用酶檢測表面抗原方法

Ⅰ 乙肝病毒表面抗原酶聯免疫法檢測的實驗報告怎麼寫

酶免疫技術的基本原理是用酶標記的抗體（或抗原）與標本中的相應抗原（或抗體）特異性結合，用酶催化底物反應的生物放大作用顯示免疫復合物的存在，提高檢測檢測抗原抗體復合物的敏感性，基於上述基本原理，臨床的應用發展主要有酶免疫組化技術和酶免疫測定技術兩種。
酶免疫測定技術根據抗原抗體反應是否需要分離結合酶標記物與游離酶標記物又分為均相測定和異相測定。其中異相測定又根據反應介質的物理狀態分為液相沒免疫測定和固相酶免疫測定。
你所講的檢測乙肝病毒標志物的酶聯免疫法(全名：酶聯免疫吸附試驗 英文名：ELISA)就屬於固相酶免疫測定。它的基本原理是：將抗原（或抗體）吸附在聚苯乙烯（載體）反應板上後，加入酶標記抗體（或酶標記抗原）與相應抗原（或抗體）特異性結合；使得酶也結合到載體上，洗去游離的酶標記抗體（或酶標記抗原），加入底物顯色，根據顏色的深淺和有無進行定性或定量分析。從它的原理看出此方法它有三大必備要素：1、固相抗原或抗體2、酶標記抗體或抗原3、底物。
ELISA法有幾種類型，有雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、雙位點一步法、間接法、競爭抑製法、捕獲法。類型不同具體的操作步驟和反應原理又不同。檢驗結果的判定也不同。請參考專業臨床醫學檢驗教科書或檢驗試劑里的說明書。

Ⅱ 乙肝表面抗原攜帶者

乙肝表面抗原攜帶者

乙肝表面抗原攜帶者，在日常生活中，相信大家都聽說過乙肝這種病症，這種病症是會傳染的，乙肝表面抗原攜帶者如果不加註意，以後不容樂觀。下面分享乙肝表面抗原攜帶者的文章。

乙肝表面抗原攜帶者1

每一個病都會有導致其發生的原因，那麼乙肝的發病原因是什麼呢？誘發乙肝的原因之一在於急性肝炎，急性肝炎會誘發乙肝主要是因為當人體感染乙肝病毒後，體內的T細胞會攻擊肝臟細胞，並使其釋放入血的乙肝病毒，並與特異性抗體所結合，使得干擾素生成增多。

乙肝表面抗原的亞型

一起來了解一下乙肝表面抗原的亞型吧，乙肝病毒的表現型是其血清亞型（subtype），由外膜主蛋白上的一些殘基決定。主蛋白攜帶兩對相互排斥的亞型決定簇 d/y 和 w/r ，由此組成乙肝表面抗原的4個主要亞型：adw、adr、ayw、ayr。adr亞型主要分布歷伍雀在東亞地區，與這一地區流行的C基因型一致。

乙肝表面抗原的測定方法

乙肝的測定方法在我國是比較成熟的，也是比較科學准確的。中國最常使用的測定表面抗原的方法是酶聯免疫吸附試驗（ELISA），其次是放射免疫試驗（RIA）。ELISA簡單、方便、快速，進口試劑盒可測到的血清表面抗原最低濃度為0.2ng/ml，國產試劑盒目前能達到0.5ng/ml。

乙肝表面抗原需要注意很多

如果患上了這樣的症狀，我們需要去注意很多的事情在我們的生活中。中國有1.2億乙肝表面抗原攜帶者，盡管乙肝表面抗原攜帶者沒有明顯的肝炎症狀和體征，肝功能也基本正常，除了部分工作（如飲食服務、幼教保育人員）從業受限制外，其他完全可以與正常人一樣地工作學習。因此，乙肝表面抗原攜帶者在日常生活中需要注意很多的問題。

