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國外肺炎病毒檢測方法

發布時間:2023-06-14 02:15:36

① 肺炎衣原體的鑒定檢測方法

臨床依據患者的症狀和體征,很難鑒別細菌性、病毒性、肺炎支原體或肺炎衣原體的感染,以致在臨床用葯上存在困難,一般只能依賴實驗室通過人體體液標本進行病因檢測。碘染色法和姬姆薩染色法不適用於Cpn的檢測。細胞免疫組織化學法對組織切片進行生物素-抗生物素-過氧化物酶系統著色(又稱ABC法)。在冠狀動脈硬化斑塊上可檢出Cpn-EB,透射電鏡證明在AS泡沫細胞內有特徵性的0.4µm大小的EB。該系統設備價格高昂,技術要求高,只限於科研應用。故不適合直接塗片。
目前常用的檢測方法有如下幾種:
分離培養
分離培養是Cpn特異性實驗室診斷方法,可用鼻咽或喉拭子、痰和胸腔積液標本分離Cpn,鼻咽部拭子是進行分離的理想標本,喉和痰液分離Cpn有何差別還不清楚。Cpn需要在組織中進行培養,無細胞培養基不適合Cpn繁殖,Cpn能在呼吸道來源的細胞系如:HEp-2和HL細胞系中穩定生長。拭子採用滌棉、金屬線為好,拭子既應注意防污染,亦要防止細胞和Cpn受抑制,取得的標本通常置於加抗生素和小牛血清的蔗糖磷酸緩沖液(保存於4℃,不超過24h),標本置於室溫會降低其活性,如果不能在24h內處理,標本應置於−70℃冰箱保存。接種後72h,要證實菌株,可用Cpn特異性或衣原體種特異性(即抗LPS)熒光結合單克隆抗體進行染色。Cpn包涵體不包含糖原,因此不被碘染色。
但是,肺炎衣原體的組織培養較其他衣原體困難,在作分離培養時,常採取以下措施以增強肺炎衣原體的感染性及促進其在細胞中的生長:①接種物離心(3000r/min)。②培養細胞用30µg/ml的二乙氨基乙基葡聚糖(DEAE-dextran)預處理。③加入細胞生長抑制劑,如環己酞亞胺1µg/ml以抑制宿主細胞生長。Kuo等在研究肺炎衣原體培養所需氨基酸時發現,賴氨酸和蛋氨酸的部分或完全缺失可不同程度地促進肺炎衣原體的生長,但該促進作用在加入環己酞亞胺後變得不明顯。Theunissen等觀察了SPG保存液的pH、離子強度、溫度對肺炎衣原體感染HL細胞的影響,發現pH大於8或小於5,原體的存活率迅速減低;在含10%小牛血清的SPG中,外加NaCI濃度小於80mmol/L時原體的活性受到影響,而0.346~4mmol/L的Ca2+或0~2.5mmol/L的Mg2+對原體感染性的影響不明顯;在0~20℃24h內,SPG中原體95%以上存活,溫度超過20℃,原體的存活率隨存放時間的延長下降迅速 。
血清學檢測
最常用的血清學方法是補體結合反應。一般用加熱處理過的衣原體懸浮液作為抗原(屬特異抗原)來測定被檢血清(屬特異血清)。哺乳動物和禽類一般於感染後7d、10d出現補體結合抗體。通常採取急性和恢復期雙份血清,如抗體滴度增高4倍以上,認為系陽性。關於血清學普查判定標准,國內暫定1∶16或以上為陽性,1∶8為可疑,1∶4以下為陰性。
酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
ELISA已用於痰標本的Cpn抗原檢測。優點為特異性強、操作簡便、易於自動化,並且可用於大批量標本的檢測,另外,快速試驗過程僅需1h,臨界值易判斷,由於可檢測血清中IgM和IgG,故能區分急性感染和既往感染,適合於臨床實驗室作為Cpn感染的常規檢查;缺點為敏感性差,陽性預期值較低,不適合人群的篩查。
微量免疫熒光抗體檢測(MIF)
MIF技術對肺炎衣原體的診斷是特異的且敏感性高,因此被國內外學者譽為Cpn感染診斷的「金標准」。MIF抗體包括3種:IgM、IgG和IgA。初次感染(原發感染)時,IgM於發病後3周出現,IgG於發病後6~8周出現,而IgA反應較弱或不出現;再次感染(重復感染)時,IgG常在1~2周內出現,且效價可以很高,但往往沒有IgM出現或其效價很低。目前診斷標准為:①急性感染:雙份血清抗體效價升高4倍以上或IgM=1∶16或IgG≥1∶512;②既往感染:IgM<1∶16且1∶16≤IgG<1∶512;③未感染過∶IgG1∶8。總之,MIF試驗是經典的國際通用的方法,對Cpn的診斷具有高度的特異性。但該方法的抗原片製作過程復雜,實驗室要求條件高。
無論採用何種檢測方法,急性期及恢復期的雙份血清標本中,肺炎支原體特異性抗體滴度呈4倍或4倍以上增高或減低時,均可確診為肺炎支原體感染,這是目前國際上公認的標准。
分子生物學檢測
用分子生物學方法檢測血管組織中Cpn,結果取決於樣本收集和操作、引物設計、核酸抽提、擴增物的檢測以及假陽性、假陰性結果的預防與鑒別等環節。最常用的引物是omp1、16SrRNA、3SrRNA、Cpn特異性克隆PstI片斷等,測定擴增產物多應用瓊脂糖電泳、Southernblot、EIA、聚丙烯醯胺膠電泳等。目前分子診斷技術中已有聚合酶鏈反應(PCR)、套式聚合酶鏈反應(nPCR)、連接酶鏈反應(LCR)、轉錄介導擴增試驗(TMA)、基因探針雜交等方法。作為分子生物學方法,PCR法具有快速、簡便、靈敏的特點,是Cpn診斷的發展方向。總之,分子生物學方法具有快速、簡便、靈敏的優點,是Cpn感染診斷的重要手段。很多學者建議將各種分子生物學方法之間或與其他診斷方法聯合應用,並且證明了聯合應用能提高Cpn感染診斷的敏感性。如PCR與ELISA聯合應用的方法診斷Cpn感染的敏感性高於免疫熒光法、傳統PCR法以及ELISA法。此外,其中基因探針雜交和LCR單獨使用靈敏度不足,宜與PCR聯合應用。nPCR不僅特異性與靈敏度頗占優勢,而且由於無須增添任何設備,能開展PCR檢測的單位均可實施,是較為適合國情的方法 。

