糖類鑒別化學方法苯酚硫酸法

① 苯酚-硫酸法測定多糖的原理

原理
多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，並迅速脫水生成糖醛衍生物，然後與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。
試劑
1．
濃硫酸：分析純，95.5%
2．
80%苯酚：80克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。
3．
6%苯酚：臨用前以80%苯酚配製。（每次測定均需現配）
4．
標准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析純葡萄糖。
5．
15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。
6．
5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。
7．
6mol/L
氫氧化鈉：120克分析純氫氧化鈉溶於500ml水。
8．
6mol/L
鹽酸
操作
1．製作標准曲線：准確稱取標准葡聚糖（或葡萄糖）20mg於500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補至2.0ml，然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鍾以後於490nm測光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為多糖微克數，縱坐標為光密度值，得標准曲線。
2．樣品含量測定：
①取樣品1克（濕樣）加1ml
15%TCA溶液研磨，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液於10毫升離心管中，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液，重復3次。最後一次將殘渣一起到入離心管。注意：總的溶液不要超出10毫升。（既不要超出離心管的容量）。
②離心，轉速3000轉/分鍾，共三次。第一次15分鍾，取上清液。後兩次各5分鍾取上清液到25毫升錐形比色管中。最後濾液保持18毫升左右。（測肝胰腺樣品時，每次取上清液時應過濾。因為其脂肪含量大容易夾帶殘渣。）
③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L
鹽酸之後搖勻，在96℃水浴鍋中水浴2小時。
④定容取樣。水浴後，用流水冷卻後加入2毫升6mol/L
氫氧化鈉搖勻。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2
ml的樣品液，以蒸餾補至2.0ml，然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置20分鍾以後於490nm測光密度。每次測定取雙樣對照。以標准曲線計算多糖含量。
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② 硫酸苯酚法與苯酚硫酸法測定多糖有什麼區別

多糖類化合物是許多中草葯的有效成分之一，但多糖多無法直接測定，苯酚�硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下，水解成單糖分子，並迅速脫水生成糖醛衍生物，然後與苯酚形成有色化合物，再用分光光度計進行檢測。苯酚�硫酸法是測定多糖含量的常用方法之一，具有簡便、快速、准確、靈敏的特點，在實驗中發現，該法中苯酚和濃硫酸的比例十分關鍵，須控制為1�5，同時應保證溶液中硫酸的濃度，故文中多糖溶液移取體積為1.00 mL。另外，硫酸的加入方法不同對顯色結果也有影響，故在操作過程中盡量由同一試驗人員進行操作。

