Ⅰ 什麼技術檢測外源基因是否導入受體細胞的基因組
這個主要有兩蘆岩扮種方法：
第一,直接看基因是否導入.那就用DNA分子雜交技術.
第棗弊二,間接的看有無該基因翻譯表達的產物.這可以用蛋白質提取檢測,或者是加入陪灶相應的病毒,看該細胞能不能存活下來.
Ⅱ 哪些方法可以檢測轉基因植物中的外源基因2
分析、確定了75個品種的轉基因構建成分,為開展轉基因檢測奠定了基礎。
2、不同類型的植物提取基因組DNA的方法略有差異,該研究優化了CTAB、SDS快速提取法,並選擇了磁珠吸附試劑盒法,成功提取了適合於PCR反應的植物基因組DNA。
3、以植物內源基因18SrRNA為靶標,設計、優化後篩選出特異性引物和探針,建立了以18SrRNA為目標的檢測植物基因組DNA提取質量的PCR與熒光PCR鑒定體系。
4、首次以CaMV35S、FMV啟動子、NOS終止子、標記基因NPTII、抗除草劑基因EPSPS、PAT、抗蟲基因CryIAb為檢測目標,設計、篩選出特異性引物,優化實驗參數,建立了轉基因植物PCR定性檢測方法體系,靈敏度達0。
1﹪。
5、克隆了CaMV35S、FMV啟動子、NOS終止子、標記基因NPTII、抗除草劑基因EPSPS、PAT、抗蟲基因CryIAb的陽性質粒作為轉基因植物檢測的陽性對照。
6、於反應體系中引入UNG酶,建立了無污染的熒光PCR擴增體系。
7、首次以FAM熒光素標記探針5端作為發光基團,以TARMA標記探針3端為淬滅基團,以CaMV35S、FMV啟動子、NOS終止子、標記基因NPTII、抗除草劑基因EPSPS、PAT、抗蟲基因CryIAb為檢測目標,設計、篩選出特異性引物和探針,優化實驗參數,建立了轉基因植物通用性熒光PCR定性檢測方法體系。
8、以FAM和TET兩種熒光素標記外源基因和內源基因,建立了轉基因大豆抗除草劑基因EPSPS和轉基因玉米抗蟲基因CryIAb的熒光PCR定量檢測體系,兩體系衡腔的靈敏度均達到0。
1﹪以上。
9、首次利用反向PCR技術擴增出華番1號基因組未知DNA序列,並通過DNA測序,利用BLAST軟體進行同源性比較,找出載體與基因組整合位點DNA序列悉拍。
10、利用熒光PCR技術,設計出特異性引物與探針,優化實驗參數,建立了一種靈敏、精確、定量和鑒定華番1號品種特異性的高效睜攔羨檢測體系。
這在國內為首次利用整合位點進行轉基因植物檢測和品種特異性鑒定的方法……
Ⅲ 基因檢測有哪些方法
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基因檢測的方法不勝枚舉，基本的步驟是樣本的獲取（包括血液、唾液、組織樣本等）——處理（如DNA的提取與純化、文庫構建等）——序列測定——序列分析——結果解讀——報告撰寫。廣泛應用的核酸序列測定方法是直接測序法，目前最先進而且被廣泛使用的方法和儀器有第一代的Sanger測序法，第二代的高通量測序法（如美國Illumina公司的Hiseq測序儀和華大基因子公司CompleteGenomics開發的測序方法）等。目前也已出現被稱為第三代測序技術的方法，如單分子實時DNA測序法。
第一代：sanger測序
第一代的Sanger測序技術的優點是，測序讀長長，能達到800-1K bp，且測序用時短，只需要幾十分鍾即可完成一次測序，測序准確度高，目前仍是測序的金標准；缺點是通量低、成本高。
第二代：高通量測序（NGS）
第二代測序技術的優點是測序通量和效率高，成本低廉；缺點是測序讀長普遍較短，且用時較長。以目前應用最為廣泛的測序儀之一的illumina公司Hiseq2000測序儀為例，其一次測序的數據產出量可達500
Gb，但讀長為100 bp，且需要耗時14天左右。而Life technology公司的IonProton測序儀是邊合成邊通過反應體系電位的微小差別來測定鹼基序列。
第三代：單分子/納米孔測序
