A. 細胞活力測定常用的簡便方法是
MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點:由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水,需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的准確性產生影響,而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
細胞活力常用百分比表示,活力的大小對試驗結果有很大影響。細胞活力的測定有許多方法,最簡便常用的方法是台盼藍(trypanblue)染色法。台盼藍又稱錐藍,是一種陰離子型染料,這種染料不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色,但死亡細胞的細胞膜通透性增加,可使染料通過細胞膜進入細胞內,使死細胞著色呈藍色。
B. mtt法和cck法是否適用於所有細胞進行細胞活性的檢測
是。檢測細胞存活和生長的方法。
MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢(Formazan)並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲臢,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。
CCK-8法:是MTT的改善,過程簡略,中心不需求吸出孔內的培育基,這么就減小了差錯,別的CCK-8反響時間也短,最短1個小時就夠了,特別適合做急性效果。還有CCK-8對細胞成長沒有影響,測完細胞活性後,去掉含CCK-8的培育基,用新鮮培育基能夠持續培育,並且還能夠持續做其它目標的檢查。MTT就不能。
國產分裝的CCK-8試劑盒在質量穩定性上有不足。而原產於國內實驗室的CCK-8試劑盒有些具有較好的檢測結果,在批次之間的穩定性上較難控制。至於原裝進口供應CCK-8試劑盒的進口品牌並不多,就連Abcam、Thermo,Sigma等等幾個品牌都不能夠提供CCK-8試劑盒,而其它品牌在性價比上遠遜於Abbkine產品。
作為Abbkine品牌旗下首款細胞分析旗艦產品,Cell Counting Kit (CCK-8),Abbkine研發工程師為其傾注了大量的投入,不斷摸索優化最佳的配方,每一份努力只為讓科研工作者更加簡單,高效,穩定地獲取珍貴的科研數據。