❶ 怎樣檢測環境中的細菌和真菌
細菌和真菌的分布
作為自然界中微生物的細菌和真菌是我們肉眼看不見的,必須藉助於一定的器械（顯微鏡）,但是它們又是無處不在的.未了弄清楚它們的分布情況,特進行探究：
1、實驗中要選取五套培養皿進行實驗,一個做為對比,另外四個用來培養不同環境中的細菌,並且是在不同的環境中培養,以便得出細菌和真菌的生存條件.
2、實驗所使用的培養皿要經過高溫滅菌（讓學生想一想是為什麼）,並且每一組的培養皿要在相同的環境條件下培養.也即是說要准備至少5套培養皿（每一個小組）.因為對比不同環境中的細菌與真菌的存在情況,是屬於單因素比較,所以除了采樣地點是變數外,進行微生物培養的條件等也要保持一致（溫度、濕度等）.
3、經過高溫處理後可以將培養皿上、培養基內混有的細菌或真菌的孢子等殺死（經過嚴格的高溫滅菌的環境中是不可能有細菌和真菌存在的）,這樣就排除了實驗外其他環境的污染.因此,在實驗前不要盲目的打開培養皿,以防止細菌或真菌的孢子等落在培養基上,實驗中用無菌棉棒的目的同樣是為了防止棉棒上的微生物污染培養基.也就是說在接種的時候要注意污染.
4、在不同的環境中細菌的分布是不相同的,因此在採集菌種的時候要注意選擇環境,做到要有一定的代表性.
5、接種好的培養基要放在特定的環境條件下進行培養.
（將對照組放在一定的環境中培養,將另外四組放在四個不同的環境中進行培養,以便研究細菌和真菌的生存條件,同時也可以思考我們在生活中用什麼方法來防止細菌和真菌的污染；尤其是醫院又以什麼為標准來判斷.）
6、在檢測不同環境中的細菌和真菌時,每一個小組的成員要作好分工,以保證在規定的時間內做好觀察與記錄.同時也便於小組成員間的相互討論以及小組之間的討論.（分析細菌和真菌的生存環境,分布范圍,多少等等）.
❷ 深部真菌感染的臨床檢測
a. 直接方法：是組織或滲出物中可分離培養出致病真菌。特點：耗時長，並由於大量廣譜抗生素的廣泛使用，其培養陽性率也是很低。
b. 輔助方法：臨床表現，免疫學，病理學，影像學檢查等。特點：觀察期不確定，費時費力，特徵性不明顯，並對醫師的專業水平要求高。
c. 鱟試驗：通過檢測（1,3） β D葡聚糖的含量，判斷是否有真菌感染，耗時短，靈敏度高，特異性強。（關於鱟試驗檢測真菌感染的優點在4.2 將詳細說明）
dGM實驗：麴黴屬半乳甘露聚糖抗原檢測。判斷是否麴黴屬真菌感染。
e. 真菌的抗原、抗體及代謝產物的血清學檢查和真菌核酸檢測（PCR技術）。（廈門..鱟試劑）
❸ 真菌檢測步驟
首先是用試子清刮部分細胞，然後染色，再放到顯微鏡下檢查是否有真菌菌絲存在。
❹ 真菌顯微鏡觀察一般是第幾天
培養兩天左右，一般十到二十分鍾即可出結果。
1、真菌檢查，簡單來說，就是通過直接鏡檢的方法，找到菌絲和孢子，以供初步診斷一種檢查方法。常見的鏡檢方式而真菌鏡檢是指通過取樣直接鏡檢的方法，找到菌絲和孢子，以結果判斷是否有菌。常用來檢測皮膚、指甲、須發等部位的淺部真菌問題[1]。直接鏡檢，陽性表示真菌的存在，但一般不能確定菌種。陰性不能完全排除。
2、是常用來分辨皮膚是否感染真菌/細菌最快最有效的方法[2]。真菌鏡檢還可細分為2類，染色和不染色。目前染色方法中乳酸酚棉蘭染色，熒光劑染色，因操作較簡單，檢測速度較快而被廣泛使用。而不染色的則是生理鹽水，koh濕片法。
3、在醫學定義里被定義為真菌塗片檢查。這種檢測方式不僅准確率高，而且效率也高，一般十到二十分鍾即可出結果！詳細分為兩種：淺表真菌檢查和深部真菌檢查。淺表真菌檢查主要是刮取懷疑真菌感染的皮損表面的皮屑或者脫落細胞，用氫氧化鉀溶解，然後通過酒精燈加熱固定之後，通過高倍顯微鏡來觀察是否有熒光顯色。[4]這種方法常用來檢測皮膚是否受到淺層真菌感染（臨床表現為腳氣、灰指甲）關於手足淺表性真菌感染的研究可參考上述而深部真菌檢查主要是抽血化驗，可以做真菌培養，通過特殊的培養皿靜置48小時之後，再通過特殊的檢測方式判斷是否有真菌陽性。