乙肝表面抗原攜帶者2

乙肝表面抗原陰性是什麼

乙肝表面抗原是感染乙肝病毒的一個指標。乙肝表面抗原是乙肝病毒的外殼，它本身不具有傳染性，但它的存在表示人體已經感染了乙肝病毒。乙肝表面抗原陰性則代表沒有乙肝病毒感染，若是乙肝五項全陰，應及時的注射乙肝疫苗。

檢查結果為乙肝表面抗原陰性的患者也不能放鬆警惕，尤其是一些乙肝患者乙肝表面抗原呈陰性，過了一段時間後又復發了，這種情況是乙肝病毒變異所造成。此時的乙肝表面抗原陰性是一種假象，必須定期檢查乙肝表面抗原定量，及時的進行抗病毒治療。

乙肝表面抗原是什麼意思

乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的外殼蛋白，本身不具有傳染性，但它的出現常伴隨乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的標志。在不同的醫院，乙肝表面抗原正常值范圍會有很大不同。乙肝表面抗原正常值的范圍採用不同的表示方法，其值也有所不同。乙肝表面抗原正常值主要有以下幾種表示方法：

1、ng/ml表示法

如果乙肝表面抗原正常值（ng/ml）大於0.18ng/ml，那麼就表示該患者體內有乙肝病毒，橘凱乙肝表面抗原而被視為陽性結果，反之被認為是陰性。

2、S/CO值表示法

如果乙肝表面抗原正常值（S/CO）大於1S/CO，那麼就表示該患者體內有乙肝病毒，乙肝表面抗原而被視為陽性結果，反之被認為是陰性。

3、S/N值表示法

AXSYM免疫分析儀得到S/N的值，如果乙肝表面抗原正常值（S/N）大於2.1S/N，那麼就表示該患者體內有乙肝病毒，乙肝表面抗原而被視為陽性結果，反之被認為是陰性。

乙肝表面抗原陽性

乙型肝炎表面抗原陽性，表示體內已感染乙肝病毒。在急性感染中，乙肝表面抗原一般持續存在1-6個月，如果之後乙肝表面抗原轉陰表明急性乙肝已經治癒，若仍肢早然為陽性，便變成慢性乙肝，若乙肝表面抗原出現過多，便成為爆發性急性肝炎。乙肝表面抗原（HBsAg）陽性是體內存在乙肝病毒感染的標志之一。

1、乙肝潛伏期。人體感染乙肝病毒後，在感染者血清中最早出現的乙肝表面抗原陽性。一般在乙肝發病前2-3周已呈陽性，發病時達高峰，80%的感染者在發病後4周內消失。

2、體檢或驗血偶然發現乙肝表面抗原陽性，可能是無症狀的乙肝病毒攜帶者，亦可能是感染後因症狀輕微而未及時診治，發現時肝功能已恢復正常，但HBsAg陽性。此類人群需經常檢查肝功能，出現異常及時治療。

3、慢性乙肝。有症狀和體征，不僅乙肝表面抗原陽性，同時有乙肝病毒e抗原（HBeAg）陽性，且血清轉氨酶又經常升高，這種情況表示患者體內病毒在繁殖，對肝臟不斷損傷，最後可發展為肝硬化，少數可發生肝癌，應積極治療。

乙肝表面抗原弱陽性

在乙肝兩對半檢查中，乙肝表面抗原（HBsAg）陽性是已經感染病毒的標志。乙肝表面抗原弱陽性表示感染了乙肝但是乙肝病毒數量少，病毒復制慢，傳染能力較弱。

1、乙肝表面抗原弱陽性對於正在進行治療的乙肝患者來說，是一種好的'現象，它表明乙肝表面抗原正在進行血清轉化，即表面抗原陰轉，表面抗體陽轉，這是一個轉變的過程。說明患者的病情正在好轉，應該堅持積極的治療。

2、乙肝表面抗原弱陽性是代表人體感染了乙肝，但是病毒復制比較慢，傳染性較弱。出現乙肝表面抗原弱陽性絕對不能輕視，尤其是乙肝小三陽患者。這種情況應該及時的進行治療，否則病情會進一步加重，最後演變成為肝硬化或者是肝癌。

