硼酸液相色譜的檢測方法

『壹』 高效液相色譜法測定維生素c的含量為什麼用棕色瓶容量瓶

1.滴定法測定維生素C
1.1測定原理
2，6一二氯靛酚法和碘量法是較常見的滴定測定維生素C的方法。還原型抗壞血酸還原染料2，6一二氯靛酚，該染料在酸性中呈紅色，被還原後紅色消失。還原型抗壞血酸還原2，6一二氯靛酚後，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質干擾時，一定量的樣品提取液還原標准2， 6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。
碘量法的原理：維生素C包括氧化型、還原型和二酮古樂糖酸三種，當用碘滴定維生素C時，所滴定的碘被維生素C還原為碘離子，隨著滴定過程中維生素C全被氧化，所滴入的碘將以碘分子形式出現。碘分子可以使含指示劑（澱粉）的溶液產生藍色，即為滴定終點。
1.2測定操作
2，6一二氯靛酚法：取適量的樣品可食部，加入100 mL 2%草酸溶液，製成勻漿。取同一樣品勻漿10g，加入1%草酸溶液20 mL，搖勻，用濾紙過濾，取5mL過濾液於錐形瓶中，用2，6一二氯靛酚鈉鹽溶液滴定(1 mL≈0.02 mgVitC)，以淡紅色存在30 s內不褪色為滴定終點。記錄2，6-二氯酚靛酚鈉鹽溶液的消耗量，根據結果計算出樣品中維生素C含量(mg/100 g)。
碘量法：將果蔬洗凈，用紗布拭乾其外部所附著的水分，若樣品清潔可以不必洗。樣品可以先縱切為4~8等份，分別稱取20g可是用食部分，置於研缽中加入2% Hcl 15~10ml，研磨至漿狀，移於 100ml 容量瓶中，用2% HCl 加至刻度線處，混勻，過濾，記錄濾液總體積。樣品液的測定: 在50ml 燒杯中，用移液管注入10% KI 溶液0．5ml，0.5% 的澱粉溶液 2ml，樣品液 5ml，蒸餾水 2.5ml，用0.001N KIO3 液滴定，要一滴滴加入，並時時搖動燒杯，至微藍色不褪色為終點( 一分鍾不褪為止) 。記錄所用 KIO3 液毫升數，計算維生素C含量。
1.3測定方法評價
2，6-二氯酚靛酚滴定法具有簡便、快速、比較准確等優點，適用於許多不同類型樣品的分析。缺點是不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結合抗壞血酸的含量，易受其他還原物質的干擾，如果樣品中含有色素類物質，將給滴定終點的觀察造成困難。碘酸鉀滴定法較便宜，使用碘酸鉀滴定法測定蔬菜中維生素C含量較為簡便易行，而2，6一二氯靛酚法相對復雜。總的來說，滴定法操作簡便、快速，無須特殊儀器，但在測定深色樣品時，准確度和精確度欠佳。
2.熒光法測定維生素C
2.1測定原理
Deutsch和Weeks曾經報道過一種檢測維生素C的熒光分析法(OPDA)，並被指定為維生素C的經典熒光分析法。在該方法中，維生素C先被活性炭(Norit)氧化為脫氫抗壞血酸(DHAA)，DHAA再與熒光底物鄰苯二胺(OPDA)結合生成熒光產物，通過對該熒光產物的檢測實現對維生素C的定量分析。孫振艷等[1]提出了一種新的測定維生素C的熒光分析方法。基於維生素C被Cu2+氧化為DHAA，DHAA進一步與苯甲酸及十六烷基三甲基溴化銨產生熒光協同增敏作用，通過對體系熒光強度的測定進行維生素C的定量分析。
2.2測定操作
熒光分析法(OPDA)的測定方法：稱取一定量樣品，研磨後用水浸泡，取清液加入適量1%草酸溶液，振搖約3min，加入0.2g已處理好的活性炭再充分振搖約3min後過濾，濾液加於兩個25mL比色管再加入5.0mL緩沖溶液,，其中一管加入2.0mL硼酸溶液(即空白)搖勻，放置15min後，兩管均加入鄰苯二胺溶液10mL，避光放置30min待測。樣品熒光強度減去空白熒光強度值即為樣品相對熒光強度值。
孫振艷等的熒光分析法：在25 mL比色管中依次加入0. 6 mL CuSO4溶液，2. 0 mL十六烷基三甲基溴化銨溶液，2. 0 mL苯甲酸溶液，一定體積的維生素C標准溶液，，5. 0 mLNaOH-鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液，用蒸餾水定容，搖勻。在35℃恆溫水浴中加熱30 min，將溶液流水冷卻至室溫，激發波長為308 nm，在發射波長408nm處，測量熒光強度F，以不含維生素C的試劑空白為F0，計算ΔF=F-F。
