t細胞功能檢測的方法

① 以下試驗中，屬於T細胞功能檢測方法的是

正確答案:B
解析：檢測T細胞功能的方法有T細胞增殖試驗、分泌功能測定、T細胞介導的細胞毒試驗、體內試驗等
。

② 測定T細胞功能的體外試驗是

正確答案:A
解析：1
.T細胞表面有PHA受體,PHA能促進體外培養的T細胞發生轉化並增殖，通過測定細胞增殖程度可反映T細胞接受PHA刺激後，發生轉化的能力
。2
.B細胞轉化為漿絕毀虧嫌細胞可合成分泌抗體,與周圍SRBC結合，在補體作用下形成空斑，可用溶血空斑試並空備驗反映B細胞分泌抗體能力
。3
.舊結核菌素皮膚試驗為T細胞介導的遲發型超敏反應，用舊結核菌素皮試可反映T細胞功能
。

③ 檢測T,B,NK和吞噬細胞免疫功能的方法分別有哪些

免疫細胞功能試驗包括體內和體外試驗。免疫細胞功能體外試驗主要根據免疫細胞的增殖活性、分泌活殺傷活性等特性而進行實驗設計。具體免疫細胞功能檢測內容包括：①淋巴細胞功能檢測，包括T細胞增殖試驗、T細胞分泌功能測定、T細胞介導的細胞毒試驗以及體內試驗；B細胞增殖試驗、溶血空斑試驗、酶聯免疫斑點法以及體內試驗；NK細胞活性檢測方法：酶釋放法、放射性核素釋放法、化學發光法、流式細胞術法等。②吞噬細胞功能檢測，方法有趨化功能檢測、吞噬和殺菌功能測定等。

④ T淋巴細胞的免疫檢測

T細胞分化抗原測定
【中文名稱】
T細胞分化抗原測定
【概述】
T細胞膜表面有100多種特異性抗原，現已制備了多種單克隆抗體，WHO（1986）統稱為白細胞分化抗原（cluster differentiation，CD）。例如CD3代表總T細胞，CD4代表T輔助細胞（TH），CD8代表T細胞毒性細胞（TC）等。應用這些細胞的單克隆抗體與T細胞表面抗原結合後，再與熒游標記二抗（兔或羊抗鼠IgG）反應，在熒光顯微鏡下或流式細胞儀中計數CD的百分率。
【參考值】
免疫熒光法（IFA）：CD3為63.1%±10.8%；CD4（TH）為42.8%±9.5%；CD8（TS）為19.6%±5.9%；CD4/CD8（TH/TS）為（2.2±0.7）/1。流式細胞術：CD3為61%～85%；CD4為28%～58%；CD8為19%～48%；CD4/CD8為0.9～2.0/1。
【臨床意義】
①CD3降低：見於自身免疫性疾病，如SLE、類風濕關節炎等。
②CD4降低：見於惡性腫瘤、遺傳性免疫缺陷症、艾滋病、應用免疫抑制劑者。
③CD8減低：見於自身免疫性疾病或變態反應性疾病。
④CD4/CD8比值增高：見於惡性腫瘤、自身免疫性疾病、病毒性感染、變態反應等；CD4/CD8比值減低：見於艾滋病（常<0.5）。
⑤監測器官移植排斥反應時CD4/CD8比值增高預示可能發生排斥反應。
⑥CD3、CD4、CD8較高且有CD1、CD2、CD5、CD7增高則可能為T細胞型急性淋巴細胞白血病。

⑤ NK細胞和T細胞的檢測方法是什麼哈正常值是多少

採用流式細胞術檢測54例局部進展期乳腺癌患者新輔助化療前後的靜做免疫功能（NK細胞、後T淋巴細胞亞群及NK細胞免疫功能的變化，T細胞亞群）檢測要多少探討局部進展期乳腺癌患者新輔助化療前。方法