乙肝表面抗原攜帶者

很多人不明白乙肝表面抗原攜帶者，總是將乙肝表面抗原攜帶者和乙肝病毒攜帶者混淆在一起，認為二者是一個意思，其實這樣理解是錯誤的。

乙肝表面抗原攜帶者是指血液中單項乙肝表面抗原（HBsAg）陽性超過半年，但沒有肝炎症狀和體征，各項肝功能檢查指標正常的人。而乙肝病毒攜帶者是指人體血液中感染了乙肝病毒，病程超過半年，但沒有肝炎病狀和體征，各項肝功能檢查指標正常，乙肝五項檢查可能是乙肝大三陽或乙肝小三陽。

1、乙肝表面抗原攜帶者應定期到醫院隨訪檢查。如果在檢查發現e抗原陽性，則表明有較強的傳染性，應進一步檢查治療。如果發現疲乏無力、食慾不振，就要及時到醫院就診。

2、乙肝表面抗原攜帶者孕婦在孕育時，應對新生兒在出生後24小時內注射高效價乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗，並且盡量不要母乳喂養。

3、乙肝表面抗原攜帶的飲食要注意「三高一低」，即較高的碳水化合物、維生素、蛋白質和較低的脂肪。同時禁止煙酒，節制性生活，養成良好的生活習慣，運動要適度。

乙肝表面抗原攜帶者如果不加註意，預後不容樂觀。據了解大多數乙肝表面抗原攜帶者的肝細胞都有受到不同程度的損傷。因此，乙肝表面抗原攜帶者必須時刻注意檢查治療。

Ⅲ 酶聯免疫吸附法怎麼檢測血中igm用什麼載體

1）HBsAg雙抗體夾心法，載體（多是塑料製品）吸附乙肝表面抗體與血清中HBsAg和酶結合物（抗體）形成抗體-抗原-酶結合物復合物，酶復合物分解底物（供氫體多是四甲基聯苯胺）生成藍色復合物。2）HBsAb雙抗原夾心法，載體吸附乙肝表面抗原與血清HBsab和加入酶結合物（酶抗原）形成抗原-抗體-酶抗原復合物，復合物分解底物產生藍色復合物。3）HBeAg雙抗體夾心法，原理則大同HBsAg4）HBeAb競爭法，載體吸附槐銷抗原與血清中HBeAb結合形成復合物，再加入酶鉛盯游結合物（抗體），由於載體沒有多餘抗原結合位點，酶結合物處於游離狀態，在洗版時，酶結合物被洗掉，不能分解底物而無顏色反應，無色是陽性的結果；如果血清沒有HBeAb，載體抗原與酶結合物結合能分解底物顯L藍色，結果為陰性。5）HBcAb競爭法同HBeAb

Ⅳ 乙型肝炎表面抗原檢查簡介

目錄

• 1 拼音
• 2 允許進行乙型肝炎表面抗原檢查的職業

1 拼音

yǐ xíng gān yán biǎo miàn kàng yuán jiǎn chá

乙型肝炎表面抗原檢查是最常用的檢驗乙型肝炎病原體的試驗。以前又稱澳大利亞抗原或肝炎協同抗原。乙型肝炎病毒是DNA病毒。在乙肝病人血清中可發現3種形態不同的病毒顆粒。即大球形顆粒（Dane顆粒）、小球形及管狀顆粒。前者為完整的乙肝病毒顆粒，含有病毒的表面抗原（HBsAg）、核心抗原、e抗原及DNA 多聚酶等；後兩者的主要成分為HBsAg。HBsAg是一種含糖的脂蛋白，由6種多肽組成。有共同的抗原決定簇「a」和幾種亞型抗原決定簇d、y、w、r，按不同組合構成多種亞型。我國以adr型為多見。HBsAg有免疫原性，能 *** 機體產生抗體，起抵抗乙肝病毒的作用。HBsAg是乙型肝炎的一個重要診斷指標，多數急性乙型肝炎病人在疾病的潛伏期即可檢出HBsAg，在急性期達高峰，以後迅速下降。慢性活動性肝炎、慢性遷延性肝炎、肝炎後肝硬化、原發性肝癌等，也可檢出HBsAg。HBsAg攜帶者的血清中HBsAg陽性結果持續時間可能很長，但並不表現出疾病。HBsAg的檢查方法很多，有瓊脂免疫擴散法、對流電泳法、反向被動血凝法（RPHA）、酶聯免疫法、固相放射免疫法等。但前二者靈敏度不夠，已很少用。RPHA法操作簡單快速，不需特殊儀器，靈敏度高於前二者，為棗手目前應用較多之方法，但其靈敏度與特異性仍不如酶聯免疫法，故將會被酶聯免疫法所取代。放射免疫法雖然靈敏、特異，但須同位素標記，試劑來源不足，不宜推廣。肝炎病毒對乾燥與紫外線耐力強。可用高壓滅菌法或過氧乙酸浸泡等方法消毒。