2.3測定方法評價
熒光分析法測定維生素C具有操作簡單，精密度高，檢出限低等優點，該法可以應用於水果、蔬菜和葯物中維生素C的檢測，適於推廣。
3.光度分析法測定維生素C
3. 1測定原理
2，4-二硝基苯肼法和鉬藍比色法是常見測定維生素C的一種光度分析法。2，4-二硝基苯肼法的原理是總維生素C包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸，樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比，進行比色測定。鉬藍比色法是測定果蔬中還原型維生素C含量的一種常用方法，因偏磷酸和鉬酸銨反應生成的磷鉬酸銨經還原型的維生素C還原後生成亮藍色的絡合物，通過分光比色可以測定樣品中還原型維生素C的含量。
3.2測定操作
2，4-二硝基苯肼法：取適量的樣品可食部，加入100 mL 2%草酸溶液，製成勻漿。取勻漿20 g (含1~2 mg抗壞血酸)置入100 mL容量瓶中，用1%草酸溶液定容，混勻後過濾。取25 mL過濾液放入有2 g活性炭的25 mL比色管中，振搖1 min，過濾。然後取10 mL此氧化提取液，加入10 mL 2%硫脲溶液，混勻。按照GB12392-90中呈色反應方法，用分光光度計進行比色，根據結果計算出樣品中抗壞血酸含量。按下式計算樣品中Vc的含量:X=c·Vm×F×1001000。
X—樣品中總抗壞血酸含量，mg/100g；
c—由標准曲線查得或回歸方程算得「樣品氧化液」總抗壞血酸的濃度，μg/mL； V—試樣用1%草酸溶液定容的體積，mL； F—樣品氧化處理過程中稀釋倍數； m—試樣質量，g。
鉬藍比色法：准確稱取 100 g 樣品， 加入草酸－EDTA 溶液， 經搗碎後移入 100 mL 容量瓶，定容，過濾，吸取 2 mL 上清液於 50 mL 容量瓶中，加入 1 mL 的偏磷酸－醋酸溶液，5％的硫酸 2．0 mL，搖勻，加入 4 mL 鉬酸銨，以去離子水定容至 50 mL，20 min 後測定吸光度。
3.3測定方法評價
鉬藍比色法測定果蔬中還原型維生素C含量數據穩定性、准確性較好，是一種快速、准確、靈敏度高的測定方法，而且不受樣液顏色的影響。2，4-二硝基苯肼比色法測定總VitC (還原型和氧化型)，特異性較好，但操作復雜，是我國食品中VitC測定的標准方法，此方法適用於蔬菜、水果及其製品中總抗壞血酸的測定。
4.高效液相色譜法
4.1測定原理
高效液相色譜法是近年來發展起來的一種測定維生素 C 含量的方法，測定維生素 C 含量通常採用 C18柱或 C8柱，由於維生素 C 對紫外光有吸收，故檢測器常用紫外檢測器。
4.2測定操作
稱取維生素C標准樣品0.1000 g.轉移至100 ml容量瓶中，用雙蒸水定容，得到1.0mg·ml-1的維生素C標准溶液。參考Nisperos-Carriedo等的方法。准確稱取果肉1.00 g，用5 ml 0.2%偏磷酸冰浴研磨， 10000 g離心15 min，殘渣加入4 ml 0.2%偏磷酸再提取，合並上清液，定容至10 ml，經0.45μm濾膜過濾後待測。每個樣品重復5次。維生素C在240 nm波長時有最大吸收峰，故以240 nm作為檢測波長。以0.2%偏磷酸為流動相。分別吸取標准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8m，l各自定容至10 m，l從中分別吸取10.0μl進樣分析，以峰面積(mv)為縱坐標，標樣濃度(mg·ml-1)為橫坐標，繪制標准溶液曲線，計算線性回歸方程的回歸系數和截距。將樣品溶液分別進樣10.0μl進行液相色譜分析，測定維生素C的色譜峰面積，代入標准曲線計算出維生素C含量。
4.3測定方法評價
高效液相色譜法具有高效、快速、穩定、結構准確、操作簡便等特點。該法分離時間短，對結構不穩定的維生素C尤為適合，還特別適用於顏色較深的提取液樣品的測定，成為近年來較受歡迎的維生素C測定方法。缺點是所用儀器較為昂貴。

