生物毒性檢測方法

① 河魨毒素的檢測方法

河純毒素在發現之初人們就在不斷尋找其更好的檢測方法。河魨毒素檢測常用的方法有小鼠檢測法、酶聯免疫法、薄層色譜法、柱後衍生高效液相色譜檢測法、氣質聯用法和液質聯用等。國外較多地採用氣質聯用、液質聯用的方法檢測河魨毒素。
小鼠生物法（以30分鍾內將一體重20克小鼠致死所用河純毒素的量為一鼠單位）是最常用、最直觀的檢測方法，通過小鼠死亡前所呈現出的典型的河魨毒素中毒症狀，可迅速地將河魨毒素與其它致死性物質區分開。最早對河毒素進行定量分析研究是在1941年，當時斯坦福大學在研究蠑螈毒素時引進了鼠單位（Mouse unit，MU）概念。其原理是，一定體重的小鼠經腹腔注射TTX後，其死亡時間的倒數與注射TTX劑量之間存在著線性關系，因此可根據小鼠死亡時間推斷TTX的含量。此法測得的毒力用小鼠單位（mouse unit，MU）表示。黃登福等採用同樣的方法，使用ICR品系小鼠建立了測試TTX毒素的方法，1MU=0.178μgTTX。但實際使用時因個體差異大、重現性不好，而且需有一定規模才能客觀反映實驗結果，因此該法的應用受到限制。
免疫酶技術是20世紀60年代發展起來的新的免疫測定法，它是抗原抗體的免疫反應與酶的高效催化作用原理的有機結合。Watabe等首先於1989年建立了用牛血清白蛋白（BSA）連接河魨酸（TDA）作為抗原的酶聯免疫吸附檢測（ELISA）法，檢出限為0.3-1000.0mg/L。 李世平等應用小鼠生物試驗和間接競爭抑制酶聯免疫吸附試驗（ELISA）同步檢測17份河魨肝組織和20份河魨肌肉組織中的河魨毒素含量，並對2種方法的檢測結果進行比較。結果表明，ELISA法與小鼠生物試驗法測得的結果相符合。由於ELISA法測定程序簡便易行，速度快，靈敏度高，因而在河魨毒素的定量檢測以及預防河魨中毒方面具有廣泛的應用前景。
高效液相色譜是分析、制備領域應用最為廣泛也最為成熟的技術之一，它具有分離效率高、解析度好及速度快等特點。張虹等採用醋酸與TTX結合形成離子對在ODS柱上採用紫外檢測器直接測定TTX含量，該方法操作簡單、快速、准確，最低檢測限50ng。 王小逸等還利用蒸發光散射檢測器進行TTX測定，該法可用於微克水平河魨毒素含量的測定。劉海新等採用柱後衍生高效液相色譜法檢測水產品中的河魨毒素含量，樣品先由0.1%乙酸提取，再經過C18固相萃取柱凈化。以庚烷磺酸鈉為離子對試劑，應用反相離子對液相色譜分離河魨毒素，採用在線柱後衍生系統，熒光檢測器定量檢測。河魨毒素在5-1600ng的范圍內呈良好的線性相關，相關系數r=0.9997；1、2、8μg/g，3個濃度水平添加樣，日內和日間的回收率為80.9-91.2%，相對標准偏差為1.93% -5.57%；方法定量限為1μg/g。高效液相色譜熒光檢測器要比紫外檢測器具有更低的檢測限，而TTX沒有熒光吸收，所以必須先要衍生化成具有熒光吸收的物質，操作比較繁瑣。
HPLC譜圖冊參考資料。
隨著質譜技術的發展，質譜所具有的超強定性能力使色譜質譜聯用成為分析行業最有效最准確的分析方法之一。1993年SaitoT利用氣-質聯用從刀魚中檢測到TTX及其同分異構體的存在。Nagashima等利用氣-質聯用從暗紋東方魨肝臟含有的高分子物質中檢測到河魨毒素的存在。吳平谷等用2%乙酸/甲醇提取出河魨毒素，用正己烷脫脂，然後用鹼將河魨毒素水解成2-氨基-8-羥基-6-羥甲基-喹唑啉（C9鹼），水解液經過C18、SLH固相萃取柱凈化，BSTFA衍生，採用氣相色譜—質譜法全掃描方式測定。液相色譜質譜法比氣相色譜質譜法具有更廣的應用范圍，不需要衍生化，大大簡化了分析手段。 Tsai等採用了液相/質譜聯用法來測定河魨中的TTX。 李愛峰等應用C18反相色譜柱和HILIC親水作用色譜柱，建立了河魨毒素（TTX）的液相色譜—電噴霧離子阱質譜聯用分析方法。 鄭雍怡等建立了在大鼠腹腔注射給葯後，測定其血漿中河魨毒素的高效液相色譜—質譜聯用（LC/MS）定量檢測方法。 王洪允等建立了LC-MS-MS測定血漿中河魨毒素的檢測方法，其檢測限濃度為1ng/mL。
河魨毒素質譜圖冊參考資料。
熒光法是最早建立的定量檢測TTX的儀器分析方法。1976年，Saito等首先提出了熒光法，原理是加鹼水解後生成2-氨基6-羥甲基8-羥基喹唑啉（簡稱C9鹼），該物質發熒光，建立了最早的熒光分析法；其後，又有研究對熒光檢測法進行了改進，建立了連續自動熒光分析方法。 但由於熒光分光光度計在中國應用不如紫外分光光度計普遍，因此根據TTX鹼水解生成C9鹼的同時定量地生成草酸鈉，此結構在紫外區有明顯吸收峰的特點，陳玉仁等建立了紫外分光光度法。該法與熒光法相比，二者最低檢出限接近，但後者儀器設備較便宜。
Nagashima等建立了薄層色譜快原子轟擊質譜的測定方法。先在LHP-K板上進行TLC，純化TTX及其衍生物，然後用質譜定量，最低檢出限為0.1g。此法可以區分在其它TLC方法中難以區分的TTX和脫水TTX，其優點還在於不需TMS硅烷化，甚至當被測物的TLC行為不清時也可以測定。 1988年，王健偉研究建立了不需水解的薄層色譜（TLC）分析方法用於TTX的定量檢測。採用火焰離子檢測器，不需將TTX降解為C9鹼，避免了衍生反應過程中可能存在的干擾。
河魨毒素色譜圖圖冊參考資料。