由於第二代技術存在短讀長和耗時長的缺陷，人們希望第三代測序技術能解決這些缺陷，所以第三代測序技術在長讀長和短耗時出發，目前尚未完全成熟，市場應用面還不算廣，而且各種測序儀之間差異較大，測序原理也是各出奇招。如Pacific Bioscience公司則是通過在PCR合成DNA的過程中，用顯微鏡檢測由熒光基團標記的dNTP反應後釋放出的熒光來測序。而一直未投產的牛津大學研發的測序儀，則是通過檢測由核酸外切酶剪切DNA時，「掉落」到檢測微孔的核苷酸來測序。
Ⅳ 轉基因生物檢測有哪些方法
轉基因作物檢測大體分為兩種：一是檢測是否含有外源蛋白，即外源基因表達產物，主要採用酶聯免疫吸附法和試紙條法；二是檢測是否含有外源基因(DNA)，主要有Southern雜交技術、基因晶元法和PCR檢測法。
Ⅳ 基因檢測方法
一般有三種基因檢測方法：生化檢測、染色體分析和DNA分析。
1.生化檢測
生化檢測是通過化學手段，檢測血液、尿液、羊水或羊膜細胞樣本，檢查相關蛋白質或物質是否存在，確定是否存在基因缺陷。用於診斷某種基因缺陷，這種缺陷是因某種維持身體正常功能的蛋白質不均衡導致的，通常是檢測測試蛋白質含量。還可用於診斷苯丙酮尿症等。
2.染色體分析
染色體分析直接檢測染色體數目及結構的異常，而不是檢查某條染色體上某個基因的突變或異常。通常用來診斷胎兒的異常。
常見的染色體異常是多一條染色體，檢測用的細胞來自血液樣本，若是胎兒，則通過羊膜穿刺或絨毛膜絨毛取樣獲得細胞。將之染色，讓染色體凸顯出來，然後用高倍顯微鏡觀察是否有異常。
3.DNA分析
DNA分析主要用於識刖單個基因異常引發的遺傳性疾病，如亨廷頓病等。DNA分析的細胞來自血液或胎兒細胞。
Ⅵ 外源基因表達的檢測是什麼
檢測外源基因是否轉化成功，首先對報告基因進行檢測，然後再進行目的外源基因的檢測。目的外源基因的表達可分轉錄和翻譯兩個水平，轉錄是以DNA為模板合成mRNA的過程，翻譯則是指以mRNA為模板翻譯成蛋白質。目的基因表達檢測亦可在兩個水平上進行，在轉錄水平上對mRNA進行檢測，在翻譯水平上對蛋白質進行檢測。
1.報告基因的酶法檢測
主要的報告基因，例如Gus基因、Cat基因、冠癭鹼合成酶基因、NptⅡ搭慶汪基因和熒光素酶基因皆可根據各自的功能，採用酶法檢測。
2.外源基因轉錄水平上的檢測。
Northern雜交（Northernblotting）以RNA為探針，檢測外源基因轉錄產物特異mRNA。Northern雜交也有斑點雜交和印跡雜交。斑點雜交只需將RNA樣品點樣在固相膜上直接與探針雜交，但只能鑒定外源基因是否轉錄；而Northern印跡雜交則需將RNA樣品進行電泳分離，然後轉移到固相膜上，再與探針雜交，可對外源基因的轉錄狀況進行較詳細的分析。Dot-Northern雜交是將總RNA提取物經多孔過濾進樣器直接轉移到雜交膜上，其餘步驟與Northern雜交相同。Northern雜交對細胞中低豐度的mRNA檢出率較低。
3.外源基因翻譯水平上的檢測
外源基因翻譯水平上的檢測通常用Western雜交（Westernblotting）。Western雜交是將蛋白質電泳、印跡、免疫測定融為一體的知仔特異蛋白質檢測方法。轉化的外源基因正常表達時，轉基因植株細胞中含有一定量的目的蛋白。從植物細胞中提取總蛋白或目的蛋白，將蛋白質樣品溶解在含去污劑和還原劑的溶液中，經SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳使蛋白質分離開來，將分離的各蛋白質條帶原位轉移到固相膜上，膜在高濃度的蛋白質溶液中溫育，以封閉非特異性座位。然後差岩加入特異性抗體（一抗），印跡上的目的蛋白與一抗結合後，再加入能與一抗特異性結合的二抗，二抗事先已經標記，根據二抗上標記化合物的性質檢出。由檢測結果，可知目的蛋白是否已在被檢植物細胞中表達、其濃度以及大致的分子量。