⑥ 流式細胞儀分析技術怎麼檢測t細胞

檢測cd4和cd8，應該還要同時染色cd3.
先選中cd3陽性的細胞（t細胞），然後把t細胞在cd4/cd8的散點圖上再顯示，可以分為四個象限。分別代表cd4陽性，cd8陽性，雙陽性，和無染色的。正常情況下，是不應該有雙陽性和未染色的，也就是說你的細胞應該只顯示在4個象限的其中的兩個。其他的兩個最多隻是一些背景的雜信號。代表t細胞的兩個亞群。

⑦ 如何檢測人t細胞的數量，功能及特異性

----T細胞可以（它可以被抗原刺激,把信息傳遞給B細胞分化成效應B細胞）
----效應T細胞可以（它可以感應到抗原是否進入靶細胞,從而去激活靶細胞的溶酶體酶）
----B細胞可以（它可以直接被抗原刺激,直接分化成效應B細胞）
----效應B細胞不可以（只能分泌抗體,只針對一種抗原,不能識別抗原）
----吞噬細胞不可以（爭議對大的就是這個,有人說得有人說不得,但我覺得是不可以的,因為它只會吞入一切侵入體內的抗原,有時候花粉灰塵都吞,病不能識別特異性抗原和異物）

⑧ 細胞免疫功能檢測常用有哪幾種方法

細胞免疫（CMⅠ）是由多種細胞相互作用的結果。免疫細胞間相互作用導致多種細胞因子的釋放。因此細胞功能測定不僅涉及T細胞的數量和功能與包括各類因子活性測定，因此評價機體的細胞免疫功能不僅程序復雜，且很難標准化。
一、遲發型過敏反應的體外檢測方法
皮膚試驗和接觸性過敏的誘發是檢測遲發型過敏反應（DTH）的兩種常用方法。皮膚試驗中誘發對曾經使病人致敏的抗原的再次應答，而接觸性過敏是測試受者對從未接觸過的物質發生致敏的能力。
1．皮膚試驗 用皮膚試驗診斷DTH，常用的抗原有結核菌純蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人類試驗時在前臂皮內注射少量可溶性抗原，24～48小後，測量紅腫硬結的大小，硬結直徑大於10mm即被看作為陽性。表明受試者對該病原菌有了一定的細胞免疫能力，若皮試無反應，可用更高濃度的抗原重復試驗，若仍無反應即為陰性，需排除皮試技術誤差，也可能受試者從未接觸過此抗原，也可能由於細胞免疫功能缺損，或由於細胞免疫功能缺損，或由於嚴重感染（麻疹、慢性播散性結核）造成的無反應性。
2．接觸性過敏常應用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）誘生接觸性過敏。化合物與皮膚蛋白質結合而導至DTH反應。在動物試驗時，初次皮膚上塗抹DNCB後間隔7～10天再激發刺激，則皮膚出現即為陽性。此試驗人類已不使用。
二、細胞免疫的體外檢測方法
體外檢測淋巴細胞的數量和功能，最易採集的是血標本，首先需分離或純化淋巴細胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重為1.077的淋巴細胞分層液，當將血液重疊於淋巴細胞分層液之上離心時，由於紅細胞（1.092）、多形核白細胞（1.090）、淋巴細胞（1.070）的比重不同而相互分開。淋巴細胞和單核細胞在血漿和分層液交界處形成一薄層。仔細分出這一薄層的細胞，其中淋巴細胞佔80%，單核細胞佔20%，淋巴細胞中T細胞佔80%，B細胞佔4%～10%，其作為非DT、非B細胞。
1．T細胞計數
（1）E花環法：人類T細胞表面有SRBC受體（CD2）能與SRBC結合形成玫瑰花環樣結構，將經分層液分離現的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合，經37℃培養5～10分鍾放4℃過夜，取細胞懸計數，外周血淋巴細胞中約70%～80%淋巴細胞結成花環即為T細胞。目前此方法已用來分離T細胞，而不用做T細胞計數。
（2）用單克隆抗體計數T細胞：將人的PBM分成三等份，分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細胞結合，再用FITC標記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進行間接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下或流式細胞儀檢測結果，在PBM中被CD3抗體染上熒光的細胞稱為CD3 細胞即總T細胞。正常人在PBM中T細胞佔70%～80%。正常人的CD4 細胞和CD8 細胞之和應與CD3 細胞數一致。CD4 細胞與CD8 細胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小於1.7。