2 允許進行乙型肝炎表面抗原檢查的職業

經衛生部核準的乙肝表面抗原攜帶者不得從事的職業和可以開展相關檢測的行業有：

1.根據人力資源和社會保障部發布的《公務員體檢特殊標准（試行）》，「乙肝病原散岩沒攜帶者，特警職位，不合格。」

2.根據《衛生部關於民航空勤人員體檢鑒定乙肝檢測調整意見的復函》要求，民航招收飛行學生體檢鑒定乙肝項目檢測，可以保留體檢鑒定乙肝項目檢測。

3.血站從事采血、血液成分制備、供血等業務工作的員工。根據《衛生部關於修訂<血站質量管理規范>「8·4」條的通知》(衛醫政發〔2010〕69號)要求，血站應「建立員工健康檔案。對從事采血、血液成分制備、供血等業務工作的員工，應當每年進行一次經血傳播病原體感染情況的檢測。對乙型肝炎病毒表面抗體陰性者，徵求本人意見沖納後，應當免費進行乙型肝炎病毒疫苗接種。」（衛生部政務公開辦公室2011年2月17日發布）

Ⅳ 酶標儀原理_酶標儀使用說明

酶標儀的檢測原理

光是電磁波，波長100nm～400nm稱為紫外光， 400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大於780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收了光中的紅色光譜。酶標儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。

檢測單位：

光通過被檢測物，前後的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系。

檢測單位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans為檢測物的透光值。根據Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強度成下述關系：

E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 為在檢測物之前的光強度，Ι為從被檢測物出來的光強度。

OD值由下述公式計算：

E＝OD=C×D×E

C為檢測物的濃度

D為檢測物的厚度

E為摩爾因子

在特定波長下測定每一種物質都有其特定的波長，在此波長下，此物質能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結果的不準確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進行檢測，稱為測量波長。

但是每一種物質對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準確性。在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。

Anthos 酶標儀檢測值計算

儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量，轉換成二進位數字信號，最大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0％，沒有檢測物的透光值為100％。則實際檢測中，檢測物的透光值均在 0％一100％之間。透光值

的計算如下：

T＝（Meas—Min）／（Max—Min）

其中T為透光值， Meas為檢測的二進位數值， Min為在 0％的情況下檢測的二進位數值， Max為在100％的情況下檢測的二進位數值，舉例如下：

MaX=3600 Mn=20 Meas＝30

T=（30-20）/3600-20)＝0．0028

OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552

Anthos 酶標儀的中心定位

儀器會自動對酶標孔進行中心定位，中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均伍茄差帶來檢測的不準確。在對每一個酶標儀進行檢測時，儀器其實要進行35個點的測量，選取最中間的5個點的均值為本孔的OD值。

光源的參照通道

參照通道是用來校準由於電壓不穩或燈泡磨損帶來的影響。

酶標儀的用途和其它提示

用於ELISA試劑的測定，廣泛用於各種實驗室，包括臨床實驗室。

質量控制

質量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進行質量控制腔皮。 空白校正

有一些試劑盒的說陰書將空白孔設置為空氣，其它大多數空白孔的設置是用試劑來設置的，請按照試劑盒的說明書要求進行。

檢測結果的解釋

由於有相當多的因素會影響檢測的結果，如不同的酶標板，檢測試劑的體積，都會造成OD值的不，因此，只有使用同一酶標板反應的試劑檢測結果才能比較和分析。對結果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進行。