② 生物毒性是什麼意思，基本應用是什麼樣的

生物毒性指樣品對生物橡明陵（此處生物作為感測器）的毒性強弱，分急性毒性和慢性毒性，通常以半致死濃度表示。
應用嘛，環保，醫學臨床，自來水，海關及公安。
由於生物感測器是一種生物，必然受到越復雜、越高級的生物，其形態表現越復雜的規則制約，比如一個人哭，並不一定槐李就代表哀傷。
目前常見的生物感測器分為魚類、貝類、藻類、跳騷類和發光菌等。
目前我國常用的是發光菌和魚類，其中費歇爾弧菌（鹹水培養，進口）、青海弧菌（淡水類，國產）和斑馬魚是常見的感測器，並有不少廠家生產出來相應的儀器，以檢測生梁戚物毒性。
希望對你有幫助。

③ 細胞活性和細胞毒性檢測的實驗方法

細胞數量確定

1.將細胞懸浮液（100μL/孔）接種在96洞孔板中。將板在潮濕的培養箱中預孵育（例如，在37℃，5％CO2下）。

2.向板的每個孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入氣泡，因為它們會干擾O.D.讀數。

3.將培養板在培養箱中孵育1-4小時。

4.使用酶標儀測量450 nm處的吸光度。

細胞增殖和細胞毒性測定

1.將種子細胞以103-104個細胞/孔的密度在96孔板中在100μL培養基中培養。將細胞在CO2培養箱中於37℃培養24小時。

2.將不同濃度的待測物質加入板中。

3.將培養板在培養箱中孵育適當的時間（例如，6,12,24或48小時）。

4.使用重復移液器向板的每個孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入氣泡，因為它們會干擾O.D.讀數。

