檢測布氏桿菌血清抗體的方法

❶ 實驗室檢測家畜布氏桿菌病的方法主要有哪些

1．血象白細胞半數正常或輕度減少，淋巴細胞相對或絕對增多，分類可達60%以上。血沉在各期均增速。久病者有輕或中度貧血。 2．細菌學檢查患者血液、骨髓、乳汁、子宮分泌物均可做細菌培養。因牛種菌初分離困難。要求嚴格的環境，故各種標本最好採集兩份，一份用含肝浸液的肉湯做培基，在CO2孵箱中培養；另一份放一般環境中孵育，培養時間不得短於2周。急性期陽性率高，慢性期低。骨髓標本較血液標本陽性率高。有人建議慢性布魯氏菌病患者的血液接種到雞胚卵黃中可獲較高陽性率。 3．免疫學檢查 （1）血清凝集試驗（Wright試驗）試管法較靈敏。患者多在第二周出現陽性反應，1：100以上有診斷價值。病程中效價遞增4倍及以上意義更大。正常人可有低滴度的凝集素；某些傳染病的假陽性率可達30%以上，如兔熱病該凝集效價升高；注射霍亂疫苗的人90%可呈假陽性；接種布魯氏菌活菌苗者，凝集效價也增高。診斷時要注意分析。另外由於抗體IgA、IgG、IgM量的比例不同，如IgA含量高則可出現患者血清低稀釋度為陰性，高稀釋度反為陽性的所謂前帶現象。因此做該實驗時應增大患者血清稀釋范圍。 （2）補體結合試驗補體結合抗體主要為IgG，出現較遲，持續較久，一般1：16以上即為陽性。對慢性患者有較高特異性。 （3）抗人球蛋白試驗（Coombs』tist）用於測定血清中的不完全抗體。不全抗體可阻斷完全抗體與抗原的凝集反應，使凝集試驗呈假陰性。Coombs試驗是使不完全抗體與不可見抗原結合的復合物通過抗人球蛋白血清結合成塊，直接可見。故凝集試驗陰性者可作此檢查。

❷ 豬布氏桿菌病的疾病診斷

本病的流行情況、臨床症狀和病理變化均無明顯特徵，同時隱性感染動物較多。因此，應以實驗室檢查為依據，結合流行情況和症狀進行綜合診斷。 實驗室檢查 布魯氏菌病的實驗室檢查方法很多，而最簡單實用的方法是布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗。採取被檢豬血液，待凝固後，分離血清作為被檢材料。准備0.2毫升吸管和潔凈的玻璃板以及虎紅平板凝集試驗抗原。先用蠟筆在玻板上劃成4平方厘米的方格，在每一方格的血清樣品旁加0.03毫升的被檢血清，搖動抗原瓶使抗原均勻懸浮，用0.2毫升吸管吸取抗原，在每一方格的血清樣品旁加入0.03毫升抗原，用牙簽攪拌血清和抗原，使其均勻混合，於4分鍾內判定結果，出現凝集現象者判為陽性反應，否則判為陰性，一般用於豬群的布魯氏菌病檢疫。也可用其他凝集試驗和變態反檢查。

❸ 牛布氏桿菌病的診斷及防治方法

牛布氏桿菌病是人畜共患的慢性傳染病。主要侵害生殖系統，以母牛發生流產和不孕，公牛發生睾丸炎和不育為特徵，故又稱傳染性流產。本病病原體是牛布氏桿菌。

該病臨床症狀主要表現為妊娠母牛流產。流產後多數伴發胎衣不下或子宮內膜炎。

公牛發生睾丸炎和副睾炎，失去配種能力。

對牛布氏桿菌病的診斷可採取3種實驗室檢查方法。

（1）細菌學檢查。取母牛陰道分泌物、胎衣、胎兒胃內容物塗片，將塗片在酒精燈上加溫固定後，滴加2%沙黃水溶液，在火焰上方微微加熱0.5～1分鍾至出現蒸氣，水洗後用1%孔雀綠復染1～2分鍾，水洗吸干、鏡檢。若看到紅色的球桿菌便可確診。其他雜菌成綠色。

（2）全乳環狀反應。取剛擠出的全乳1毫升放於反應管內，加入抗原（染成藍色或紅色）0.1毫升，充分振盪混合，靜置於37℃溫箱中，1小時後取出立即判定。用藍色抗原時，若在乳脂層出現比乳柱深的藍色環狀帶即判為陽性。