來源鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定及理化鑒定等方法。
（一）來源鑒定法
又稱基原鑒定法，是應用植（動、礦）物分類學的知識，對中葯的來源進行鑒定，確定其正確的學名，以保證應用品種准確無誤。
1．來源鑒定的內容：包括原植（動）物的科名、植（動）物名、拉丁學名、葯用部位，礦物葯的類、族、礦石名或岩石名。
2．原植物鑒定的步驟：①觀察植物形態；②核對文獻；③核對標本。
中葯的原植物鑒定，除經典分類學方法外，還可使用化學分類學、細胞分類學、數值分類學、DNA分類學方法和技術。
（二）性狀鑒定法
就是用眼看、手摸、鼻聞、口嘗、水試、火試等十分簡便的方法來鑒別葯材的外觀性狀，這些方法積累了豐富的傳統鑒別經驗，具有簡單、易行、迅速的特點。 性狀鑒定的內容包括形狀、大小、色澤、表面特徵、質地、折斷面的特徵、氣、味、水試、火試等。
1． 葯材 ：
⑴ 形狀 ：葯材的形狀與葯用部位有關，每種葯材的形狀一般比較固定。
⑵ 大小 ：指葯材的長短、粗細（直徑）和厚度。
⑶ 色澤 ：葯材的顏色與成分有關，顏色是否符合要求，是衡量葯材質量好壞的重要因素之一。一般應在自然光下觀察葯材的顏色，如用兩種色調復合描述色澤時，應以後一種色調為主色。
⑷ 表面特徵 ：指葯材表面是光滑還是粗糙，有無皺紋、皮孔、鱗片、毛茸或其它附屬物等。
⑸ 質地 ：指葯材的輕重、軟硬、堅韌、疏鬆（或泡松）、緻密、黏性、粉性、油潤、角質、綿性、柴性等特徵。
⑹ 斷面特徵：包括自然折斷面和橫切面。
⑺ 氣 ：「氣」是由於葯材含有揮發性物質的緣故，也是葯材的重要鑒定特徵之一。
⑻ 味：葯材的味感是由其所含的化學成分決定的，每種葯材的味感是比較固定的。味感也是衡量葯材品質的標准之一。
⑼ 水試 ：有些葯材放入水中，能產生特殊的現象，如沉浮、溶解情況、顏色、透明度、有無黏性、膨脹度、旋轉與否及有無熒光等。
⑽ 火試 ：有些葯材用火燒之，能產生特殊的香氣或臭氣，會有顏色、煙霧、閃光或響聲等現象出現，可據此鑒別其真偽甚至優劣。
三）顯微鑒定法
是利用顯微鏡來觀察葯材的組織構造、細胞形狀以及內含物的特徵，礦物的光學特性，以及利用顯微化學方法，確定細胞壁及細胞內含物的性質或某些品種有效成分在組織中的分布，用以鑒定葯材的真偽和純度甚至品質，以及對中成葯是否按處方規定投料進行鑒定。
1．顯微製片方法
包括有橫切片或縱切片、表面製片、粉末製片、解離組織片、花粉粒與孢子製片、磨片製片、含粉末葯材的制劑顯微製片等。
2．植物細胞壁和內含物的鑒別
3．顯微測量
目鏡測微尺先用鏡台測微尺標化，然後在顯微鏡下測量細胞及細胞內含物的大小。通常是在高倍物鏡下進行測量，但欲測量較長的纖維、非腺毛等的長度時，則在低倍物鏡下測量，記錄最大值與最小值。
4．顯微常數測定
常見的顯微常數主要有用於葉類鑒別的氣孔數、氣孔指數、柵表比、脈島數和脈端數等。這些顯微常數常因植物種類不同而異，而同種植物則較為恆定，對於葉類、某些帶葉的全草類和花類葯材的品種鑒定有重要意義。
5．常用封藏試液
⑴ 蒸餾水、稀甘油：適用於觀察澱粉粒、油滴、樹脂等細胞內含物及細胞壁的顏色。
⑵ 甘油醋酸試液：使澱粉粒不膨脹，特別適宜澱粉粒的觀察與顯微測量。
⑶ 水合氯醛試液：可使皺縮的細胞膨脹；可溶解多種色素，如葉綠素及樹脂、澱粉粒、蛋白質、菊糖、揮發油，而各種晶體不溶解；有清凈、透明作用，使細胞、組織透明，便於觀察細胞形狀和組織構造及細胞內含的各種結晶體。
6．掃描電子顯微鏡和偏光顯微鏡的應用