2．T細胞活化試驗 T細胞能被非特異的物質稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加，最圖導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴細胞數，也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）摻入正在分裂的淋巴細胞，用液閃測定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細胞，用液測量儀檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細胞轉化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法，稱為MTT檢測法，MTT是一種甲氮唑鹽，它是細胞線粒體脫氫酶的底物，細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色甲（fromazan）產物。該產物的多少與活性細胞數正相關。結果可用酶標檢測儀（595mm）測量匯豐銀行密度，做為MTT法的檢查指標。此法的結果與3H-TdR摻入法平行，並能反應試驗中的活細胞數。
3．細胞毒試驗 TC細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞對其靶細胞有直接的細胞毒（殺傷）作用。常用的栓測細胞毒效應的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細胞胞混合，於37℃培養1小時左右，51Cr即可進入靶細胞，與胞漿蛋白結合，洗去游離的51Cr後，即可得到51Cr標記的靶細胞，將待檢細胞毒性的細胞與51Cr標記的靶細胞混合（比例約為50：1或100：1）靶細胞被殺傷越多，釋放到上清液中的液游離的51Cr越多，且不能被其他細胞吸收。用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值，即可計算出待檢細胞殺傷活性的高低。
細胞毒試驗檢測Tc細胞效應功能是否健全，及經IgG介導的ADCC效應，或NK細胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。
4．混合淋巴細胞的反應（MIR） 是體外研究T細胞的較好的方法，雙向MLR常被用來篩選骨髓移植的供體。來自不同供體的淋巴細胞分別與病人的淋巴細胞混合培養4～5天，在最後8小時摻入51TdR摻入法測T細胞的反應性。或用細胞毒法觀察受刺激的T細胞與活的靶細胞混合（靶細胞來自與刺激細胞相同的個體）如果T細胞受刺激後產生了細胞毒T細胞，可殺死活的細胞，根據靶細胞釋放51Cr的多少算出T細胞移動抑制因子）和LIF（白細胞移動抑制因子）來評估細胞免疫功能。近年來應用測定IL-2的免疫酶技術，操作簡單，並能定量以取代了MIF和LIF的測定。單個核細胞與分裂原一起培養24小時，然後測定清液中的IL-2活性。在細胞免疫功能缺損時，特別是AIDS病人，IL-2分泌明顯降低。而有些疾病，如多發性硬化、類風濕關節炎、移植排斥反應等病人體內血清中IL-2水平升高，表明病人T細胞活性增高。發生移植排斥反應的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶聯免疫吸附試驗測定各種體液中活化的T細胞脫落的IL-2受體（CD25），一般來說IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的，IL-2和IL-2受體的檢測可用於對某些疾病的監測，如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。
對體外培養的細胞進行細胞因子產生能力檢測是檢查細胞培養上清液中細胞因子的生物活性或抗原性。現已可用核酸雜交技術，即從組織中或細胞中提取RNA，與同位素或酶標記的該種細胞因子的cDNA探針作分子雜交試驗，即印跡（dot blotting）或Northern印跡，若查出有某種因子的mRNA存在，即說明該細胞在所處培養條件下有產生某種細胞因子的能力。