『貳』 硼酸阻燃原理

什麼是硼系阻燃劑？無機硼系阻燃劑以硼酸、硼砂和硼酸鹽為主，該系阻燃劑可明顯提高材料的耐火、阻燃和抑煙性能，使其燃燒時較少散發出有毒、有害氣體。無機硼系阻燃劑（硼酸、硼砂等）由於具有原料來源廣泛、抑煙性、穩定性好等優點成為重要的阻燃劑之一。硼砂主要為四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O），是製取含硼化合物的基本原料，幾乎所有的含硼化物都可經硼砂來製得。它們在冶金、鋼鐵、機械、軍工、刀具、造紙、電子管、化工及紡織等部門中都有著重要而廣泛的用途。無機硼酸鹽系列阻燃劑有偏硼酸鋇、氟硼酸銨、偏硼酸、鈉、五硼酸銨、偏硼酸銨、硼酸鋅等，硼酸鋅是目前應用最廣泛的無機硼系阻燃劑之一，硼酸鋅由硼砂或硼酸合成而得，同時具有阻燃、抑煙、成炭、抑制陰燃和防止熔滴等多種功能，廣泛用於纖維織物、聚醯胺、尼龍、聚氯乙烯中作阻燃劑。硼酸鋅可單獨作阻燃劑，也常與溴系阻燃劑、氫氧化鋁、氫氧化鎂以及膨脹阻燃劑協同阻燃，代替有毒的三氧化二銻。除了無機硼系阻燃劑外，近年來有機硼系阻燃劑正在逐漸引起人們的注意。研究利用硼酸與含氮、含磷、含鹵、含硅元素物質得到硼-氮、硼-磷、硼-鹵與硼-硅分子內復合型有機硼系阻燃劑，具有良好的阻燃抑煙性能。硼系阻燃劑檢測方法有哪些？目前測定硼砂、硼酸無機硼化合物的方法主要有分光光度法、電感耦合等離子發射光譜法(ICP-OES)、電感耦合等離子體質譜法(ICP-MS)等。1分光光度法GB/T 21918—2008採用分光光度法和電感耦合等離子體發射光譜法來測定食品中的硼酸鹽。分光光度法是基於物質對光的選擇性吸收的一種常用定性定量分析方法，主要有姜黃素法、亞甲胺-H法等。姜黃素分光光度法利用姜黃素與硼酸反應生成紅色產物，通過比色可以測定樣品中硼酸含量。 亞甲胺-H法是利用甲亞胺-H酸與硼在酸性條件下形成黃色配合物，顯色與硼的濃度成正比進行測定。目前我國食品中硼酸的測定大多是採用該法。2 離子色譜法（IC）離子色譜法（IC）採用專屬性色譜柱分離共存組分，試驗干擾小，選擇性高，可同時測定多種離子化合物，可以實現快速檢出。但硼砂在酸性條件下轉化成硼酸根（BO33-），BO33-為弱酸，電離常數小且易受淋洗液pH值的影響，所以BO33-經過離子抑制器後電導信號很低，需加入合適的絡合劑增強信號。3高效液相色譜法(HPLC)高效液相分析在液相色譜的基礎上採用了高壓輸液泵、高效固定相、高靈敏度的檢測器和強大的數據處理系統。高效液相色譜法檢測分離效率高，選擇性好，應用范圍較廣，廣泛應用到化工、生物、食品、醫學等領域。周示玉等人用姜黃素的乙酸溶液對香精香料樣品中的硼酸進行衍生化，用高效液相色譜法分析。以甲醇與四丁基溴化銨（TBABr）溶液/80:20為流動相，根據硼砂在硫酸環境下定量轉化成硼酸的原理間接測定硼砂。檢出限為0.0004mg/L。硼 酸 和 硼 砂 的 平 均 回 收 率 分 別 為92.1%~106.6%和92.9%~107.1%。硼砂在酸性條件下易轉變為硼酸，易溶於水、甲醇、乙醇等。隋迎軍等建立了高效液相色譜法測定冰硼散中硼砂的含量，流動相:甲醇-水/80:20，檢測波長550nm。陳艷等人用酸性甲醇提取食品中的硼砂，以姜黃冰醋酸衍生，甲醇-水/80:20為流動相，檢出限為6.4ng/kg。4 電感耦合等離子體原子發射光譜法(ICP-AES)ICP-AES法是以ICP等離子炬作為激發光源，使樣品中各成分的原子被激發並發射出特徵譜線，通過特徵譜線的波長和強度來確定樣品中所含的化學元素及其含量的分析技術。具有線性范圍寬(可達5~6個數量級)、光譜干擾小、分析速度快、多元素同時測定等特點，能測定各種樣品中的常量、微量乃至痕量的無機元素。連曉文等人用電感耦合等離子體光譜儀對食品中的硼砂硼酸進行了測定。樣品經過雙氧水微波消解後經ICP-AES分析測定，結果表示ICP-AES能准確測定食品中硼的含量，檢出限在9.7μg/L~24μg/L，回收率達到98%~108%。汪靜玲等人用磷酸做穩定劑，對腐竹中的硼進行濕法消化提取，並用ICP-AES測定其含量。回收率94.5%~96.4%，方法精密度0.93%。林立等人採用微波消解法對食品樣品進行了前處理，採用ICP-AES法進行了總硼的含量分析測定，此方法硼元素的檢出限為0.1mg/kg，RSD為1.6%~6.8%，回收率為96.5%~104.0%。5 電感耦合等離子體質譜法（ICP-MS）電感耦合等離子體質譜法（ICP-MS）是一種元素和同位素分析技術，結合了電感耦合等離子體離子源的高溫電離特性和四級桿質譜儀快速靈敏的優勢，具有靈敏度高、檢出限低、線性范圍寬等優點，是檢測痕量元素的極佳方法，廣泛應用於食品分析、地質勘探、環境分析等領域。林光西等人建立了用電感耦合等離子體質譜法測定了土壤中的有效硼，檢出限為0.01μg/g。RSD為1.03%方法便捷有效。陳秋生等人研究了ICP-MS法測定土壤中的硼。以沸水提取，採取多孔消解爐加熱，用ICP-MS法進行上機分析。方法的檢出限為2.5μg/g， 相對標准偏差為 2.53%，平均回收率為98.2%。適用於各類土壤中硼的測定，且能滿足大批量樣品檢測。

