1. 檢測細胞生物學活性有哪些方法
根據每細胞定重量設計用於單細胞、細胞及絲狀體微物測定定體積品通離或濾菌體離經洗滌再離直接稱重求濕重絲狀體微物濾用濾紙吸菌絲間自由水再稱重求濕重論細菌品絲狀菌品放已知重量平皿或燒杯內於一05℃烘乾至恆重取放入乾燥器內冷卻再稱量求微物乾重 要測定固體培養基放線菌或絲狀真菌先加熱至50℃使瓊脂熔化濾菌絲體再用50℃理鹽水洗滌菌絲按述求菌絲體濕重或乾重 除乾重、濕重反映細胞物質重量外通測定細胞蛋白質或DNA含量反映細胞物質量蛋白質細胞主要含量比較穩定其氮蛋白質重要組元素定體積品離細胞洗滌按凱氏定氮測總氮量蛋白質含氮量一陸％細菌蛋白質含量占細菌固形物50％吧0％般陸5％代表些細菌則佔一三％一四％種變化由菌齡培養條件同所產總含氮量與蛋白質總量間關系按列公式計算： 蛋白質總量＝含氮量×陸.二5 核酸DNA微物重要遺傳物質每細菌DNA含量相恆定平均吧.四×`一0^(-5)`NG定體積細菌懸液所含細菌提取DNA求DNA含量再計算定體積細菌懸液所含細菌總
2. 細胞免疫功能檢測常用有哪幾種方法
細胞免疫（CMⅠ）是由多種細胞相互作用的結果。免疫細胞間相互作用導致多種細胞因子的釋放。因此細胞功能測定不僅涉及T細胞的數量和功能與包括各類因子活性測定，因此評價機體的細胞免疫功能不僅程序復雜，且很難標准化。
一、遲發型過敏反應的體外檢測方法
皮膚試驗和接觸性過敏的誘發是檢測遲發型過敏反應（DTH）的兩種常用方法。皮膚試驗中誘發對曾經使病人致敏的抗原的再次應答，而接觸性過敏是測試受者對從未接觸過的物質發生致敏的能力。
1．皮膚試驗 用皮膚試驗診斷DTH，常用的抗原有結核菌純蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人類試驗時在前臂皮內注射少量可溶性抗原，24～48小後，測量紅腫硬結的大小，硬結直徑大於10mm即被看作為陽性。表明受試者對該病原菌有了一定的細胞免疫能力，若皮試無反應，可用更高濃度的抗原重復試驗，若仍無反應即為陰性，需排除皮試技術誤差，也可能受試者從未接觸過此抗原，也可能由於細胞免疫功能缺損，或由於細胞免疫功能缺損，或由於嚴重感染（麻疹、慢性播散性結核）造成的無反應性。
2．接觸性過敏常應用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）誘生接觸性過敏。化合物與皮膚蛋白質結合而導至DTH反應。在動物試驗時，初次皮膚上塗抹DNCB後間隔7～10天再激發刺激，則皮膚出現即為陽性。此試驗人類已不使用。
二、細胞免疫的體外檢測方法
體外檢測淋巴細胞的數量和功能，最易採集的是血標本，首先需分離或純化淋巴細胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重為1.077的淋巴細胞分層液，當將血液重疊於淋巴細胞分層液之上離心時，由於紅細胞（1.092）、多形核白細胞（1.090）、淋巴細胞（1.070）的比重不同而相互分開。淋巴細胞和單核細胞在血漿和分層液交界處形成一薄層。仔細分出這一薄層的細胞，其中淋巴細胞佔80%，單核細胞佔20%，淋巴細胞中T細胞佔80%，B細胞佔4%～10%，其作為非DT、非B細胞。
1．T細胞計數
（1）E花環法：人類T細胞表面有SRBC受體（CD2）能與SRBC結合形成玫瑰花環樣結構，將經分層液分離現的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合，經37℃培養5～10分鍾放4℃過夜，取細胞懸計數，外周血淋巴細胞中約70%～80%淋巴細胞結成花環即為T細胞。目前此方法已用來分離T細胞，而不用做T細胞計數。
（2）用單克隆抗體計數T細胞：將人的PBM分成三等份，分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細胞結合，再用FITC標記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進行間接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下或流式細胞儀檢測結果，在PBM中被CD3抗體染上熒光的細胞稱為CD3 細胞即總T細胞。正常人在PBM中T細胞佔70%～80%。正常人的CD4 細胞和CD8 細胞之和應與CD3 細胞數一致。CD4 細胞與CD8 細胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小於1.7。