5.將培養板在培養箱中孵育1-4小時。

6.在讀取孔板之前，重要的是在軌道振動器上輕輕混合1分鍾，以確保顏色均勻分布。

7.使用酶標儀測量450 nm處的吸光度。

數據分析

統計分析有幾種方法，您可以選擇使用O.D.值或細胞數量，我們提供其中一種方法。

細胞存活率（％）= [（As-Ab）/（Ac-Ab）]×100

抑制率（％）= [（Ac-As）/（Ac-Ab）]×100

As =實驗孔吸光度（含有細胞，培養基，CCK-8和待測化合物的孔的吸光度）。

Ab =空白孔吸光度（含有培養基和CCK-8的孔的吸光度）。

Ac =對照孔吸光度（含有細胞，培養基和CCK-8的孔的吸光度）。

製作標准曲線

1. 細胞計數板計數細胞懸液中的細胞數。

2. 使用培養基，等比稀釋細胞懸液為一個濃度梯度，通常需要5-7個濃度梯度，每組幾個復孔。然後接種細胞。（注意每孔的細胞數量。如果您將細胞懸液稀釋在管中，在加入培養板的孔之前，請小心再次混勻細胞。每孔中細胞懸液的體積應該是一致的。）

3. 培養直至細胞貼壁（通常2-4小時），然後每100 μl培養基加入10 μl CCK-8。繼續孵育1-4小時，用酶標儀測量450nm處的吸光度。製作出一條以細胞數為X軸坐標，O.D.值為Y軸坐標的標准曲線。

可以基於該曲線確定待測樣品的細胞數。使用此標准曲線的先決條件是培養檢測條件相同。

注意事項

1. 確保葯物和CCK8均勻分布在培養基中。

2. 細胞增殖越多, 顏色越深; 細胞毒性越強，顏色越淺。

3. 對於貼壁細胞，每孔至少需要1000個細胞（100 μl培養基）。對於白細胞，由於靈敏度較低，每孔至少需要2500個細胞（100 μl培養基）。推薦的96孔板每孔最大細胞數為25000。如果使用24孔或6孔板進行該檢測，請計算相應的每孔的細胞數，並調整CCK-8的體積，使其為每孔總液體體積的10％。

4. 因為CCK8測定是基於活細胞中的脫氫酶活性，影響脫氫酶活性的條件或化學物質可能導致實際活細胞數與使用CCK-8測定活細胞數之間有差異。

5. WST-8可能與還原劑反應生成WST-8 formazan。如果使用還原劑 (例如一些抗氧化劑)會干擾檢測。如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設法去除。

6. 孵育2小時後，背景O.D.值一般為0.1-0.2單位。

7. 注意不要在孔中引入氣泡，因為它們會干擾O.D.值。

8. 如果您想對CCK8溶液進行滅菌，請使用0.2 μm的膜過濾溶液。

9. 孵育時間因孔中細胞的類型和數量而異。通常，白細胞著色較弱，因此可能需要較長的孵育時間（長達4小時）或大量細胞（~105細胞/孔）。

10. 如果細胞懸液中存在高濁度, 測量並減去樣品在600nm或更高波長的O.D值。

11. CCK8不能用於細胞染色。

12. 培養基中的酚紅不會影響實驗結果，酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

13. CCK8的毒性非常低，在CCK8測定完成後，相同的細胞可用於其他細胞增殖測定，例如結晶紫測定，中性紅測定或DNA熒光測定。（除非細胞極為稀少，不推薦。）

14. 該試劑盒可用於大腸桿菌，但不能用於酵母細胞。

15. 在讀取平板之前，您可以在搖床上輕柔混勻。

16. 我們建議將細胞接種在靠近培養板中央的孔中，最外圍一圈孔中的培養基容易蒸發，可以用PBS，水或培養基填充這些孔。

17. 如果您沒有450nm濾光片。您也可以使用吸光度在430和490nm之間的濾光片, 450nm濾光片具有最佳靈敏度。

18. 測量450nm處的吸光度，如果您需要進行雙波長測定，作為參考波長可以測定650nm處的吸光度。

19. 葯物中金屬離子的存在可能會影響CCK8的靈敏度。終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制 5%、15%、 90% 的顯色反應，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會100%抑制。