硫酸苯酚法測定雲芝多糖含量的效果
摘要 雲芝多糖成分復雜,測定比較困難。試驗表明,硫酸苯酚法是測定雲芝多糖含量的一種理想方法。其具有快速、穩定、靈敏度高和重現性好等優點。
關鍵詞 雲芝多糖 含量測定 硫酸苯酚法
雲芝屬擔子菌亞門多孔菌科雲芝菌屬的真菌。從雲芝菌子實體中提取的雲芝多糖具有抗腫瘤、抗乙肝病毒、提高人體免疫功能等作用,同時對人體無毒副作用,長期食用無不良反應。因此,除可用作治療乙肝和癌症病人在放療、化療過程中理想的輔助葯物外,還可作為延緩老年性疾病發生的保健食品。目前,人們多從雲芝菌子實體中提取雲芝多糖,加工成各類制劑。衡量此類葯品質量的標准主要是看其雲芝多糖含量的多寡。鑒於雲芝多糖成分較為復雜,目前國內尚無理想的測定其含量的方法,特此用硫酸苯酚法對雲芝多糖含量進行了測定試驗。1 試驗材料1.1 儀器UV-756分光光度計(上海第三分析儀器廠產品)。1.2 試劑雲芝多糖樣品由上海萊福多糖製品有限公司提供,其它化學試劑均為國產分析純。雲芝多糖純品的制備詳見文獻2。2 測定方法2.1 葡萄糖標准溶液的配製精確稱取105℃乾燥恆重的葡萄糖200mg,置於100ml容量瓶中,定容,搖勻。取1ml溶液於50ml容量瓶中定容,搖勻(含葡萄糖40mg/L),備用。分別吸取葡萄糖標准溶液0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6,1.8ml,用蒸餾水補充至2.0ml,加入6%的苯酚溶液1ml,靜止10分鍾,搖勻,室溫下放置20分鍾,於490nm處測定吸光度(以2.0ml蒸餾水作為空白對照),求得回歸方程為:A=-0.06161+3.4190C1 (r=0.9990)其中,A表示吸光度,C1為葡萄糖濃度。2.2 換算因子的測定精確稱取雲芝多糖純品150mg,配成適當濃度,依照標准曲線方法測定吸光度。根據回歸方程計算換算因子f=W/(C2×D),其中f為換算因子,W為樣品重量,C2為供試液相當於葡萄糖濃度(g/L),D為稀釋倍數,測得f=1.38。2.3 待測雲芝多糖溶液制備精確稱取雲芝多糖樣品0.3000g,加80℃熱溶解,定容100ml(可適當再稀釋),搖勻,備用。2.4 雲芝多糖含量測定吸待測樣溶液2.0ml,加入6%苯酚1ml,靜置10分鍾,搖勻,室溫下放置20分鍾,在490nm處測吸光度。按下式計算多糖含量。雲芝多糖含量(%)=C2×D×f/W×100%2.5 雲芝多糖吸收曲線確定用葡萄糖標准溶液和雲芝多糖純品按測定方法分別顯色,全波長掃描。掃描圖譜見附圖。附圖 葡萄糖和雲芝多糖的掃描圖譜 由附圖看出,雲芝多糖經硫酸苯酚法顯色後,幾個秋蘿卜品種(系)的農藝性狀比較李先芳(鄭州牧業工程高等專科學校,鄭州450008)劉艷波(鄭州市蔬菜研究所) 1996年我們在鄭州市蔬菜研究所進行了新育秋蘿卜品種(系)比較試驗,旨在為河南省蘿卜區域試驗和示範推廣提供優良品種。1 材料與方法供試秋蘿卜品種(系)6個,詳見表1試驗採用隨機區組排列,3次重復。株行距26cm×33cm,小區面積4.32m2,每小區27株,周圍設保護行。田間管理方法同大田生產。1996年8月14日播種,播後觀察記載各品種(系)生育期、植物學性狀、病害等,收獲時分區計產,折算畝產。2 結果與分析2.1 各品種(系)的生育時期6個品種(系)均8月18日出苗,9月16日定苗,11月10日收獲,生育期86天。其中,90-12、90-13、豐光一代、大青皮破肚和定樁比德日2號、國光一號早1天(表1)。2.2 各品種(系)植株性狀從表2看出,除90-13為板葉外,其餘均為花葉,但大青皮、德日2號、國光一號雜板葉較多,一般於苗期分苗時將其拔除。豐光一代株形較大,其次為德日2號;90-13和90-12株形較1999-03-20收稿。其最大吸收峰為490nm,與葡萄糖基本相同。2.6 顯色時間以雲芝多糖純品為樣品,在20℃下顯色不同時間,分別測定吸光度,結果見表1。表1 雲芝多糖顯色不同時間吸光度顯色時間(min)吸光度10.51550.515100.515150.516200.516250.516300.517350.517400.517顯色時間(min)吸光度450.518500.519550.519600.519650.521700.522750.524800.524850.525顯色時間(min)吸光度900.526950.000.5271050.5271100.5271150.5281200.5291250.5301300.530 從表1可以看出,顯色時間在30分鍾內吸光度非常穩定。2.7 樣品回收率測定精確稱量雲芝多糖樣品0.2000g,加入一定量的雲芝多糖純品,按測定步驟顯色,測吸光值,計算其含量,並計算出樣品回收率為101.8%,說明該測定方法相當准確。3 方法精確度測定分別取稱0.3000g雲芝多糖樣品5份,用本法分別測定其雲芝多糖含量,結果見表2。經計算其RSD=1.12%,說明本法測定精確度較高。表2 雲芝多糖含量測定方法精確度測定結果項目樣品號12345雲芝多糖含量(%)51.2947.4448.8049.7248.724 小結研究結果表明,用硫酸苯酚法測定雲芝多糖含量,快速、穩定、靈敏度高、重現性好。而其它測定方法對雲芝多糖含量的測定效果還有待進一步研究

③ 測定糖類的主要方法有哪些

4種糖的測定方法
總結：
1、 直接滴定法。
原理為 糖還原天藍色的氫氧化銅為紅色的氧化亞銅。缺點：水樣中的還原性物質能對糖的測定造成影響。
2、 高錳酸鉀滴定法。
所用原理同直接滴定法。缺點：水樣中的還原性物質能對糖的測定造成影響，過程較為復雜，誤差大。
3、硫酸苯酚法。
糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用於甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，並且產生的顏色穩定160min以上。
缺點：如果水樣呈橙紅色（大部分水樣為黃色），會對比色法造成較大的干擾。
4、蒽酮法
糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用於糖的測定。
缺點：，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。
綜合比較；採用蒽酮法能將最為准確地測定尾水中糖的含量。

④ 硫酸苯酚法測多糖有什麼要特別注意嗎

1、製作標准線宜用相應的標准多糖，如用葡萄糖，應以校正系數0.9校正μg數。

2、對雜多糖，分析結果可根據各單糖的組成比及主要組分單糖的標准曲線的校正系數加以校正計算。

3、測定時根據光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.1——0.3之間。比如：小於0.1之下可以考慮取樣品時取2克，仍取0.2ml樣品液，如大於0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。

(4)糖類鑒別化學方法苯酚硫酸法擴展閱讀：

苯酚法測定可溶性糖的原理是：糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10～100ug范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。

苯酚法可用於甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，基本不受蛋白質存在的影響，並且產生的顏色穩定160min以上。