酶標儀的使用注意事項

1、工作環境

酶標儀是一種精密的光學儀器，因此良好的工作環境不僅能確保其准確性和穩定性，還能夠延長其使用壽命。根據DIN VDE 0871條例，儀器應放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據DIN 45 635 －19條例：

儀器應放置在低於40分貝的環境下。

為延緩光學部件的老化，應避免陽光直射。

操作時環境溫度應在15℃－40℃之間，環境濕度在15％－85％之間。

操作電壓應保持穩定。

操作環境空氣清潔，避免水汽，煙塵。

保持乾燥、干凈、水平的工作檯面，以及足夠的操作空間。

2、操作注意事項

酶標儀的功能是用來讀取酶聯免疫試劑盒的反應結果，因此要得到准確結果，試劑盒的使用必須規范。許多醫院在使用酶標儀之前是通過目測判斷結果，操作過程隨意性較大，在使用酶標儀後如果不能及時糾正操作習慣，會造成較大誤差。在酶標儀的操作中應注意以下事項：

使用加液器加液，加液頭不能混用。

洗板要洗納高幹凈。如果條件允許，使用洗板機洗板，避免交叉污染。

嚴格按照試劑盒的說明書操作，反應時間准確。

在測量過程中，請勿碰酶標板，以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手。

請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內部，操作完成後請洗手。

如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學危害，請嚴格按照試

劑盒的操作說明，以防對操作人員造成損害。

如果儀器接觸過污染性或傳染性物品，請進行清洗和消毒。

不要在測量過程中關閉電源。

對於因試劑盒問題造成的測量結果的偏差，應根據實際情況及時修改參數，以達到最佳效果。

使用後蓋好防塵罩。

出現技術故障時應及時與廠家聯系，切勿擅自拆卸酶標儀。

酶標儀及洗板機選購指南

酶標儀（Microplate Reader）是對酶聯免疫檢測（ EIA）實驗結果進行讀取和分析的專業儀器。酶聯免疫反應通過偶聯在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進行的，反應結果以顏色顯示，通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標本中待測抗體或抗原的濃度。 酶標儀廣泛地應用在臨床檢驗、生物學研究、農業科學、食品和環境科學中，特別在近

幾年中，由於大量的酶聯免疫檢測試劑盒的應用，使得酶標儀在生殖保健領域中應用越來越廣泛，同時促進了生殖健康技術水平提高 。

目前國內許多計生站系統開展了酶免檢測項目，如：乙肝五項、愛滋病檢測、優生優 育系列檢測、激素檢測等。過去多數採用目測方法，報出的結果缺乏科學的依據。例如：某弓形蟲檢測試劑盒中，臨界值規定為：陰性對照品的 OD 值×2.5，通過目測無法判斷標本孔的反應顏色是否超過臨界值。肉眼進行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。

國內多家權威機構，如衛生部臨床檢驗中心和計劃生育系統等多次強調酶標儀的重要性，並要求酶聯免疫檢測試劑應使用酶標儀判讀，酶免試劑的質控也應使用酶標儀，並提供酶標儀測定的原始數據，而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶免檢測的 項目往往是一些實質性的感染和病變（如：肝炎、愛滋病、優生優育等），判讀更要求嚴謹，由誤診引起的糾紛很難處理。另外，住院手術病人術前的丙肝、愛滋等 EIA 試劑檢測是避免因輸血引起感染引發的醫療事故糾紛的必要手段，正逐漸被許多單位所採用。

