水飛薊素的檢測方法

Ⅰ 水飛薊提取物的質量規格

1. 主要產品規格標准 (見表7-4)
表7-4 水飛薊提取物主要產品規格標准
規格 1 2 3
水飛薊素 (HPLC) ≥50.0%
水飛薊素 (UV) ≥80.0% ≥70.0%
組份
其它指標 Silibilin/Silymarin≥22/5
硫酸灰分≤2.0% Silibinin A+B≥30%
2.商品規格舉例
Milk Thistle Powdered Extract(80%)
(1) Manufacturing data
Botanical name: Silybum marianus GAERTNER
Part of plant used: Fruit without pappus
Solvent for Extraction: Acetone
Carrier: Maltodextrin
Ratio of botanical to native extract: 20～35:1
(2) Quality data
1) Physical and chemical data
Appearance: oily extract
Color: Brown to brownish
Odor: Characteristic
Taste: Characteristic
Solubility: Dissolve in Ethanol
Particle Size: Not less than 95% thru 80 mesh
Loss on drying (2 h at 105C):Not more than 5%
Ash: NMT 10.0%
Identification by TLC:Complies to standard; Method: Corresponding to DAB 10～2. Suppl.
Quantitative determination: Not less than 80% Silymarin by HPLC
2) Safety Data
Microorganism:
Aerobic Bacteria: Not more than 5000 cfu/g (Total plate count)
Molds and Yeasts: Not more than 100 cfu/g (Total plate count)
Pseudomonas aeruginosa / Presence:None detected in 1 g
Staphylococcus aureus / Presence:None detected in 1 g
Escherichia coli / Presence:None detected in 1 g
Salmonella Spp / Presence:None detected in 1 g
Other hazardous substance:
Resies of pesticides, radioactivity and aflatoxins:The raw material to be extracted meets thelimits forcontrolled substances
Resial solvent (by GC) :Less than 0.05% acetone
(3) Package/Storage
Storage:Cool,dry area; well closed container
Shelf Life: 24 months unopened
(4) Remark
Health hazards: See Material-Safety-Data-Sheet

Ⅱ 求解釋 DAB10是啥意思 我公司是做植物提取物的 這個貌似和水飛薊素有關系

德國葯典第10版，是一個檢測標准。 這個不是和什麼有關，是對葯品規格的檢測方法和指標，每個國家不一樣。通過DAB10檢測或者說滿足DAB10就是說這個葯品在這種檢測方法下指標是合格的。 網上找了一下沒有找到葯典原文，估計需要購買。