Glpbio是新啟的世界領先的高性能的生命科學產品供應商之一，產品涵蓋癌症、神經科學、抗感染、表觀遺傳學等20個熱門研究領域，覆蓋Akt、Jak等近千個細分靶點。

上海宏葉生物科技有限公司是GlpBio在中國區的總代理。

推薦測試劑 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

④ 發光細菌法測生物毒性

四川省的各級環境監測站都配備了發光細菌法生物毒性檢測陪頌族設備，四川省環科院就有北京濱松公司生產的水質毒性快速檢測儀。
你的樣品如果是有顏色的，建議進行稀釋後檢測；如果樣品蘆弊不溶於水的話，那就需要選擇適宜的助溶劑，再扣除助溶劑的毒性。

如再有關於發光細菌的櫻橡相關問題可隨時發郵件：[email protected]

⑤ 毒理學試驗方法有哪些

現代毒理學的研究方法，由於其本身包括眾多的分支學科，分別在相應的學科領域里建立了自己的研究方法，現歸納為兩大類。(一)實驗研究(微觀研究)動物實驗的方法仍是現代毒理學實驗的重要方法之一，傳統的毒理學通過整體動物實驗已為人類提供了大量的以劑量-效應(反應)為主的資料庫，結合人群接觸水平對許多化學物質進行了安全性(危險度)評價。
由於外源物的數量巨大，整體動物實驗需要消耗大量的時間和經費，也不能滿足數以萬計的外源化學物質的毒性評價要求，另一方面為了保護動物，盡量減少動物的使用，所以由過去以整體動物試驗佔主導地位的觀念，轉向以體外試驗為主導地位的趨勢。但也需指出，體外試驗的發展並不排斥整體實驗的重要性，兩者相互補充，互為驗證才能為科學研究提供可靠數據，隨著生命科學的發展，分子生物學的理論及技術被引入現代毒理學，近年來在分子水平上建立了許多新方法。

1．體內試驗
哺乳動物體內試驗，也稱整體動物實驗，一般包括：急性毒性試驗、亞急性毒性試驗、亞慢性毒性試驗及慢性毒性試驗。還有特殊毒性實驗，如哺乳動物致突變試驗、致畸試驗、致癌試驗。以上試驗在毒理學中統稱「三性」和「三致」試驗。

常用的試驗動物：大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠、家兔、狗、猴等。檢測環境污染物的毒性試驗，常選用魚、蚤類或其他水生生物。還可用鳥類、昆蟲進行試驗。
近年來為了從分子水平探討致突、致癌機制，轉基因動物已開始在毒理學試驗中應用。
轉基因動物是一種集整體水平、細胞水平和分子水平於一體的實驗動物，更能體現生命整體研究的效果，它是把經典的與現代的毒理學研究方法相結合，無疑會推動現代毒理學實驗研究的發展。
2．體外試驗
利用游離器官、培養的細胞、細胞器以及利用微生物等進行毒性研究的方法為體外試驗，此方法多用於觀察外源物對生物體特殊毒性的初步篩檢及作用機制和代謝轉化過程的深入研究。

體內與體外試驗各有優點和局限性，應根據試驗目的和要求，選擇一組試驗，才能互相彌補優缺點。(二)人群調查(宏觀研究)人群調查也稱為人群毒理學，是在人群中研究外源物對人體產生毒作用的規律，為人群檢測和制訂預防措施提供比動物試驗更直接更可靠的毒理學資料，主要包括以下3個方面：
1．中毒臨床觀察
常見於偶然發生的事故，如誤服、自殺、毒性災害等，通過急性中毒事故的處理和治療，可直接觀察到中毒的症狀並分析可能的毒效應的靶器官。

