚試劑為粉末狀,用於采樣時需用純水稀釋至固定單位液體使用,所以水的純凈度也至關重要,自來水、瓶裝水、桶裝水多少都會含有部分雜質或添加物,實驗室一般都用蒸餾水做為稀釋液。
4、大氣采樣儀的因素。大氣采樣儀為採集甲醛的主要設備,流速的穩定性決定採集10L大氣量的精準性,所以采樣流速及時間的設定會決定最終的采樣空氣量,一般採集甲醛流速設定0.5L/min,時間設定為20min。
5、顯色液的因素。顯色液的主要成分為硫酸高鐵銨溶液,與采樣後的生成物嗪(甲醛與酚試劑反應生成物)發生反應生成藍綠色化合物,這種顏色的化合物是通過分光光度計最終得到甲醛數值的主要依據,所以顯色液的濃度配比及滴入嗪中顯色液的量,決定著是否能夠完全反應呈現最精準的藍綠色。
6、比色皿的因素。比色皿為分光光度計比色分析所用的器皿,透光度決定著光度計分析數據的精準性,考慮到玻璃的易磨損、透光度等問題,一般比色皿都選用石英材質。
7、分光光度計的因素。分光光度計是最終測定甲醛含量的主要儀器,充當判官角色,嗪與酚試劑的氧化產物反應生成藍綠色化合物,在波長630nm處用分光光度法測定甲醛數值,一般測得最大數值1.2mg/m³,最小數值為0.01mg/m³。因光度計涉及檢測領域較廣,檢測不同物質會用到不同波段,所以每年需進行校驗才能確保波長穩定數據更精準。
⑤ 內毒素測定的測定方法
1,凝膠法
2,動態濁度法
3,終點顯色法
4,動態顯色法
凝膠法系通過鱟試劑與內毒素產生凝集反應的原理來定性檢測或半定量內毒素的方法。凝膠法鱟試劑常見規格為0.1ml/支或0.5ml/支或者更大裝量,使用時應加除熱原水(細菌內毒素檢查用水)復溶後使用。凝膠法是通過觀察有無凝膠形成作為反應的終點。此法操作比較簡單,經濟,不需要專用測定設備,可以進行定性或半定量測定。
動態濁度法、終點濁度法、動態顯色法、終點顯色法,這四種方法都是定量檢測內毒素的。