㈠ 凝膠滲透柱層析
凝膠滲透層析就是按照溶質分子的大小不同而進行分離的一種層析技術。當溶質分子大小不同的樣品溶液通過凝膠柱時，由於凝膠顆粒內部的網路結構具有分子篩效應，分子大小不同的溶質就會受到不同的阻滯作用。分子量大的因不易滲入網路，被排阻在顆粒之外，因而所受到的阻滯作用小，1.凝膠顆粒2.中分子3.小分子4.大分子先流出層析床，分子量小的因能滲透到網路圖1、凝膠滲透層析原理示意圖內部洗脫流程長，因而所受到的阻滯作用大，後流出層析床，這樣就可以達到分離的目的。
凝膠層析的關鍵在於建立液固相平衡，然後以合適的洗脫速度將不同物質分離流出。溫度高有利於快速建立液固相平衡。但是，溫度高也造成溶質在液體中會擴散太快，導致分離效率降低。
目的是分離混合物，獲得一定數量的純凈組分，這包括對有機合成產物的純化、天然產物的分離純化
㈡ 色譜柱柱效如何檢測
判斷色譜柱柱效下降可以通過以下幾個途徑：
1.看峰分離度怎麼樣，分離度直接關系測試結果准確性，可以判斷柱效是否下降，柱效下降分離度一般會變差。
2.通過譜圖峰型的變化，是否有嚴重前伸和拖尾現象，峰型是否規則來看，如果峰型很差了，柱信激效已經下降了，可以及時採用乙腈和甲醇等溶劑進行修復。
3.通過壓力變化和出峰時間來判斷，一般柱遲坦螞效下降時伴隨著柱壓的升高和降低，此時出峰的時間也會和之前有很大差異。
4.還可以根據新的柱子的保留時間判斷,看重復性,平行性如何碼埋.
1)
保留時間變短；
2）理論塔板數降低；
3）峰對稱度變差；
4）分離度減小。
㈢ 藍色葡聚糖 葡萄糖凝膠柱
1.凝膠的預處理
交聯葡聚糖凝膠的市售商品多為乾燥顆粒，使用前必須充分溶脹。方法是將欲使用的干凝膠緩慢地傾倒入5～10倍的去離子水中，參照相關資料中凝膠溶脹所需時間，進行充分浸泡，然後用傾倒法除去表面懸浮的小顆粒，並減壓抽氣排除凝膠懸液中的氣泡，准備裝柱。在許多情況下，也可採用加熱煮沸方法進行凝膠溶脹，此法不僅能加快溶脹速率，而且能除去凝膠中污染的細菌，同時排除氣泡。
2.裝柱
層析柱的選擇一般根據分離樣品的種類和樣品的數量而定。純化蛋白質時，柱床體積應為樣品體積的25～100倍察孫。去除鹽及游離熒光素約為樣品體積的4～10倍。柱太短，影響分離效果。柱長一些，分離效果好，但柱太長，則延長分離時間，樣品也稀釋過度。層析柱的內徑也要選擇適當。內徑過細，會發生「器壁效應」，即靠近管壁的流速要大於中心的流速影響分離效果。所以層析柱的內徑和高度應有一定的比例。對於除鹽來說應為1︰5～1︰25；對於純化蛋白質來說應為1︰20～1︰100。
凝膠柱的裝填方法和要求，基本上與離子交換柱的制備相同。一根理想的凝膠柱要求柱中的填料(凝膠)密度均勻一致，沒有空隙和氣泡。通常新裝的凝膠柱用適當的緩沖溶液平衡後，將帶色的蘭葡聚糖–2000、細胞色素，或血紅蛋白等物質配製成質量濃度為2g/L的溶液過柱，觀察色帶是否均勻下移，以鑒定新裝柱的技術質量是否合格，否則，必須重新裝填。
3.加樣與洗脫
（1）加樣量：加樣量與測定方法和層析柱大小有關。如果檢測方法靈敏度高或柱床體積小，加樣量可小；否則，加樣量增大。例如利用凝膠層析分離蛋白質時，若採用28Onm波長測定吸光度，對一根2cm×6Ocm的柱來說，加樣量需5mg左右。一般來說，加樣量越少或加樣體積越小(樣品濃度高)，解析度越高。通常樣品液的加入量應掌握在凝膠床總體積的5％～10％。樣品體積過大，分離效果不好。