2．志願者試驗
在不損害人體健康的原則下，有時可設計一些不損害人體健康的受控試驗，僅限於低劑量、短時期的接觸毒性作用可逆的化學品，目前國際上提倡健康志願者的毒性試驗，減少由動物試驗結果外推於入的不確定性，特別是一些神經毒物出現的毒性效應，如頭暈、目眩、復視等需要表達的中毒症狀，只有人才能真實地反映出來，所以國外健康志願者的毒理學研究資料倍受重視。

3．流行病學調查
將動物試驗的結果，進一步在人群調查中驗證，可以從人群的直接觀察中，取得動物試驗所不能獲得的資料，優點是接觸條件真實，觀察對象是一個大的群體，為人群檢測和防治措施提供比動物試驗更直接、更可靠的科學資料，但是也存在許多難點：①人群中觀察外源物的毒性效應大多數為慢性毒性效應，特別是人類致癌物質其致癌效應所需時間過長；②接觸人群中所用的觀察指標是非特異性的，與對照人群比較需要足夠例數：③外環境因素混雜，外源物的種類繁多而且多種化學物質可出現聯合作用，難以確定某種特定的化學物質毒性效應和其因果關系。
近年來由於分子生物學的發展和滲透，在傳統流行病學調查方法中引進了細胞、分子水平的人群檢測方法，如生物標志物作為癌症早期判斷的信息，把分子生物學與流行病學結合為一體發展為分子流行病學。這門新興學科利用分子生物學、分子遺傳學、生物化學、免疫學等手段研究，評價不同人群或個體致癌危險度及其機制，從而使現代毒理學由實驗動物研究發展到人群和個體易感性研究的新階段。
它可以解答人體從接觸化學物質到發生疾病的過程中所發生的一系列連續性的變化，從中提取更多的癌前病變的信息，為癌症的早期判斷、早期防治提供科學依據。可以預測，分子流行病學在21世紀將會得到更大的發展。
綜上所述，正確的方法是將宏觀研究與微觀研究有機地結合起來，宏觀研究為微觀研究提供線索，微觀研究為宏觀研究提供依據，兩者結合起來才能對外源化學物質作出准確的危險度評價。

⑥ 生物測試的測試方法

(1)短棚配期生物測試
測試時間一般為4—7天，最長不超過14天。
(2)中期生物測試
測試時間在15—90天。
(3)長期生物測試
部分生命周期扮談或全生命周期的生物測試。測試時間超過90天的為長期生物測試。當前長期低濃度毒物的排放越來越多，因此生物長期接觸低濃度的潛在危害越來越引起人們的注意。過去確定毒物的安全濃度都是根據急性毒物測試的結果推算，但是這有很大的局限性。一是致死50%的毒物濃度不是安全濃度; 二是測試過程中忽視了除死亡以外的其他一切危害。
長期生物測試的目的是測定毒物對生物的慢性毒性影響，包括測試生物是長期接觸低濃度毒物的慢性(或遲發性)毒鏈缺指性和研究毒物對生物影響的實質。

⑦ LD50的測定

1LD50的測定方法很多，如：目測機率單位法、加權機率單位法（Bliss氏法）、寇氏法（Karber氏法）及序貫法等，其中Bliss法是比較推薦使用的方法。此法對劑量分組無嚴格要求，不需要劑量組有0%和100%死亡率，是目前公認最准確的測定方法。但本法計算繁瑣，故現多採用計算機程序計算。

2我國衛生部規定，Bliss法是作為新葯LD50測定評定必須採用的方法。

3LD50【半數致死量】歷敗搏是評價化學物質急性毒性大小最重要的參數，也是對不同化學物質進行急性毒性分級的基礎標准。化學物質的急性毒性越大，其LD50的數值越小。