『叄』 合成的化合物怎麼用液相證明純度高低

僅通過液相色譜的方法證明樣品純度是高還是低的
可以採用外標或內標的方法來進行測定。
當然前提是必須有已知准確含量的標准品，並且樣品適合液相色譜檢測。
如果沒有標准品，那僅通過液相色譜來確定含量是不太可靠的，因為液相色譜的檢測時，很多檢測器都不能完全使得所有物質都響應並且響應值都是完全相同的。
基於這一點，我們有時在自己制 標准品時，一般通過DAD進行掃描，確保一個合適的波長，當然還有合適的其它條件，進行液相色譜測定。
然後再進行殘渣，水分等檢測，必要時還要做紅外和核磁。
這樣，通過多種辦法來測定，最終才能確定產品純度是高的或是低的，以及相對比較准確的結果。

『肆』 高效液相色譜分析法的類型

在吸附色譜中，樣品的極性官能團牢固地保留在填料的吸附活性中心上，非極性烴基幾乎不予保留。所以，要清楚地辨別極性功能團的種類、數量和位置。通常，樣品能用吸附色譜分離的應是能溶解於有機溶劑並是非離子型的，強離子樣品是不適宜的。
吸附色譜所使用的流動相以正己烷、三氯甲烷、二氯甲烷作為基礎，按照樣品的極性加上乙醇，然而，最好是使所加入醇的濃度為10%或更少一些。如有可能，可進一步減小百分數。因為高濃度的醇會減少填料的吸附活性，減弱吸附能力，並使重現困難。 1.正相分配色譜
正相分配色譜適用於不溶於水而溶於有機溶劑且帶有極性基團的樣品，但正相分配色譜不適合於離子型物質。
2.反相分配色譜
這種方法應用非常廣泛，應用的范圍也很廣，在反相分配色譜中，樣品的非極性部分起保留作用。
通過使用的流動相是水—甲醇和水—乙腈，通過加入甲醇或乙腈的量的不同來調節分離，但如果樣品帶有離子型基團，需要在流動相中加入鹽或調節流動相的PH值，例如，如果樣品有一個—COOH 基團，使流動相的PH值是偏向酸性的，由於抑制了—COOH基團的電離而加強了保留。這個方法叫離子抑止法，如果樣品有強離子基，有時候採用在流動相中加入適當抗衡離子以形成離子對的離子對法。
在調節PH值中，保持PH值在填料說明書手冊中所規定的范圍內，大多數化學鍵式的二氧化硅使用在PH=2-9，然而，當加入鹽以後，最好使其PH=7.5-8或更小的，多孔聚合物填料能應用非常廣泛的PH值。 這個方法是用填料的固定相的離子交換基團和樣品的離子基團之間的離子交換來分離樣品組分的，按照所交換的離子分成陽離子交換和陰離子交換。
離子交換色譜使用於能溶於水的離子型物質。在離子交換色譜中，流動相的鹽的濃度、PH及鹽的種類等都對保留值有很大的影響。在高效液相色譜的離子交換中所用的鹽有磷酸鹽、醋酸鹽和硼酸鹽。因為氯化物會腐蝕不銹鋼儀器，在高效液相色譜中不能使用NaCl或其他的氯化物鹽類。根據測量波長有些鹽也不能使用，例如，醋酸吸收大約在210nm，當檢測處在短波端的時候，用醋酸作流動相是不合適的。 凝膠色譜不同於以上三種分離方法。凝膠色譜是根據分子大小用分子篩效應來分離樣品組分的。這個方法也叫排阻色譜或粒度排阻色譜。具有一定孔徑的多孔性合成聚合物經常用作填料。
因為在樣品中，小尺寸的分子深深地滲透到微孔中，所以遲流出，而大尺寸的分子沒有滲透到微孔中，就很快流出。通常合成樹脂的分離使用有機溶劑作流動相，叫做凝膠滲透色譜。
凝膠色譜依樣品的性質又可分為凝膠滲透和凝膠過濾。
1.凝膠滲透色譜
凝膠滲透色譜（GelPermeationChromatography），簡稱GPC。此一類的色譜，使用於有機性溶媒的樣品中，如PVC，PS，ABS等等，而所用的洗脫液有THF，Chloroform等等。
2.凝膠過濾色譜
凝膠過濾色譜（GelFiltrarionChromatography），簡稱GFC。此一種類的層析法，使用於水溶媒的試劑中，如蛋白質、澱粉及水性合成高分子等等，而所用的溶液有水、緩沖液等等。
凝膠的種類很多，按其原料來源可分為有機膠和無機膠。按其制備的方法又可分為均勻、半均勻和非均勻三種凝膠。而根據凝膠的強度又可分為軟膠、半硬膠和硬膠三大類。根據它對溶劑的適用范圍又可分為親水性、親油性和兩性凝膠等等。