（3）平板凝集反應。此法比較簡單實用。

採取被檢牛血液，待凝固後，分離血清作被檢材料。先用蠟筆在玻璃板上劃成2厘米×2厘米的方格，每一方格中放置一份被檢血清0.02毫升，用0.2毫升吸管吸取充分攪勻的抗原，分別在每一血清樣品旁加入0.03毫升抗原，每格各用一根火柴棒或牙簽攪拌血清和抗原，使其均勻混合，若室內溫度偏低，可將玻板在酒精燈上方微微加溫，於4分鍾內出現凝集現象者為陽性。

本病公牛無治療價值。母牛流產後繼發予宮內膜炎或胎衣不下時可用0.02%呋喃西林，0.1%高錳酸鉀液或生理鹽水沖洗子宮，排除沖洗液後向子宮內灌入抗生素葯物。胎衣不下時可採取手術剝離或肌內注射垂體後葉素50～100單位，以加速胎衣排除。本病防疫主要是加強檢疫，不到疫區引種。必須買牛時一定隔離30天以上，並作二次檢疫，確認健康才能入群。

對同群牛堅持每年定期預防注射布氏桿菌菌苗，被污染的場所及用具有3%～5%來蘇兒消毒。

❹ 如何確診豬布氏桿菌病

豬群中發生大批流產，公豬睾丸炎，有的豬發生跛行、關節炎等，應懷疑布氏桿菌病，確診必須進行實驗室診斷。

（1）悉余細菌學檢查 採集流產母豬子宮及陰道分泌顫巧物、血液、乳汁、流產胎兒胃內容物，肝、膽、淋巴結等病料。製成塗片，柯氏染色後鏡檢紅色的細菌為布氏桿菌。

（2）血清學試驗 可採用平板凝集試茄陸鍵驗和試管凝集試驗及補體結合試驗。

❺ 詳細描述布氏桿菌的微生物學診斷方法

（一）分離培養
急性期採集血液，慢性期採取骨髓，接種於雙相肝浸液培養基（一半斜面，一半液體）置37℃10%CO2環境中培養，每隔2天檢查一次，如無細菌生長則搖盪培養基，使液體浸過斜面上，有細菌生長，可依鑒定項目確定是否為布氏桿菌。經一月培養無細菌生長，可報告陰性。
（二）血清學檢查
通常作凝集試驗，判定凝集效價1：50可疑，1：100以上為陽性。效價增高4倍以上時，更有診斷價值。

❻ 如何做羊布病檢測

羊布氏桿菌病是羊的一種慢性傳染病。主要侵害生殖系統。羊感染後，以母羊發生流產和公羊發生睾丸炎為特徵。布氏桿菌病也是一種人畜共患的慢性傳染病。其特點是生殖器官和胎盤發炎，引起流產、不育和各種組織的局部病症。
人類感染檢查：
1、血像：白細胞計數正常或偏低，淋巴細胞相對增多。
2、細菌學檢查：血、骨髓、尿均可作培養，早期血、骨髓培養陽性可達70%～80%。
3、血清學檢查：
（1）血清凝集試驗。病程2周以上可陽性，效價在1∶100以上，兩次測定效價成倍上升，有助診斷。
（2）補體結合試驗。效價在1∶10以上為陽性。
（3）抗人球蛋白試驗。效價>1∶80為陽性。
（4）皮內試驗。將布氏桿菌素0.1ml注入前臂皮內，24～48小時局部腫塊超過2.5×2.5cm以上為陽性。
（5）熒光抗體測定也可應用。