2．T細胞活化試驗 T細胞能被非特異的物質稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加，最圖導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴細胞數，也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）摻入正在分裂的淋巴細胞，用液閃測定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細胞，用液測量儀檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細胞轉化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法，稱為MTT檢測法，MTT是一種甲氮唑鹽，它是細胞線粒體脫氫酶的底物，細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色甲（fromazan）產物。該產物的多少與活性細胞數正相關。結果可用酶標檢測儀（595mm）測量匯豐銀行密度，做為MTT法的檢查指標。此法的結果與3H-TdR摻入法平行，並能反應試驗中的活細胞數。
3．細胞毒試驗 TC細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞對其靶細胞有直接的細胞毒（殺傷）作用。常用的栓測細胞毒效應的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細胞胞混合，於37℃培養1小時左右，51Cr即可進入靶細胞，與胞漿蛋白結合，洗去游離的51Cr後，即可得到51Cr標記的靶細胞，將待檢細胞毒性的細胞與51Cr標記的靶細胞混合（比例約為50：1或100：1）靶細胞被殺傷越多，釋放到上清液中的液游離的51Cr越多，且不能被其他細胞吸收。用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值，即可計算出待檢細胞殺傷活性的高低。
細胞毒試驗檢測Tc細胞效應功能是否健全，及經IgG介導的ADCC效應，或NK細胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。
4．混合淋巴細胞的反應（MIR） 是體外研究T細胞的較好的方法，雙向MLR常被用來篩選骨髓移植的供體。來自不同供體的淋巴細胞分別與病人的淋巴細胞混合培養4～5天，在最後8小時摻入51TdR摻入法測T細胞的反應性。或用細胞毒法觀察受刺激的T細胞與活的靶細胞混合（靶細胞來自與刺激細胞相同的個體）如果T細胞受刺激後產生了細胞毒T細胞，可殺死活的細胞，根據靶細胞釋放51Cr的多少算出T細胞移動抑制因子）和LIF（白細胞移動抑制因子）來評估細胞免疫功能。近年來應用測定IL-2的免疫酶技術，操作簡單，並能定量以取代了MIF和LIF的測定。單個核細胞與分裂原一起培養24小時，然後測定清液中的IL-2活性。在細胞免疫功能缺損時，特別是AIDS病人，IL-2分泌明顯降低。而有些疾病，如多發性硬化、類風濕關節炎、移植排斥反應等病人體內血清中IL-2水平升高，表明病人T細胞活性增高。發生移植排斥反應的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶聯免疫吸附試驗測定各種體液中活化的T細胞脫落的IL-2受體（CD25），一般來說IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的，IL-2和IL-2受體的檢測可用於對某些疾病的監測，如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。
對體外培養的細胞進行細胞因子產生能力檢測是檢查細胞培養上清液中細胞因子的生物活性或抗原性。現已可用核酸雜交技術，即從組織中或細胞中提取RNA，與同位素或酶標記的該種細胞因子的cDNA探針作分子雜交試驗，即印跡（dot blotting）或Northern印跡，若查出有某種因子的mRNA存在，即說明該細胞在所處培養條件下有產生某種細胞因子的能力。
3. 細胞因子的檢測有哪些常用的方法
一、免疫學檢測方法包括 1.ELISA檢測方法 2.RIA檢測方法 3.免疫熒光技術
二、生物學檢測方法包括體內和體外兩種方法。體內法採用動物模型來檢測細胞因子的含量,反映的是動物體內的生物學活性,參考價值大,但操作比較繁瑣、成本高、影響因素多、實驗周期長,故很少用。體外法主要是利用來源於白血病病人或實驗性白血病動物模型的細胞株,根據細胞因子與細胞株之間作用原理不同又分為不同的檢測方法。
三、分子生物學檢測方法主要包括 1.Northern雜交法 2.反轉錄PCR(RT/PCR)法。
4. 測定微生物細胞活性的方法都有哪些
根據每個細胞有一定的重量而設計的。它可以用於單細胞、多細胞以及絲狀體微生物生長的測定。將一定體積的樣品通過離心或過濾將菌體分離出來，經洗滌，再離心後直接稱重，求出濕重，如果是絲狀體微生物，過濾後用濾紙吸去菌絲之間的自由水，再稱重求出濕重。不論是細菌樣品還是絲狀菌樣品，可以將它們放在已知重量的平皿或燒杯內，於105℃烘乾至恆重，取出放入乾燥器內冷卻，再稱量，求出微生物乾重。