『伍』 高效液相色譜儀原理及操作步驟

1. 高效液相色譜儀原理
高效液相色譜儀原理 高效液相色譜儀的使用和原理分析
高效液相色譜法（HPLC）是目前應用廣泛的分離、分析、純化有機化合物（包括能通過化學反應轉變為有機化合物的無機物）的有效方法之一。

在已知的有機化合物中，約有80%能用高效液相色譜法分離、分析，而且由於此法條件溫和，不破壞樣品，因此特別適合高沸點、難氣化揮發、熱穩定性差的有機化合物和生命物質。HPLC系統一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數據記錄及處理裝置等組成。

其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關鍵部位。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、與柱或保護住、柱溫控制器等，現代HPLC儀還有微機控制系統，進行自動化儀器控制和數據處理。

制備型HPLC儀還備有自動餾分收集裝置。目前常見的HPLC儀生產廠家國外有Waters 公司、Agilent 公司（原HP公司）、島津公司等，國內有上海伍豐科學儀器有限公司，上海禾工科學儀器有限公司，大連依利特公司、北京創新通恆、北京溫分等。

一、輸液泵1.泵的構造和性能輸液泵是HPLC系統中最重要的部件之一。泵的性能好壞直接影響到整個質量和分析結果的可靠性。

輸液泵應具備如下性能：①流量穩定，其RSD應小於0.5%，這關繫到定性定量的准確性；②流量范圍寬，分析型應在0.1~10ml/min范圍內連續調，制備型應能達到100ml/min；③輸出壓力高，一般應能達到150~300KG/CM2：④液缸容積小；⑤密封性能好，耐腐蝕。泵的種類很多，按輸液性質可分為恆壓泵和恆流泵。

恆流泵按結構又可分為螺旋注射泵、柱塞往復泵和隔往復泵。恆壓泵受柱陰影響，流量不穩定；螺旋泵缸體太大，這兩種泵己被淘汰目前應用最多的是柱塞往復泵。

柱塞往復泵的液缸容積小，可至0.1ml，因此易於清洗和更換流動相，特別適合於再循環和梯度洗脫；改變電機轉速能方便地調節流量，流量不受柱壓影響；泵壓可達400KG/CM2。ADW主要缺點是輸出的脈沖性較大，現多彩採用雙泵系統來克服。

雙泵按連接方式可分為並聯式和串聯式，一般說來並聯泵的流量重現性較好（RSD為0.1%左右，串聯泵為0.2~0.3%），但出現故障的機會較多（因多了單向閥），價格也較貴。二、進樣器一般HPLC分析常用六通進樣閥（以美國RHEODYNE公司的7725和7725I型最常見），其關鍵部件由圓形密封墊子（轉子）和固定底座（定子）組成。

耐高壓（35~40MPA），進樣量准確，重復性好（0.5%），操作方便。六通閥進樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。

①用部分裝液法進樣時，進樣量應不大於定量環體積的50%（最多75%），並要求每次進樣體積准確、相同。此法進樣的准確度和重復性決定於注器取樣的熟練程度，而且易產生由進樣引起的峰展寬。

②用完全裝液法進樣時，進樣量應不小於定量環體積的5~10倍9最少3倍，這樣才能完全置換定量環內和流動相，消除管壁效應，確保進樣的准確度及重復性。三、色譜柱色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。

對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用於HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10UM等，柱效理論值可達5~16萬/米。

對於一般的分析只需5000塔板數的柱效；對於同系物分析，只要500即可；對於較難的分離物質對則可採用高達2萬的柱子，因此一般10~30CM左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要。柱效受柱內外因素影響，為使色譜柱達到最佳效率，除柱外死體積要小外，不要有合理的柱結構（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術。

即使最好的裝填技術，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏鬆，易產生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應。這種管壁區大約是從管壁向內算起30倍料徑的厚度。

在一般的液相色譜系統中，柱外效應對柱效的影響遠遠大於管壁效應。四、檢測器HPLC的檢測器分為兩類：通用型檢測器和專用型檢測器。

1.通用型檢測器可連續測量色譜柱的流出物的全部特性變化，通常採用差分測量法，這類檢測器包括示差折光檢測器、介電常數檢測器、電導檢測器等，通用檢測器適用范圍廣，但由於對流動相有響應，因此易受溫度變化、流動相和組分的變化的影響，雜訊和漂移都比較大，靈敏度較低，不能用梯度洗脫。2.專用型檢測器用以測量被分離樣品組分某種特性的變化。