Ⅲ 水飛薊提取物的分析方法

1. 分光光度法測定水飛薊素的含量
精密稱取本品粉末適量, 置50ml容量瓶中, 加入無水乙醇40ml溶解後, 定容, 搖勻, 精密吸取5ml置100ml容量瓶中, 加入無水乙醇至刻度, 搖勻, 同時做一空白對照。紫外分光光度計在288nm處測定吸光度。按下式計算含量:
水飛薊素含量%= (以水飛薊賓計)×100%
A: 樣品吸光值; M: 取樣量 (g); V: 樣品稀釋倍數; 470: 水飛薊賓的吸光系數。
注:本方法源於遼寧省地方標准,適用於HPLC法測定值不低於60%的水飛薊提取物的含量測定。
2. 分光光度法測定水飛薊素的含量
精密稱取提取物精製品約250mg, 置50ml容量瓶中, 加入適量甲醇溶解後, 定容至50ml, 搖勻, 溶液即為被測液。
取1ml被測液於10ml容量瓶中, 加入2ml 2, 4-二硝基苯肼試劑, 搖勻, 塞上塞子,在50℃時加熱50分鍾, 冷卻, 加入氫氧化鉀的甲醇液至刻度, 搖勻, 靜置2分鍾。取1ml此液於離心試管中, 加入20ml甲醇, 搖勻, 離心。將紅棕色上清液倒入50ml的容量瓶中, 殘渣再加入20ml甲醇離心, 合並上清液, 用甲醇稀釋至刻度。
精密吸取1ml甲醇置10ml容量瓶中, 從「加入2ml 2, 4-二硝基苯肼試劑」起同法操作, 作為空白對照。
以空白溶液為對照,在490nm處測定被測濃度的吸光度A值,以E=537計算水飛薊素的含量。
3.分光光度法測定水飛薊素的含量(德國葯典DAB-9版1997)
標准溶液的制備:精密稱取水飛薊賓標准品25mg,置於5ml容量瓶,加甲醇溶解並定容至刻度,即得濃度為5mg/ml的標准品溶液。
樣品溶液的制備:稱250mg的水飛薊素至50ml容量瓶中,用甲醇溶解並稀釋至刻度,備用。
顯色溶液的制備:2,4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine)試液:稱此試劑500mg置於50ml容量瓶中,加H2SO41ml,用甲醇稀釋至刻度即得。
10%KOH溶液:稱10gKOH置於100ml容量瓶中。加水30ml,用甲醇稀釋至刻度即得。
測定法:取標准溶液、樣品溶液、甲醇各1 ml分別置10ml容量瓶中,並分別加入2ml的2, 4二硝基苯肼試液,三個容量瓶在水浴中50～55℃下反應50min,用自來水快速冷卻後,加KOH溶液至刻度,分別吸取上述三種反應後的溶液1 ml於10ml的具塞試管中,加甲醇10ml混勻,離心10min,上清液分別傾於50ml容量瓶中,離心沉澱再加甲醇10ml混勻,離心,上清液再分別傾於同一50ml容量瓶中,並重復一次,將三個50ml容量瓶均加甲醇至刻度。搖勻,於紫外分光光度計490nm處測定吸光度值。
上式的計算是基於取樣操作嚴格按上述要求進行稱量的。如果稱量不能精確達到文中要求,則按如下公式計算:
A1:樣品吸光值;A2:標准品吸光值;W1:樣品取樣量(g);W2:標准品取樣量(g);V1:樣品稀釋體積;V2:標准品稀釋體積
4.分光光度法測定水飛薊素的含量(美國葯典)
試液:將約1.0g的2、4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine),真空乾燥8小時,精確稱重,溶於2ml的硫酸中,臨時配置該溶液。
標准溶液的制備:將精確稱重的USP水飛薊賓標准品溶於甲醇中,製成約2.0mg/ml濃度的溶液。
樣品液制備:將約5.0g的水飛薊精細粉末精確稱重,置於一個提取套管,用小棉球塞住。將提取套管與連有連續提取裝置、含150ml的己烷250ml的圓底燒瓶連接,套管上加熱4小時,然後,將含己烷的圓底燒瓶與提取裝置分離,棄去溶劑,乾燥去除殘余溶劑。再將提取套管與連有可連續熱提取裝置、含100ml乙酸乙酯的250ml的圓底燒瓶連接,套管上加熱迴流8小時,減壓條件下,40℃旋轉蒸發儀上揮發溶劑至干。將殘余物用25ml甲醇溶解,定量過濾至一50ml的燒瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。(注:此制備方法適用於葯材)
檢測: 分別將1.0ml的標准制備液和樣品制備液加入2個琥珀色的10ml燒瓶中, 准確標記, 分別加入2ml的試液, 混合。塞上瓶塞, 保持在50±1℃, 緩慢攪拌50分鍾。冷卻, 用甲醇稀釋溶液至刻度, 混合。分別取上述溶液2.0ml, 移至一100ml燒瓶中, 並加入3.0ml的羥化四氫銨甲醇溶液 (25%) [注意: 羥化四氫銨臨時配製, 透明、無色溶液]。用甲醇稀釋至刻度, 使燒瓶靜置30分鍾。同時在1cm吸收池、490nm處測定標准制備液和樣品制備液的吸收度, 甲醇溶液作空白, 並用以下公式計算水飛薊賓和水飛薊素的百分含量:
5000(C/W) (Au/As)