如果要測定固體培養基上生長的放線菌或絲狀真菌，可先加熱至50℃，使瓊脂熔化，過濾得菌絲體，再用50℃的生理鹽水洗滌菌絲，然後按上述方法求出菌絲體的濕重或乾重。
除了乾重、濕重反映細胞物質重量外，還可以通過測定細胞中蛋白質或DNA的含量反映細胞物質的量。蛋白質是細胞的主要成分，含量也比較穩定，其中氮是蛋白質的重要組成元素。從一定體積的樣品中分離出細胞，洗滌後，按凱氏定氮法測出總氮量。蛋白質含氮量為16％，細菌中蛋白質含量占細菌固形物的50％一80％，一般以65％為代表，有些細菌則只佔13％一14％，這種變化是由菌齡和培養條件不同所產生的。因此總含氮量與蛋白質總量之間的關系可按下列公式計算：
蛋白質總量＝含氮量×6.25
核酸DNA是微生物的重要遺傳物質，每個細菌的DNA含量相當恆定，平均為8.4×`10^(-5)`NG。因此從一定體積的細菌懸液中所含的細菌中提取DNA，求得DNA含量，再計算出這一定體積的細菌懸液所含的細菌總數。
5. 微生物細胞生長的測定方法
微生物生長的測定方法有多種，根據研究對象或目的選擇。(一)微生物細胞數目的檢測方法1．總細胞計數法 顯微鏡直接記數法和比濁法(1)血球計數板法 血球汁數板中央有一個體積一定的計數室( 0.1mm3)。將菌懸液或孢子懸液在顯微鏡下計數，然後再按一定公式計算出細菌總數。 (2)塗片計數法 將一定體積(0.1ml)的樣品，均勻地塗在載片的一定面積內(1cm2)。在顯微鏡下計算細胞數量，推算1cm2所含細胞數目。（3）比濁法：菌體細胞培養液混濁，在一定范圍內，菌體數量與渾濁成正比，故可通過分光光度計或比色計求出渾濁度，通過與標准曲線對比，求出樣品中菌液濃度，算出個體數。特點：所得結果包括死菌和活菌。2. 活菌計數法（平板菌落記數法）：是通過測定樣品在培養基上形成的菌落數來間接確定其活菌數的方法．故又稱平板計數法。特點：計算的結果是活菌落。注意：樣品稀釋度。一個活細胞形成一個菌落。（1）塗布平板法 用滅菌的塗布器將一定體積(不大於0.1ml)的適當稀釋度的菌液塗布在瓊脂培養基的表面，然後保溫培養有到菌落出現，記錄菌落的數目並換算成每毫升試樣中的活細胞數量。（2）倒平板法 將樣品稀釋到一定濃度，取一定體積(0.1—1ml)倒入冷卻至45℃的固體培養基混合，製成平板，培養後，出現菌落，由菌落數推算出的菌總數。3 濾膜過濾法：樣品同過微孔濾膜後，細菌收集在濾膜上，然後將濾膜放在培養基中培養，通過菌落計數求出樣品活菌落。 (二)微生物生長量和生理指標的測定方法測定微生物生長量及相關的生理指標，常用以下方法：1．濕重法：將單位體積微生物培養液離心，收集沉澱物，然後再稱重。2．乾重法：將離心得到的細胞沉澱物，置於100---105℃的烘箱中乾燥過夜除去水分，然後再稱重。特點：適合與菌體濃度高的樣品。表示菌體生長量。3、測定細胞內菌種化學成分：方法難，操做困難，但較准確。細胞內菌種化學成分多少（∝），反映群體中菌體數量的多少。（1） 測定含氮量：N在細胞內穩定，測定總N量，粗蛋白=N*6.25g。（2） 測定DNA：微生物細胞DNA含量穩定，採用熒光指示劑或染色劑與菌體DNA作用熒光比色或分光光度法測得DNA的含量。（3） 其他生理指標：如測定碳、磷、RNA、ATP、DAP(二氨基庚二酸)的含量等。 (二)絲狀微生物菌絲長度的測定方法 對於絲狀微生物。特別是絲狀真菌，通常是通過測定菌絲的長度變化來反映它們的生長速率。方法有： 1．培養基表面菌體生長速率測定法 主要測定一定時間內在瓊脂培養基表面的菌落直徑的增加值。 2．培養料中菌體速率測定法主要測定一定時間內在固體培養料中菌絲體向前延伸的距離。如：栽培食用菌的培養料。 3．單個菌絲頂端生長速率測定法 在顯微鏡下藉助目鏡測微尺測定在一定時間內單個菌絲的伸長長度。
6. 常用的細胞因子檢測方法有哪些
（1）生物學檢測法：又稱生物活性檢測，是根據細胞因子特定的生物活性而設計的檢測法。生物活性檢測法又可分為： 1、細胞增殖法； 2、靶細胞殺傷法； 3、細胞因子誘導的產物分析法； 4、細胞病變抑製法。
（2）免疫學檢測法：細胞因子均為蛋白或多肽，具有較強的抗原性，可利用抗原抗體特異性反應的特性，用免疫學技術定量檢測細胞因子，常用的方法包括ELlSA、RlA及免疫印跡法
（3）分子生物學方法：目前公認的細胞因子的基因均已克隆化，較容易地得到某一細胞因子cDNA探針或根據已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。常使用斑點雜交、Northernblot、逆轉錄PCR，細胞或組織原位雜交等。具有靈敏、快速等優點，甚至從l～10個細胞中就可檢出其中的特異mRNA