這類檢測器對樣品中組分的某種物理或化學性質敏感，而這一性質是流動相所不具備的，或至少在操作條件下不顯示。這類檢測器包括紫外檢測器、熒光檢測器、放射性檢測器等。
高效液相色譜儀的工作原理？
高效液相色譜儀工作原理；高壓泵將貯液罐的流動相經進樣器送入色譜柱中，然後從檢測器的出口流出，這時整個系統就被流動相充滿。當欲分離樣品從進樣器進入時，流經進樣器的流動相將其帶入色譜柱中進行分離，分離後不同組分依先後順序進入檢測器，記錄儀將進入檢測器的信號記錄下來，得到液相色譜圖。

高效液相色譜法是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送，色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高於經典液相色譜（每米塔板數可達幾萬或幾十萬），同時柱後連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續檢測。

(5)硼酸液相色譜的檢測方法擴展閱讀

高效液相色譜儀配置高壓二元泵或者低壓四元泵，而泵的沖程體積以及混合器的體積大小，均會對色譜基線噪音水平產生影響，特別是在梯度洗脫的時候。一般地泵的沖程體積越小以及混合器的體積相對越大，由輸液造成的脈沖相對越小，對於梯度變化的響應能力越高，基線越平緩，

在應用二元泵的時，需要注意的是，當二元混合中的其中一元流動相的比例小於5%的時候，特別是在使用正相等度洗脫對一些醫葯中間體及終產品進行手性拆分的時候，最好使用單泵預混合的方式。避免由於泵在低比例時泵液精度相對較差，而導致色譜基線出現沖程相關峰，

參考資料來源；搜狗網路--高效液相色譜儀
高效液相色譜儀的基本工作原理
高效液相色譜儀的基本工作原理

高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相） 內， 由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數， 在兩相中作相對運動時， 經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程， 各組分在移動速度上產生較大的差別， 被分離成單個組分依次從柱內流出， 通過檢測器時， 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式列印出來。
HPLC原理是什麼
原理： 儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內，由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別。

被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據就可以以圖譜形式列印出來，以便研究人員分析。 (5)硼酸液相色譜的檢測方法擴展閱讀： 高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱「高壓液相色譜」、「高速液相色譜」、「高分離度液相色譜」、「近代柱色譜」等。

①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。 ②高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15~30分鍾，有些樣品甚至在5分鍾內即可完成，一般小於1小時。

③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

④高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。 ⑤應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

⑥柱子可反復使用：用一根柱子可分離不同化合物 ⑦樣品量少、容易回收：樣品經過色譜柱後不被破壞，可以收集單一組分或做制備。 此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。

高效液相色譜的缺點是有「柱外效應」。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。

高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。 HPLC使用的色譜柱是很細的（1~6 mm），所用固定相的粒度也非常小（幾μm到幾十μm），所以流動相在柱中流動受到的阻力很大，在常壓下，流動相流速十分緩慢，柱效低且費時。

為了達到快速、高效分離，必須給流動相施加很大的壓力，以加快其在柱中的流動速度。為此，須用高壓泵進行高壓輸液。

高壓、高速是高效液相色譜的特點之一。HPLC使用的高壓泵應滿足下列條件： a. 流量恆定，無脈動，並有較大的調節范圍（一般為1~10 mL/min）; b. 能抗溶劑腐蝕； c. 有較高的輸液壓力；對一般分離，60*10^5Pa的壓力就滿足了，對高效分離，要求達到150~300*10^5Pa。

⑴往復式柱塞泵 當柱塞推入缸體時，泵頭出口（上部）的單向閥打開，同時，流動相進入的單向閥（下部）關閉，這時就輸出少量的流體。 反之，當柱塞向外拉時，流動相入口的單向閥打開，出口的單向閥同時關閉，一定量的流動相就由其儲液器吸入缸體中。

這種泵的特點是不受整個色譜體系中其餘部分阻力稍有變化的影響，連續供給恆定體積的流動相。 ⑵氣動放大泵 其工作原理是：壓力為 p1 的低壓氣體推動大面積（ SA ）活塞A ，則在小面積（ SB ）活塞 B 輸出壓力增大至 p2 的液體。

壓力增大的倍數取決於 A 和 B 兩活塞的面積比，如果 A 與 B 的面積之比為 50 : 1 ，則壓力為 5 * Pa 的氣體就可得到壓力為 250*Pa 的輸出液體。這是一種恆壓泵。

參考資料：網路——高效液相色譜。
HPLC儀的工作原理是什麼？
高效液相色譜法是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達4.9´107Pa）；色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高於經典液相色譜（每米塔板數可達幾萬或幾十萬）；同時柱後連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續檢測。

特點 1.高壓：液相色譜法以液體為流動相（稱為載液），液體流經色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150~350*105Pa。

2. 高速：流動相在柱內的流速較經典色譜快得多，一般可達1~10ml/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經典液相色譜法少得多，一般少於 1h 。

3. 高效：近來研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高。 4.高靈敏度：高效液相色譜已廣泛採用高靈敏度的檢測器，進一步提高了分析的靈敏度。