我國免疫診斷方法主要有如下三種：酶免（EIA）、放免（RIA）和發光，在市場上的情況如下：

方法 所處市場周期

放免 衰退期

酶免 成長期

發光 進入期

放免技術由於試劑的污染和有效期等問題在國際和國內市場逐漸被淘汰，而化學發光試劑和設備比較昂貴，使得其在國內的普及特別在計生系統普及需要較長時間，EIA 技術穩定，試劑價格合理，供應充，酶免技術在中國市場處於成長期，因此購買酶標儀正合適宜。 尤其要提到的是，在中國的計劃生育和婦幼保健系統配備酶標儀已經迫在眉睫。早在幾年以前, 世界衛生組織已建議對孕婦進行 TORCH五項常規篩查，但是遺憾的是由於缺乏酶標儀和洗板機等設備，RCH的檢測在中國還未能普遍開展。TORCH 感染在圍產醫學中稱為TORCH綜合症，由於孕婦, 胎兒和新生兒都易被感染, 它已受到全世界婦產科和兒科的極大重視。妊娠期感染不僅危害母體，往往還可對胎兒和新生兒產生嚴重影響。通過胎盤可引起子宮內感染而導致流產、早產、死胎或胎兒生長遲緩和畸形，通過產道和母乳可引起新生兒感染。如累及神經系統可造成不同程度的智力障礙以及各種癱瘓、失聰、失明等嚴重後遺症，影響人口素質，因而 TORCH 感染與優生優育有極為重要的關系。因此，RCH（IgG和gM）檢查通常也稱為優生優育十項檢查。目前，TORCH的檢測方法主要有放免（RIA）和酶免(EIA)。由於放免方法需要特殊儀器，且有放射危害，目前正被酶免（EIA）方法取代。EIA方法具有特異性強，靈敏度高，簡單快速，成本低等優點，只要配備有酶標儀和其他相應的設備 ，多數普通實驗室均可方便地開展 。 很顯然, 盡快在計生系統普及酶標儀等設備是一個迫切的需求。

這項工作的落實將有助於提高診治水平，降低母嬰發病率，從而提高整個國民的健康素質。目前市場上提供的EIA試劑越來越多，如：T3、T4、TSH、TORCH 系列、不孕系列、各種癌症標志物、傷寒、副傷寒等，另外通過母嬰傳播的性傳播疾病(如淋病、梅毒、HIV)和肝炎（如HBV、HCV)，以及胎兒的抗體，新生兒TSH的測定，疫苗反應等，市場上也都有成套 EIA 試劑盒供應。使用酶標儀有利於拓展檢測項目，提高檢測水平，其社會效益和 經濟效益並舉。

酶標儀單、雙波長檢測的比較

發布時間04年05月10日 13時59分

鄒榮良

在用酶聯免疫法測定抗原或抗體時，不論是定量試驗還是定性試驗都要求使用酶標儀進行測定。一般的酶標儀在測定中均有單波長和雙波長的模式，並且採用的都是垂直光路。但在日常工作中有時會不太重視單波長和雙波長的選擇，對使用單、雙波長給測定結果帶來的較大差異也不很了解，並且實際工作中也出現了使用單波長檢測導致抗HCV部分弱陽性的漏檢。因此，本人就酶標儀在選擇單、雙波長使用方面談談個人的體會，供同道參考。

一 材料和方法

1.材料 由上海科華公司提供的乙肝表面抗原測定試劑盒；eppendorf 20-20ul的移液器。

2.儀器 上海科華公司的ST-360酶標儀和BIO-RAD 550酶標儀。

3.方法 底物液配製：底物液A、B各5ml混合，加入微量酶標記物，再加入5ml終止液，呈微黃色，混勻待用；利用上海科華公司提供的乙肝表面抗原試劑盒的酶標板，用94孔中准確加入150ul配製好的上述底物液，另2孔中加入150ul已終止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶標儀上分別進行450nm單波長和450nm及655nm（無630nm）的雙波長檢測，在ST-360上分別進行450nm單波長和450nm及630nm的雙波長檢測吸光度各兩次。

二 結果

1.分別對所得結果進行統計，發現單、雙波長測定結果有較大的差異，雙波長測定結果的CV值遠小於單波長測定，結果見表1。

2.對ST-360兩次重復測定結果進行分析，結果基本一致，見表2。

表1 酶標板吸光度在兩台酶標儀上的測定統計結果

表2 ST-360酶標儀兩次吸光度測定統計結果

三 討論

1.酶標儀與分光光度計、自動生化分析儀等的吸光度測定有所不同，一般分光光度計是水平光路，而酶標儀則是垂直光路，但測定原理相同，都是使用朗伯-比耳定律，測定的都是樣本的吸光度。垂直光的特點是標本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小，不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等的影響較大。