⑴ 掃描電子顯微鏡：解析度高，可達3nm，放大倍數一般可達幾十萬倍，圖像富有立體感。
⑵ 偏光顯微鏡：主要用於觀察和分析礦物類中葯的光學性質，也可用於研究動物和植物類中葯的組織及細胞內含物，如澱粉粒、草酸鈣簇晶等。對於透明礦物，一般使用透射光源的偏光顯微鏡；對於不透明礦物則使用放射光源的偏光顯微鏡。
（四）理化鑒定法
1．物理常數的測定
包括相對密度、旋光度、折光率、硬度、黏稠度、沸點、凝固點、熔點等的測定。這對揮發油類、油脂類、樹脂類、液體類葯（如蜂蜜等）和加工品類（如阿膠等）葯材的真實性和純度的鑒定，具有特別重要的意義。
2．一般理化鑒別
⑴ 化學定性分析：利用葯材中的化學成分能與某些試劑產生特殊的氣味、顏色、沉澱或結晶等反應來鑒別中葯的真偽。
⑵ 微量升華：利用中葯中所含的某些成分，在一定溫度下能升華的性質獲得升華物，在顯微鏡下觀察其結晶性狀、色澤，或取升華物加試液觀察反應。
⑶ 熒光分析：利用中葯中所含的某些化學成分在紫外光或常光下能產生一定顏色的熒光的性質進行鑒別。紫外光燈的波長為365nm，如用短波（254～265nm）時應加以說明。
⑷ 顯微化學分析：將葯材的切片、粉末或浸出物等置於載玻片上，加某些化學試劑後產生沉澱或結晶，在顯微鏡下觀察其形狀和顏色進行鑒別。利用顯微和化學方法確定中葯有效成分在中葯組織構造中的部位，稱為顯微化學定位試驗。
⑸ 泡沫指數和溶血指數：利用皂苷的水溶液振搖後能產生持久性的泡沫和溶解紅血球的性質，可測定含皂苷類成分葯材的泡沫指數或溶血指數作為質量指標。
3．檢查
⑴ 水分測定法：2005年版《中國葯典》水分測定法有四種，即烘乾法、甲苯法、減壓乾燥法和氣相色譜法。
⑵ 灰分測定法：2005年版《中國葯典》灰分測定法包括總灰分測定法和酸不溶性灰分測定法。
⑶ 膨脹度的測定：膨脹度是葯品膨脹性質的指標，系指按乾燥品計算，每1g葯品在水或其它規定的溶劑中，在一定的時間與溫度條件下膨脹後所佔有的體積（ml）。主要用於含黏液質、膠質和半纖維素類的天然葯品。
⑷ 酸敗度：是指油脂或含油脂的種子類葯材，在貯藏過程中發生復雜的化學變化，產生游離脂肪酸、過氧化物和低分子醛、酮類分解產物，因而出現臭味，影響葯材的感觀性質和內在質量。
⑸ 色度檢查：利用比色鑒別法檢查葯材在貯藏過程中有色雜質的限量，如白術。
⑹ 有害物質的檢查：中葯中的有害物質主要有內源性的有害物質和外源性的有害物質。
①內源性的有害物質：
②外源性有害物質：
4．色譜法
⑴ 薄層色譜法：是用於定性鑒別最多的色譜法之一。
⑵ 高效液相色譜法
⑶ 氣相色譜法：適用於含揮發油及其它揮發性組分的中葯及中成葯的分析。
⑷ 蛋白電泳色譜法：用於動物葯、果實種子類及根莖類等含蛋白質及氨基酸的葯材的真偽鑒別。
⑸ 高效毛細管電泳
5．分光光度法
包括紫外－可見分光光度法、紅外分光光度法和原子吸收分光光度法。常用波長范圍為：200～400nm的紫外光區；400～760nm的可見光區；2.5～25um（按波數計為4000～400cm－1）的紅外光區。
6．色譜－光譜聯用儀分析法
7．浸出物測定
對某些中葯的有效成分尚未清楚或尚無精確定量方法的中葯，一般可根據已知成分的溶解性質選用溶劑進行浸出物的測定。通常選用水、一定濃度的乙醇（或甲醇）、乙醚作浸出物測定。有冷浸法和熱浸法。測定前供試品需粉碎，使能過二號篩。
8．含量測定
⑴ 含量測定方法：既有經典分析方法（容量法、重量法等）又有現代儀器分析法（如紫外－可見分光光度法、氣相色譜法、薄層掃描法、高效液相法等）。
⑵ 揮發油含量測定方法有兩種：①甲法適用於測定相對密度在1.0以下的揮發油；②乙法適用於測定相對密度在1.0以上的揮發油。
（五）新技術和新方法簡介
1．DNA分子遺傳標記技術
2．中葯指紋圖譜鑒定技術