如熒光檢測器靈敏度可達10-11g。另外，用樣量小，一般幾個微升。

5.適應范圍寬：氣相色譜法與高效液相色譜法的比較：氣相色譜法雖具有分離能力好，靈敏度高，分析速度快，操作方便等優點，但是受技術條件的限制，沸點太高的物質或熱穩定性差的物質都難於應用氣相色譜法進行分析。而高效液相色譜法，只要求試樣能製成溶液，而不需要氣化，因此不受試樣揮發性的限制。

對於高沸點、熱穩定性差、相對分子量大（大於 400 以上）的有機物（這些物質幾乎佔有機物總數的 75% ~ 80% ）原則上都可應用高效液相色譜法來進行分離、分析。 據統計，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約佔20%，而能用液相色譜分析的約佔70~80%。

高效液相色譜按其固定相的性質可分為高效凝膠色譜、疏水性高效液相色譜、反相高效液相色譜、高效離子交換液相色譜、高效親和液相色譜以及高效聚焦液相色譜等類型。用不同類型的高效液相色譜分離或分析各種化合物的原理基本上與相對應的普通液相層析的原理相似。

其不同之處是高效液相色譜靈敏、快速、解析度高、重復性好，且須在色譜儀中進行。 高效液相色譜法的主要類型及其分離原理 根據分離機制的不同，高效液相色譜法可分為下述幾種主要類型： 1 .液 — 液分配色譜法（Liquid-liquid Partition Chromatography）及化學鍵合相色譜（Chemically Bonded Phase Chromatography） 流動相和固定相都是液體。

流動相與固定相之間應互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。當試樣進入色譜柱，溶質在兩相間進行分配。

達到平衡時，服從於下式： 式中，cs—溶質在固定相中濃度；cm--溶質在流動相中的濃度； Vs—固定相的體積；Vm—流動相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決於K,K大的組分保留值大；但也有不同之處，GPC中，流動相對K影響不大，LLPC流動相對K影響較大。

a. 正相液 — 液分配色譜法（Normal Phase liquid Chromatography）： 流動相的極性小於固定液的極性。 b. 反相液 — 液分配色譜法（Reverse Phase liquid Chromatography）： 流動相的極性大於固定液的極性。

c. 液 — 液分配色譜法的缺點：盡管流動相與固定相的極性要求完全不同，但固定液在流動相中仍有微量溶解；流動相通過色譜柱時的機械沖擊力，會造成固定液流失。上世紀70年代末發展的化學鍵合固定相（見後），可克服上述缺點。

現在應用很廣泛（70~80%）。 2 .液 — 固色譜法 流動相為液體，固定相為吸附劑（如硅膠、氧化鋁等）。

這是根據物質吸附作用的不同來進行分離的。其作用機制是：當試樣進入色譜柱時，溶質分子 （X） 和溶劑分子（S）對吸附劑表面活性中心發生競爭吸附（未進樣時，所有的吸附劑活性中心吸附的是S），可表示如下： Xm + nSa ====== Xa + nSm 式中：Xm--流動相中的溶質分子；Sa--固定相中的溶劑分子；Xa--固定相中的溶質分子；Sm--流動相中的溶劑分子。

當吸附競爭反應達平衡時： K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa] 式中：K為吸附平衡常數。[討論：K越大，保留值越大。

] 3 .離子交換色譜法（Ion-exchange Chromatography） IEC是以離子交換劑作為固定相。IEC是基於離子交換樹脂上可電離的離子與流動相中具有相同電荷的溶質離子進行可逆交換，依據這些離子以交換劑具有不同的親和力而將它們分離。

以陰離子交換劑為例，其交換過程可表示如下： X-（溶劑中） + （樹脂-R4N+Cl-）=== （樹脂-R4N+ X-） + Cl- （溶劑中） 當交換達平衡時： KX=[-R4N+ X-][ Cl-]/[-R4N+Cl-][ X-] 分配系數為： DX=[-R4N+ X-]/[X-]= KX [-R4N+Cl-]/[Cl-] [討論：DX與保留值的關系] 凡是在溶劑中能夠電離的物質通常都可以用離子交換色譜法來進行分離。 4 .離子對色譜法（Ion Pair Chromatography） 離子對色譜法是將一種 （ 或多種 ） 與溶質分子電荷相反的離子 （ 稱為對離子或反離子 ） 加到流動相或固定相中，使其與溶質離子結合形成疏水型離子對化合物，從而控制溶質離子的保留行為。

其原理可用下式表示： X+水相 + Y-水相 === X+Y-有機相 式中：X+水相--流動相中待分離的有機離子（也可是陽離子）；Y-水相--流動相中帶相反電荷的離子對（如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等）；X+Y---形成的。
液相色譜儀使用及工作原理
工作原理： 流動相通過輸液泵流經進樣閥，與樣品溶液混合，流經色譜柱，在色譜柱中進行吸附、分離，最後每一組分分別經過檢測器轉變為電訊號，在色譜工作站上出現相應的樣品峰。