對高解析度的分子升沒差篩層吵皮析，樣品溶液的體積主要由內水體積(Vi)所決定，故高吸水量凝膠如Sephadex G-200，每mL總床體積可加0.3～0.5mg溶質，使用體積約為0.O2倍總體積；而低吸水量凝膠如Sephadex G–75，每mL總床體積加溶質質量為0.2mg，樣品體積為0.Ol倍總體積。
（2）加樣方法：如同離子交換柱層析一樣，凝膠床經平衡後，吸去上層液體，待平衡液下降至床表面時，關閉流出口，用滴管加入樣品液，打開流出口，使樣品液緩慢滲入凝膠床內。當樣品液面恰與凝膠床表面持平時，小心加入數mL洗脫液沖洗管壁。然後繼續用大量洗脫液洗脫。
（3）洗脫：加完樣品後，將層析床與洗脫液儲瓶、檢測儀、分部收集器及記錄儀相連，根據被分離物質的性質，預先估計好一個適宜的流速，定量地分部收集流出液，每組分一至數mL。各組分可用適當的方法進行定性或定量分析。
凝膠柱層析一般都以單一緩沖溶液或鹽溶液作為洗脫液，有時甚至可用蒸餾水。洗脫時用於流速控制的裝置最好的是恆流泵。若無此裝置，可用控制操作壓的辦法進行。樣品體積不宜過多，最好為床體積的1％～5%，最多不要超過10%。樣品濃度也不宜過大，濃度過大粘度大，分離效果差，一般不超過4%。
洗脫液應與膨脹一致，否則更換溶劑，凝膠體積會發生變化，影響分離效果。洗脫液要有一定的離子強度和pH值。分離血清蛋白常用0.02～0.1Mol/L pH 6.9～8.0的PBS液（0.14Mol/L NaCl）和0.1Mol/L pH8.0Tris-HCl緩沖鹽溶液（0.14Mol/L NaCl）。
凝膠再生和保存
凝膠層析的載體不會與被分離的物質發生任何作用，因此凝膠柱在層析分離後稍加平衡即可進行下一次的分離操作。但使用多次後，由於床體積變小，流動速率降低或雜質污染等原因，使分離效果受到影響。此時對凝膠柱需進行再生處理，其方法是:先用水反復進行逆向沖洗，再用緩沖溶液平衡，即可進行下一次分離。
對使用過的凝膠，若短時間保存，只要反復洗滌除去蛋白質等雜質，加入適量防腐劑即可；若長期保存，則需將凝膠從柱中取出，進行洗滌、脫水和乾燥等處理後，裝瓶保存。
㈣ 為什麼要柱效檢測具體步驟怎麼弄要詳細步驟和運算
固定柱床層析是一種多功能的分離技術，常用於生物醫葯的分離中。
無論是在保證純化過程的穩定性穗蠢還是保證最終產物的安全性上，填充柱的制備和質量認證都是極為重要的猜正陪步驟。
即使柱效檢測不能作為單一參數對後期的純度和回收率進行預測，至少在啟動純化工藝前可作為一種快速途徑對層析柱和設備性能進行檢測。所以需要檢測柱效。
1，系統准備
對系統和管道進行潤洗准備
清除在包裝、儲存或運輸過程中累積在管道和分流系統中的空氣
將層析柱置於1.5 柱體積以上的洗脫液中進行平衡。若柱平衡在鹽溶液中進行，則需要保證出口的電導和入口的電導一致。平衡時的液流方向需與測試時一致。測試方向既可向上流也可向下流。
2，運行脈沖柱效檢測
將提前准備好的一定體積的樣品（1%柱體積）載入於柱上，上樣最好採用樣品環，超級容量杯或樣品泵。
3，通過測定峰寬和對稱性評價
相對峰寬通常用一定數量的理論塔板（N），
一個理論塔板的等價高度（HETP）
顆粒半徑 （d/P）清衫
或更常用摺合了的塔板高度（h）來進行描述：
h=HETP/d/P 對稱性As
對稱因子As 描述了與理想高斯峰形狀的偏差，通過對10%
峰高處的峰寬進行計算得到：
As=b/a