❼ 布氏桿菌病是怎樣一種病如何檢測

布氏桿菌病是由布氏桿菌引起的一種人畜共患的慢性傳染病。傳染途徑是病牛或帶菌牛，特別是在流產或分娩時，大量布氏桿菌隨胎兒、胎水和胎衣排出，偶爾在乳、糞、尿以及陰道流出的惡露內發現。然後通過消化道、損傷或完整的皮膚、黏膜、結膜和交配而互相感染。病牛的臨床特點是發生流產、胎衣滯留、子宮炎、不孕症、乳房炎、關節炎等，孕牛在7～8月時流產。公牛發生睾丸炎和附睾炎。人可通過與病牛的頻繁接觸及食入未嚴格殺菌的病牛乳、肉而感染。人患病的主要症狀是呈波浪熱、關節炎和睾丸腫脹，頭和全身疼痛，有的發生骨質變形、流產等。
布氏桿菌的檢驗主要是採用兩種血清學診斷方法：
（1）虎紅平板凝集反應。采被檢血清0.03毫升，加抗原0.03毫升與之混合，4分鍾內觀察反應並判定結果。凝集者判為陽性，不凝者判為陰性。對陽性反應的牛再進行試管凝集反應。
（2）試管凝集反應。操作方法：每份血清用5支小試管，第一管加入2.3毫升0.5%碳酸生理鹽水；第二管不加；第三、第四、第五管各加入0.5毫升。用1毫升吸管吸取被檢血清0.2毫升加入第一管內並混勻之，以該吸管吸取混合液分別加入第二管和第三管，每管0.5毫升。以該吸管將第三管混合液混勻，吸取0.5毫升加入第四管，混勻後，再從第四管吸取0.5毫升加入第五管混勻，棄去0.5毫升。如此稀釋後，從第二管起，血清稀釋度分別為1∶12.5，1∶25，1∶50，1∶100。然後先以0.5%碳酸生理鹽水將抗原原液作20倍稀釋，並加入上述各管（第一管不加，作為血清對照組），每管加0.5毫升，振搖均勻。加入血清後，第二至第五管各管混合液的容積均為1毫升，血清稀釋度從第二管起依次為1∶25，1∶50，1∶100，1∶200。每次試驗還應做陰性血清對照：陰性血清需取自未患過布氏桿菌病的牛，且先須以布氏桿菌抗原檢定，證明確為陰性反應者。陽性血清對照：陽性血清通常取自人工免疫的牛，但亦可從送檢血清中選取，其凝集價最好不低於1∶800。抗原對照：加1∶20抗原稀釋液0.5毫升於試管中，再加入0.5毫升碳酸生理鹽水。以上試管於充分振盪後置於37～38℃恆溫箱中22～24小時，然後檢查並記錄結果。
判定標准：「++++」表示上層液體100%清亮，管底有極顯著的傘狀沉澱物。振盪時，沉澱物碎裂成花瓣狀、塊狀和粒狀（100%菌體被凝集）。「+++」表示凝集現象與四個加號相同，但上層液體75%清亮（75%菌體被凝集）。「++」表示上層液體50%清亮，管底有傘狀沉澱物，振盪時碎裂成花瓣狀、塊狀和柱狀（50%菌體被凝集）。「+」表示上層液體25%清亮，管底有不很顯著的傘狀沉澱，或只有傘狀沉澱的痕跡。振盪時，在液體中有可見小塊和粒狀物（25%）菌體被凝集。「-」表示無凝集現象。液體不透明，無傘狀沉澱，有時細菌可能沉於管底，但振盪時又呈均勻混濁狀態。牛以1∶100稀釋度出現兩個加號以上的凝集現象時，被檢血清判定為陽性反應。以1∶50稀釋度出現兩個加號以上的凝集現象時，被檢血清判定為可疑反應。可疑反應的牛，經過3～4周，須重新采血檢驗。如重檢仍為可疑，應判定為陽性反應。

❽ 給羊檢測布病最簡單的方法，布病會不會傳染給人

1、使用一次性注射器從羊的頸部靜脈處取血，大約2ml。2、將注射器倒立，於常溫下靜置12個小時左右。3、准備好載玻片，將1ml血清取出，放置在載玻片上，然後取出1ml虎紅試劑和血清按照1：1混合。4、攪拌結束後，如果載玻片上有凝集顆粒，說明為陽性，如果載玻片上光滑，說明為陰性。