② 核酸檢測結果怎麼

核酸檢測的結果怎麼用?三姐,這的結果是你在工作當中需要或者你出門兒以後需要檢測核酸核酸,如果你的核酸是陽性的,就需要做隔離。你的核酸是陰性的,兩次以上就表明你沒有。感染其他的疾病。可以正常生活和工作了。

③ 核酸檢測有哪些方法

新冠病毒核酸檢測怎麼做?

新型冠狀病毒肺炎疫情期間,大家在做好個人防護的同時,對於疫情動態也十分關注。原本冬春交際時節就是普通感冒和流感高發的時間段,而控制疫情最重要的手段,就是從眾多呼吸道患者中篩選出真正的新冠肺炎患者。那麼,新冠肺炎是怎麼診斷的呢?

新冠肺炎怎麼診斷?
首先,新冠肺炎患者通常是有症狀的,盡管有一些患者的症狀很輕微。做了血常規以及胸部影像學檢查,就可以提示是否有新冠病毒肺炎的可能性。當然,新冠肺炎的確診還是要靠新冠病毒核酸的檢測。不久之後還可能出現血液抗體的檢測,以幫助確診新冠肺炎。

新冠病毒核酸檢測怎麼做?
新型冠狀病毒的核酸檢測的取樣方法既不需要開刀也不需要打針,只要「輕輕一抹」。

到了發熱門診或者是相應的檢查室,醫生會讓病人張開嘴,用一個像棉簽一樣的拭子去擦拭扁桃體和咽隱窩附近的分泌物,也可以通過鼻腔取鼻咽後部的分泌物,然後放到試管裡面,再交給檢驗科去做相應的病毒核酸的檢查。

X光胸片是否能作為新冠肺炎的診斷手段呢?
其實X光胸片也是可以提示新冠病毒肺炎的。隨著積累的病例的總結,可以發現新冠病毒肺炎在胸片上面的影像很淡薄,分布是周邊的。因此在分布較好的胸片上也是可以看到的。

對於新冠肺炎最好、最敏感的影像學檢查手段就是胸部CT。在胸部CT每個掃描後的層面,可以看到胸片看不到的某些角度以及更淡薄的影子,這樣就可以早期提示患者可能患有病毒性肺炎。一旦出現這些特徵,就要結合核酸的檢測,對病人進行新冠病毒肺炎的確診。

查血能否確診新型冠狀病毒肺炎呢?
有研究證明,新型冠狀病毒肺炎患者的血液中查到病毒的核酸的比例較少,只有15%到20%。機體對新冠病毒入侵後,機體會產生特異性抗體,新冠病毒抗體IgM、IgG是可以在血液中檢測到的。但是,病人感染新型冠狀病毒後5天後才會先出現IgM,隨後才會出現IgG。

目前,我們國家的科研人員做了大量的工作。對於新冠病毒血液檢測的方面,現在我國的科研人員也在集中精力,加快提高檢測的技術的優化,以提高它的特異性和敏感性。

④ 新冠肺炎核酸檢測的方法是什麼 新冠疫苗只能通過核酸檢測出來嗎

新冠病毒的檢測方法,主要有兩個方面。第一、病原檢測,病原檢測包括新冠病毒的核酸檢測和NGS宏基因組測序檢測。核酸檢測的方法裡面有實時熒光PCR法和恆溫擴增法。

核酸檢測陽性,是新冠肺炎確診的指標之一。NGS宏基因組測序結果,與已知新冠病毒高信舉度同源,也可以確診。核酸檢測標本,一般是以滑州碧呼吸道的分泌物為主,包括上呼吸道或下呼吸道。

第二、血清學檢測,也跡消是抗體檢測。新冠肺炎特異性的IgG、IgM抗體檢測,也可以輔助新冠肺炎的診斷。病毒感染後的3-5天,IgM抗體開始出現,隨後IgG也會出現。IgG抗體恢復期,較急性期抗體4倍及以上升高,也可以確診。

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