C: 為標准溶液中水飛薊賓的濃度 (mg/ml); W: 樣品制備液中所用乾燥水飛薊的重量 (mg); Au和As分別為樣品制備液和標准制備液的吸收度。
5. HPLC法測定水飛薊素的含量 (INA法)
色譜條件: 柱: YMC-Mark ODS C18 5u 4.6×150mm(或Phenomenex Luna C18 5u 4.6×150mm); 流動相: A液: 5ml磷酸加入995ml甲醇-水溶液(20:80), B液: 5ml磷酸加入995ml甲醇-水溶液 (80:20), 按表7-1程序洗脫; 流速: 1.0ml/min; 柱溫: 40C; 檢測波長: 288nm; 進樣量: 10μl。
標准品溶液的制備: 精密稱取真空乾燥的水飛薊賓10.00mg, 用甲醇溶解, 並定容至25ml, 即為對照品溶液。按1:2, 1:10, 1:25, 1:50比例稀釋。
供試品溶液的制備: 葯材 精密稱取約10g葯材細粉, 用100ml己烷於索氏提取器在水浴上提取4小時至色淡 (或無色), 提取液棄, 葯渣揮干溶劑, 殘渣加入90ml甲醇置水浴上迴流提取8小時, 提取液冷卻後定量至100ml, 稀釋25倍, 過濾, 濾液即為供試品溶液。
提取物 精密稱取提取物粉末70mg(精確至0.1mg), 加70ml甲醇超聲提取20分鍾,冷卻, 定容至100ml, 濾過。
測定法: 對照品溶液、提取溶劑、供試品溶液分別進樣, 見圖7-2。以標准品峰面積對濃度繪制曲線, 水飛薊賓A、B的線性相關系數應不小於0.999, 分離度不小於1.8。各組份的相對保留時間見表7-2。
表7-2 各組分的相對保留時間
組 分 YMC-Park Luna
計算:按上述各組分的總峰面積以水飛薊賓計量。
6. HPLC法測定水飛薊提取物中SilibininA、B的含量
色譜條件:預柱:2cm Bondapak C18/37-50Micron;柱:25cm RP18,5μm;流動相及洗脫程序見表7-3;流速:1.0ml/min;檢測波長:288nm;進樣量:10μl。
表7-3 流動相洗脫程序
時間 (分鍾) 5%醋酸甲醇溶液 5%醋酸
圖7-2 水飛薊提取物HPLC圖
供試液: 取0.05g提取物 (30%)溶於100.0ml甲醇中, 用0.45μm濾膜濾過即得。
對照液: 用甲醇配成含Silibinin約0.15mg/L的溶液。
以SilibininA+B峰面積外標 (%) 法計算。
7. 氣相色譜法 (頂空進樣) 測定水飛薊提取物中己烷和乙醇的殘留量
內標溶液: 精密稱取250mg戊烷, 加二甲苯定容於10ml量瓶。
校正液: 精密稱取100mg乙醇、己烷、戊烷, 加二甲苯定容於10ml量瓶。移取10μl溶液至頂空進樣瓶, 密封。
供試液: 精密稱取0.1～0.5g干提取物, 置一個頂空進樣瓶, 加10μl內標液(相當於250mg戊烷), 密封。
頂空進樣參數: 溫度: 110℃; 溫度調節時間: 10分鍾; 壓力調節時間: 1分鍾。
色譜條件: 柱: DB-1硅膠毛細管, 30m×0.25mm內徑, 厚0.1μm。爐溫: 40℃保持7分鍾; 然後12℃/分鍾, 至180℃; 保持0.5分鍾; 30℃/分鍾至280℃, 然後保持10分鍾。進樣器: 150℃; 檢測器: FID250℃; 載氣: 氮氣(5psi); 分流比: 1:5; 積分停止時間: 25分鍾。
以內標色譜峰積分值進行定量, 按下式計算:
F=Ac×Ms/(Mc×As)
Ac: 參照標准品色譜峰面積; Ms: 內標的數量 (μg/μl); As: 內標的色譜峰面積;Mc: 參照標准品的數量 (μg/μl)。
含量 (mg/kg) =Ac×Ms×100/ (F×As×E)
Ac: 供試液中溶劑的色譜峰面積; Ms: 供試液中內標的數量; As: 供試液中內標的色譜峰面積; E: 取樣量。
注:檢測限:均為1ppm:保留時間:乙醇約5.5分鍾、己烷約10分鍾。
限度: 乙醇不得過0.5%、己烷不得過10ppm。
8. 氣相色譜法測定水飛薊提取物中丙酮殘留量
內標溶液: 精密稱取丙酮, 加水定容至6.00mg/ml。
校正液: 精密稱取丙酮, 加水定容至0.30mg/ml。
供試液: 精密稱取5g干提取物, 加120ml水, 加熱, 加2滴消泡劑和5.00ml內標溶液。蒸發至約80ml。
色譜條件: 柱: OV101, 50m, 內徑0.32mm, 厚0.1μm; 爐溫: Sotherm at 30℃; 進樣器: 250℃; 檢測器: FID 250℃; 載氣: 氦氣; 流速: 1ml/min; 分流比: 1:70。
以外標色譜峰積分值進行定量。
注:檢測限:丙酮0.1 ppm;定量限:丙酮1.0ppm;保留時間:丙酮約4.7分鍾。
限度: 丙酮不得過20ppm