2.酶標儀在用單波長測定吸光度時，除受到測定干擾（樣本的濁度、干擾色等）和電路干擾（包括噪音、漂移、電壓等）等因素外，受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中，由於液體表面張力的作用，液體的表面不是一個平面，而是形成一個凹面，從側面看似凹透鏡，這樣不可避免會影響光路的正常通過。由於凹液面的影響，光線在通過液體時，除正常被液體吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光線通過凹透鏡那樣），影響吸光度的檢測。而酶標儀使用的又是通過光導纖維傳播的點光源，如果每次能在同一部位檢測，吸光度的重復性將得到保證，但由於機械運動等造成的誤差，不可能保證每孔都在相同部位被檢測，因此造成了孔與孔之間有一定的差異。結果見表1，整塊板單波長檢測的CV在3%以上，吸光度最高值和最低值的相對誤差達17%以上。

3.在雙波長測定中，減少了測定干擾和電路干擾，因此測定結果明顯好轉，結果見表1，整塊板樣本的CV在2%以下。ST-360在進行穩定性觀察中，如表2所示，兩次檢測結果基本一致，這表明ST-360的穩定性較好。同時，從表1也可以看到，科華公司生產的ST-360與BIO-RAD 550的檢測結果一致，兩者的檢測性能基本相同。

4.由於液體表面張力的不同，導致單波長測定時的誤差較大。並且用不同的洗滌劑會影響到最後加入底物和終止液後的液面情況，用加入表面活性劑的洗滌液清洗後，形成的液面更凹，對單波長檢測的影響更大，並且與表面活性劑的濃度成正比。而且中性蒸餾水洗滌後，單、雙波長檢測的結果基本一致。

5.在酶聯免疫法測定抗原抗體中，由於所使用的底物不論是鄰苯二胺（OPD）-H2O2，還是四甲基聯苯胺（TMB）-H2O2，顯色終止後，在630nm和655nm處的吸光度值都只有吸收峰處（492nm/450nm）吸光度值的1%以下，因此，利用雙波長檢測，不會影響檢測靈敏度。建立在進行酶聯免疫檢測時，酶標儀比色應該首選雙波長。這樣可以提高臨界值處標本的分析正確度，減少實驗誤差。

Ⅵ 請問醫院所化驗的乙表即為乙肝表面抗原嗎

目前國內最常使用的測定表面抗原的方法是酶聯免旁逗畝疫吸附運森試驗（ELISA），其次是放射免疫試驗（RIA）。
指頭取一點血屬於末梢血！
末梢血含有的紅細胞很多，而乙肝病毒表面抗原和抗體可存在於患者的血液、唾液、乳汁、汗液、淚水指橋、鼻咽分泌物、精液及陰道分泌物中。而且在感染乙肝病毒後可在血清中測到陽性結果。所以乙表也可以指的是乙肝表面抗原也可以是乙肝表面抗體！
用末梢血化驗相對來說靈敏度和特異性很底！

通俗一點說： 末梢血化驗這樣的方法不是化驗乙肝的金標准。乙肝表面抗原還是乙肝表面抗體並不能排除有或者沒有這方面的感染！
建議注射乙肝免疫球蛋白的同時化驗乙肝5項標志物的檢測！