⑨ T淋巴細胞增殖功能的測定

1.MTS
2.XTT比色法
3.3H-TdR摻入法
4.MTT法

MTS檢測法

1．培養IL-2依賴細胞株CTLL-2細胞或HT-2細胞（檢測IL-2），或者IL-3依賴細胞株FDC-P1細胞或FL5.12細胞（檢測IL-3）到對數生長期。

2．取96孔細胞培養板，每孔加0.1ml含1×104～2×104上述細胞之一的DMEM培養液（加10％小牛血清）。

3．每孔加0.1ml系列稀釋的待測細胞因子（IL-2或IL-3）樣品或細胞因子標准品，在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養24小時。

4．每孔加20μl MTS/PMS混合液，繼續培養3～4小時顯色。

5．檢測前搖晃培養板10秒鍾，混勻顏色。在酶聯檢測儀上，波長570nm（或490nm，或570nm和690nm）處檢測各孔的光吸收值（OD）。用樣品稀釋度對OD值（OD570、OD490或OD570/OD690）繪制劑量-反應曲線，根據標准品曲線計算樣品中細胞因子的量。

XTT法：

用XTT代替MTT可省去溶解還原產物結晶的步驟，XTT可以被活細胞中的代謝酶還原成黃色水溶性的代謝產物（formazan）。代謝產物在OD450處有吸收峰。

MTT檢測法

1．取96孔細胞培養板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶細胞的培養液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養液），在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養2～3小時讓細胞帖壁（如果是懸浮細胞可直接進行下一步）

2．用RPMI-1640培養液2～10倍遞次稀釋細胞因子標准品，根據情況2～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標准品和待檢樣品，每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個：3個陽性對照孔，每孔加0.1ml含大劑量細胞因子的RPMI-1640培養液，3個陰性對照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培養液。在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養24～48小時或預定的時間。

3．吸去培養液，用PBS洗滌一次（如為懸浮細胞，應在吸去上清液前離心培養板）。

4．每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4～6小時。

5．每孔加0.1ml酸化異丙醇，也可用含10％簡鄭 SDS的10mmol/L HCl代替酸化異丙醇，在振盪器上振盪混勻，讓還原產物充分溶解。置酶聯檢測儀上測定光密度（OD）值，檢測波長570nm，參考波長630nm。以OD值對樣品稀釋度作圖，比較標准曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細胞因子的含量。

3H]脫氧胸苷攝入法：

1．用RPMI-1640培養液洗滌對數生長期（培養3天）的CTLL-2細胞兩次，每次250×g離心10分鍾，洗去培養液中殘存的IL-2。

2．用台盼藍（1％ Trypan blue）染色法計數細胞並決前純定細胞的活力，用10％小牛血清的RPMI-1640培養液懸浮細胞至1×105/ml。

3．在96孔細胞培養板中每孔加0.1ml倍比稀釋的標准IL-2或待測樣品，每個稀釋度三個復孔，標准IL-2從40 IU/ml稀釋到0.019 IU/ml（8～10個稀釋度），陰性對照孔不加IL-2。

4．每孔加0.1ml細胞懸液，在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱慧咐咐中培養18～24小時。每孔加10μl（0.5μCi或1.85×104Bq）[3H]脫氧胸苷，繼續培養4小時。

5．用多頭細胞收集器將細胞收集到玻璃纖維濾紙上，用3％醋酸水溶液濾紙3次，洗去游離的[3H]TdR。將濾紙置液體閃爍瓶中，加入5ml閃爍液。在液體閃爍儀上計數細胞攝入的同位素活性（每分鍾放射性計數，cpm），根據儀器效率換算成dpm（每分鍾衰變數）。

6．用dpm值對樣品稀釋倍數作圖。在圖上，標准IL-2的曲線與待測樣品的曲線應當呈平行的S型，說明是同樣的分子反應。比較同樣dpm處的不同稀釋倍數，決定待測樣品的相應濃度。

以上方法僅供參考。

⑩ T細胞的檢測包括哪些內容

T細胞的檢測包括：(1)外周血常規和淋巴細胞計數碼數
(2)皮明模轎膚遲發型激肆超敏反應
(3)T細胞及亞群數量的檢測
(4)T細胞功能檢測。