液相色譜的使用： 首先對樣品進行預處理，然後進樣，進樣完畢後，清洗進樣口，每次分析結束後，清洗通道，最後關閉儀器。 (5)硼酸液相色譜的檢測方法擴展閱讀： 液相色譜所用基本概念：保留值、塔板數、塔板高度、分離度、選擇性等與氣相色譜一致。

液相色譜所用基本理論：塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致，但由於在氣相色譜中以液體代替氣相色譜中氣體作為流動相，而液體和氣體的性質不相同。 此外，液相色譜所用的儀器設備和操作條件也與氣相色譜不同，所以，液相色譜與氣相色譜有一定的差別。

主要有以下幾力『面： ①操作條件及應用范圍不同 對於氣相色譜，是加溫操作。僅能分析在操作溫度下能汽化而不分解的物質，對高沸點化合物、非揮發性物質、熱不穩定化合物、離子型化合物及高聚物的分離、分析較為困難，致使其應用受到一定程度的限制，據統計只有大約20%的機物能用氣相色譜分析。

而液相色譜是常溫操作，不受樣品揮發度和熱穩定性的限制，它非常適合相對分子量較大，難汽化，不易揮發或對熱敏感的物質、離子型化合物和高聚物的分離分析，大約佔有機物的70%~80%。 ②液相色譜能完成難度較高的分離工作 a.氣相色譜的流動相載氣是色譜惰性的，基本不參與分配平衡過程，與樣品分子無親和作用，樣品分子主要與固定相相互作用。

而在液相色譜中流動相液體也與固定相爭奪樣品分子，為提高選擇性增加了一個因素。也可選擇不同比例的兩種或兩種以上的液體做流動相，增加分離的選擇性。

b.液相色譜固定相類型多，如離子交換色譜和排阻色譜等，作為分析時，選擇餘地大；而氣相色譜並不可能。 c.液相色譜通常在室溫下操作，較低的溫度，一般有利於色譜分離條件的選擇。

③由於液體的擴散性比氣體的小105倍，因此，溶質在液相中的傳質速率慢，柱外效應就顯得特別重要；而在氣相色譜中，由色譜柱外區域引起的擴張可以忽略不計。 ④液相色譜中，制備樣品簡單，回收樣品也比較容易，而且回收是定量的，適合於大量制備，但液相色譜尚缺乏通用的檢測器，一起比較復雜，價格昂貴。

在實際應用中，這兩種技術是相互補充的。 綜上所述，液相色譜具有柱效高，選擇性高，靈敏性高，分析速度快，重復性好，應用范圍廣等優點，該法已成為現代分析技術的主要手段之一。

目前在化學，化工，醫葯，生化，環保，農業等科學領域獲得廣泛的應用。 高效液相色譜應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。

（1）分離混合物 高效液相色譜法只要求樣品能製成溶液，不受樣品揮發性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。 通過與試樣預處理技術相配合，高效液相色譜法所達到的高解析度和高靈敏度，可分離並同時測定性質上十分相近的物質，能夠分離復雜混合物中的微量成分。

並且隨著固定相的發展，還可在充分保持生化物質活性的條件下完成對其的分離。 （2）生化分析 由於高效液相色譜法具有高解析度、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫葯研究、環境分析、無機分析等各種領域，並已成為解決生化分析問題最有前途的方法。

（3）儀器聯用 高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。高效液相色譜一質譜聯用技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農葯和多核芳烴等：高效液相色譜一紅外光譜聯用也發展很快，如在環境污染分析測定水中的烴類等.使環境污染分析得到新的發展 參考資料：網路——液相色譜。
液相色譜儀的原理是什麼？用來干什麼？
液相色譜儀的原理： 儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內，由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式列印出來。

主要用於對高沸點、難氣化合物的混合物通過色譜柱核淋洗劑並以實現分離。應用於生物化學、生物醫學、環境化學、石油化工等部門。

(5)硼酸液相色譜的檢測方法擴展閱讀液相色譜儀根據固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜（LLC）及液-固色譜（LSC）。現代液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統、溫度控制系統、色譜柱、檢測器、信號記錄系統等部分組成。

與經典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點。 高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。

進樣系統一般採用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恆定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。

輸液系統該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l.47~4.4X10Pa，流速可調且穩定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高解析度、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

分離系統該系統包括色譜柱、連接管和恆溫器等。色譜柱一般長度為10~50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管），內徑為2~5mm，由"優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料製成，住內裝有直徑為5~10μm粒度的固定相（由基質和固定液構成）。

『陸』 液相色譜，對被檢測物有什麼要求么，使用液相色譜應該做些什麼准備

1. 對被測物只要求樣品能製成穩定的溶液。液相色譜不受樣品揮發性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。

2. 使用前應對被測物的組成、性質（光譜信息、溶解性、化學結構）有一定的了解，針對以上信息來決定使用何種固定相、流動相、檢測器以及樣品配製方法。還可查閱一下類似物質的分析方法，結合實際工作情況，來確定適用的分析方法。

大概就這么多吧，這些說起來很簡單，實際上是做起來是很復雜的工作。