Ⅶ 酶聯免疫檢測的幾種方法及其原理

（1）酶聯免疫吸附試驗（enzyme
linked
immunosorbent
assay,ELISA）：是將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應在固相載體表面進行。可用間接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。
（2）夾心法（sandwich
assay）:將已知的特異抗體包裝在固相載體（塑料板凹孔或紙片上），加入待檢標本，標本中的抗原即可與載體上的抗原結合，洗去未結合的材料後加入該抗原的酶標記抗體，洗去未結合的酶標抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度，可定量測定抗原。
間接法（indirecr
ELISA）常用於檢查特異抗體。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標本（可能含有相應抗體），再加入酶標抗Ig的抗全（即第二抗體），經加底物顯色後，根據顏色的光密度計算出標本中抗體的含量。
（3）BAS-ELISA：近年來對酶免設分析法的改進是使用生物素-親合素-過氧化物酶復合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統進一步提高檢測的敏感度。可用來檢測多種抗原抗體系統如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等。一個親合素（avidin）分子可以結合4個生物素分子（biotin）。結合非常穩定。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結合，而不影響後者的生物活性。一個抗體分子可偶聯90個生物素分子，通過生物素又可連接多個親合素。因此大提高檢測的敏感度。目前應用生物-酶標親合素系統（biotinavidin
system-
ELISA,BAS-ELISA），它是通過生物素標記抗體連接免疫反應系統，同時藉助生物素化酶或酶標親合素引入酶與底物反應系統。

Ⅷ 酶聯免疫法的檢測步驟

ELISA用血清來檢測，首先血液要經過至宏亂少半個小並慶時的凝集，然後取血清。將酶復合物用稀釋液稀釋後，加血清及陰性、陽性對照，還有就是質控品（這是嚴格的要求，它的范圍必須在質控范圍內）。經過一個小時的孵育，然後洗板，加底物，半個小時避光反應後加終止絕絕握液即完成反應部分，然後就是讀數。由數值來判斷結果的陰性或陽性。

Ⅸ 酶聯免疫法的檢測方法

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：
一、將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。
二、加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。
三、加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。
四、加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。
根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。
在臨床檢驗中，此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用於包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步法檢測。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象，此時反應後顯色的吸光值（位於抗原過剩帶上）與標准曲線（位於抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結果將低於實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，顯然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。採用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由於去除了Fc段，從而可消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標（參見6.2）。
雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。
雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用於測定，因此其敏感度相對高於間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法。本法關鍵在於酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合適的標記方法。 在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低於實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。 間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：
⑴將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。
⑵加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。
⑶加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。
⑷加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。
本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。
間接法成功的關鍵在於抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果，但應盡可能予以純化，以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質，例如以E.Coli為工程酶的重組抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能與受過E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗體發生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質，例如來自人血漿或人體組織的抗原，如不將其中的Ig去除，試驗中也發生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白，也會因競爭吸附而影響包被效果。
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性抗體。病人血清中受檢的特異性IgG只佔總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強，非特異IgG可直接吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中，抗原包被後一般用無關蛋白質（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封閉（blocking）固相上的空餘間隙。另外，在檢測過程中標本須先行稀釋（1:40~1:200），以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。 競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：
⑴將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。
⑵待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地佔去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫後，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。
⑶加底物顯色：參考管中由於結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。一般情況，是通過方波伏安法，檢測培養體系的峰電流，通過峰電流與抗原抗體的線性關系來最終確定體系的最終檢測目標的濃度。
當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺於陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可採用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然後加入抗原，形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質，然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合，抗HBc ELISA一般採用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合，洗滌後再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般採用此法。 血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，後者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG後再測定特異性IgM。操作步驟如下：
⑴將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。
⑵加入稀釋的血清標本：保溫反應後血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。
⑶加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。
⑷加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。
⑸加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。 親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。維生素H，分子量244.31，存在於蛋黃中。用化學方法製成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為穩定。由於1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯起來，就可大提高ELISA的敏感度。
親和素－生物素系統在ELISA中的應用有多種形式，可用於間接包被，亦可用於終反應放大。可以在固相上先預包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合，通過親和素－生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結合點充分暴露。另外，在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然後連接親和素－酶結合物，以放大反應信號。 在臨床檢驗中一般採用商品試劑盒進行測定。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
⑴已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；⑵酶標記的抗原或抗體（結合物）；
⑶酶的底物；
⑷陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標准品和控制血清（定量測定中）；
⑸酶聯物（結合物）及標本的稀釋液；
⑹洗滌液；
⑺酶反應終止液。