一、給羊檢測布病最簡單的方法

1、方法一

（1）使用規格為5ml的一次性注射器從羊的頸部靜脈處取血，大約2ml。

（2）取血結束後，將注射器倒立，即針頭一端朝下，於常溫下靜置12個小時左右。此時針管靠近針頭的一端出現水一般的物體，上面有凝血塊，而與水類似的物體即為血清。

（3）准備好一塊載玻片，將1ml沉澱好的血清取出，放置在載玻片上，然後取出1ml的虎紅試劑和血清按照1：1的比例混合，然後使用牙簽將其攪拌均勻。

（4）攪拌結束之後，如果載玻片上有凝集的顆粒，說明為陽性。如果載玻片上光滑，說明為陰性。

2、方法二

（1）採取1ml血液，然後進行離心處理（1500轉/分鍾）。如果無法立即進行測試，應當冷藏保存，如果超過24小時無法進行測試，應當冷凍保存。

（2）將試紙卡以及血清樣本恢復至室溫，然後使用吸管吸取血清，緩緩滴入試紙卡加樣孔中（滴1滴即可）。

（3）使用吸管吸取試紙卡包裝中的鏈侍胡稀釋液，然後同樣緩緩滴入試紙卡加樣孔中（滴2滴即可）。

（4）5分鍾過後，進行觀察。如果C線顯示紅色色帶，T線也顯示紅色色帶，說明為陽性。如果C線顯示紅色色帶，T線不顯示紅色色帶，說明為陰性。如果C線不顯示紅色色帶，則無論T線是否顯示紅談檔色色帶，結果均判為無效。

二、布病會不會傳染給人

1、羊布氏桿菌病是一種人畜共患的慢性傳染病，當人體接觸過患病牲畜後，尤其是患病牲畜的陰道分泌物棚攔和體液後容易感染（布氏桿菌主要是通過人的皮膚粘膜進入人體），但是人與人之間不會傳染。

2、羊布氏桿菌病的症狀主要表現為寒戰，波狀熱，多汗，肌肉關節痛，淋巴結及肝脾腫大，睾丸、附睾腫大，腰骶神經病變，坐骨神經痛。其中羊型和豬型的症狀較重，牛型的症狀較輕。

❾ 豬病常用的血清學診斷方法有哪些

抗原和相應的抗體在動物體內或體外都能發生特異性結合反應，這種反應稱為抗原抗體反應，習慣上把體內的抗原抗體反應稱為免疫反應，體外的抗原抗體反應稱為血清學反應，因為抗體主要存在於血清中。

血清學反應可以用已知的抗體檢查未知的抗原，也可用已知抗原測定未知的抗體。人們根據抗體能與相應抗原發生反應並出現可見的抗原—抗體復合物的原理，設計了許多血清學診斷方法，不僅可以檢測動物體內乃至體外的病原微生物，或其抗原性成分，而且還可以測定動物機體對病原微生物的侵襲或對其抗原成分的免疫反應。在抗原—抗體復合物成不可見狀態時，可以通過瓊脂擴散、凝集實驗以及酶標記等指示系統，使其變為可見或可測狀態。

目前已知的血清學診斷方法很多，現僅介紹幾種在目前條件下規模化豬場通過學習都能做到的診斷方法：

（1）凝集試驗豬病診斷過程中常用的操作方法有以下幾種：

①全血平板凝集試驗實踐中主要用於細菌性疾病的抗體檢測和抗原（經分離培養後）的鑒定。現舉例用已知豬丹毒抗原（丹毒桿菌的純培養液）測定被檢豬血清中的抗體。其操作步驟如下：

a.材料豬丹毒凝集抗原，玻片，9號針頭，酒精棉球，酒精燈，鉑耳（取血環）等。b.操作用鉑耳取已知抗原1滴，置於玻片上。用酒精棉球擦拭針頭，鉑耳在酒精燈上灼燒消毒。用針頭刺破被檢豬的耳靜脈，以鉑耳取血與玻片上的抗原等量混合，在2～3分鍾內觀察結果。c.結果判定出現顆粒狀的凝集，為陽性反應。否則為陰性。

②試管凝集試驗是一種定量法，用於測定被檢血清或其他體液中有否某種抗體及其效價，可做臨床的輔助診斷，或用於流行病學監測。在豬場中，本法常用於豬布氏桿菌病的診斷。

A.材料布氏桿菌病試管凝集抗原（1∶20倍稀釋），布氏桿菌病陽性血清、陰性血清（1∶25倍稀釋），稀釋液（0.5 %石炭酸生理鹽水），滅菌小試管，1毫升吸管，試管架，待檢血清等。B.操作取試管7支置於試管架上，設陽性和陰性血清及抗原對照各1支，測定管4支，以後每增加1個樣品，只需增加4支測定管。

按表10示意稀釋血清，加抗原，完成後每支試管內應含1毫升液體。