4常與ED50【半最大效應濃度】配合計算治療指數LD50/ED50，用以評價葯物的安全性，治療指數大的葯物相對安全。

5LD50越大越好，就是說濃度要很高很高才會導致半數死亡

6ED50就越小越好，意思是很少的劑量就能發揮作用

7單就以上某一項來說是沒有意義的，LD50大ED50也大，同樣是危險性大

8所以用其比值描述葯物的安全性，而單獨的LD50就只能描述葯物的毒性了。

(7)生物毒性檢測方法擴展閱讀：

LD50的表達方式通常為有毒物質的質量和試驗生物體重之比，例如"毫克/千克體重"。雖然毒性不一定和體重成正比，但這種表達方式仍有助比較不同物質的相對毒性，以及估計同一物質在不同大小動物之間的毒性劑量。

應用半數致死這量度方法有助減少量度極端肢祥情況所帶來的問題，以及減少所需試驗次數；然而這亦代表LD50並對所有試驗生物的致死量：有些可能死於遠低於LD50的劑量，有些卻能在遠高於LD50的劑量下生存。在特殊需要下，研究人員亦可能會量度LD1或LD99等指標（即殺死1%或99%試驗總體之劑量）。

物質的毒性往往受給予方式影響。一般而言，口服毒性會低於靜脈注射的毒性。故此在表達LD50時經常會附帶給予方式，例如「LD50i.v.」表示靜脈注射下的LD50。

和LD50相關的兩種指標，LD50/30和LD50/60，是分別指在沒有治療的情況下，導致受試總體在30天或60天後半數死亡的劑枯鉛量。這些指標通常用於描述輻射毒性。

⑧ 微囊藻素的毒素檢測

用於檢測微囊藻毒素的方法有很多，例如生物分析法、細胞毒性檢測法、酶聯免疫吸附法（ELISA）、高效液相色譜法（HPLC）、毛細管電泳法（CE）、蛋白磷酸酶抑製法等，這些方法都有各自的優點，但又有不同程度的缺陷性.生物檢測法不能區分微囊藻毒素的異構體，工作量很大；細胞毒素檢測法的靈敏度較低；高效液相色譜法的預處理過程繁瑣，設備昂貴；CE法的重現性差；蛋白磷酸酶抑製法不能區分特異的毒素同系物，且後處理困難。 動物試驗法是最早採用的常規毒性分析法，主要是採取對小鼠進行灌喂或腹腔注射來鑒定藻毒素的毒性。該方法能直觀地反映微囊藻毒素的總體毒性。用純化的MCs或藍藻中粗提取的藻毒素進行測試，根據半致死劑量（LD50μg/kg）可初步確定其毒性。除個別異構體的LD50為200~250μg/kg，多數MCs的LD50為60~70μg/kg。該法具有操作簡單，結果直觀、快速等優點，但需要消耗較多的毒素，靈敏度和專一性都不高；無法准確定量，也不能辨別毒素的異構體類型；小鼠的維持費用高、工作量大。因此，動物試驗法通常只作為毒性檢測的最初篩選方法，並且正日益被其他方法所取代。
細胞毒性檢測技術是利用毒素對細胞的毒性作用來檢測毒素的一種技術，不僅可以判斷毒素是否存在，還可以對毒素進行精確的定量。谷康定等用2步灌流法制備大鼠原代肝細胞，經MC-LR處理後，數小時後細胞形態學即發生改變，其靈敏度可達μg/L級。Fladmark等利用藻毒素誘導沙門氏菌和大鼠的原發性肝細胞死亡的能力為參數檢測MC-LR，表明懸浮培養液中的沙門氏菌肝細胞為檢測較廣范圍的肝毒素提供了迅速靈敏的系統。該技術靈敏度雖然較高，但操作繁瑣，基本上處於初步研究階段，較難得到推廣應用。 高效液相色譜法（HPLC）是最常用的MC分析方法之一。自然界中MC常以痕量形式存在且干擾物質較多，所以色譜檢測前必須先將樣品通過萃取、吸附、富集等預處理，凈化洗脫，再將洗脫液進行HPLC色譜分析，經檢測器檢測，將樣品色譜圖的保留時間和峰面積與標准品比較，從而進行定性和定量。HPLC檢測MC主要使用的檢測器有紫外（UV或VWD）、熒光（FL）、化學發光（CL）、二極體陣列（PDA 或DAD）等，最常用的是紫外和二極體陣列檢測器。MC是一種環狀多肽，其共軛雙鍵在237 nm～239 nm下有最大吸收，故可通過紫外檢測。紫外檢測器成本較低，但MC各種異構體之間的特徵吸收很接近，也就是說，紫外檢測器在識別MC過程中存在相互干擾的缺陷，影響測定準確度；另外如果有其他物質伴隨MC一同洗脫出來，其單波長吸收峰就會受到干擾。二極體陣列檢測器比單波長紫外檢測器解析度高（它有一個特定的光譜吸收范圍，通常是190 nm～280nm），噪音低，線性范圍寬，其缺點是流動相的選擇有一定限制，流動相的截止波長必須小於檢測波長。
HPLC可以對MC進行定性和定量，是了解MC化學性質甚至結構的重要手段，但是它對高純度標准品高度依賴，而由於技術的限制，商業用標准品又非常有限，這就限制了HPLC測定MC的發展。
液質聯用法（LC-MS）以液相色譜為分離系統，質譜為檢測系統。MC樣品在質譜部分和流動相分離，被離子化後，經質譜的質量分析器將離子碎片按質量數分開，經檢測器得到質譜圖。所以只要知道相對分子質量，就可以對樣品進行精確的定量檢測。1990年，LC/MS 技術首次被應用於藍藻毒素的檢測。
HPLC-電噴霧電離質譜法（HPLC-ESI-MS）是帶有電噴霧離子化系統的質譜分析法。其大致原理是MC樣品溶液在強電場的作用下破碎成許多細小的帶有電荷的液滴，解吸出離子，離子碰撞活化裂解成碎片，從而獲得分子的結構信息，樣品的分子離子和裂片離子經一系列分離器和靜電透鏡進入質量分析器進行質譜分析。1993年開始使用此方法檢測MC。
四極桿質譜由四根帶有直流電壓（DC）和疊加的射頻電壓（RF）的准確平行桿構成，相對的一對電極是等電位的，兩對電極之間電位相反。當一組質荷比不同的離子進入由DC和RF組成的電場時，只有滿足特定條件的離子穩定振盪通過四極桿，到達監測器而被檢測。通過掃RF場可以獲得質譜圖。四極桿成本低，價格便宜，雖然日常分析的質荷比的范圍只能達到3000，但由於分析器內部可容許較高壓力，很適合在大氣壓條件下產生離子的ESI離子化方式，並且，ESI電離最突出特點是產生多電荷，MC電噴霧電離所產生的電荷分布在3000以下，所以四極桿廣泛地與ESI聯用，另外，三重四極桿由於可以做多級質譜，檢出定量限（LOQ）為10pg，滿足了低含量MC樣品的檢測要求。
離子肼質譜是利用離子肼作為分析器的質譜方法。離子肼（Ion trap）由一對環形電極和兩個呈雙曲面形的端蓋電極組成。在環形電極上加射頻電壓或再加直流電壓，上下兩個端蓋電極接地。逐漸增大射頻電壓的最高值，離子進入不穩定區，由端蓋極上的小孔排出。因此，當射頻電壓的最高值逐漸增高時，質荷比從小到大的離子逐次排除並被記錄而獲得質譜圖。離子肼質譜可以很方便的進行多級質譜分析，對於物質結構的鑒定非常有用。Zweigenbaum JA等人採用離子肼質譜對MC-LR、RR等進行質譜碎裂機理的研究，採用LC 柱富集技術，經切換閥將MC通入質譜，最後採用多級離子肼質譜對其母離子和碎片離子進行碎片斷裂分析。
微囊藻素質譜圖冊參考資料。
飛行時間質譜根據相同能量的離子質量不同時速度不同的原理，使用電子電離源，施加脈沖拉出電壓，再經加速極加快離子速度後進入無場區漂移管。不同質量的離子則以不同的時間通過相同的漂移距離到達接收器。飛行時間質譜掃描速度快，靈敏度高，此設備結構簡單，不受質量范圍限制。Pasquale Ferranti等首次運用高效液相/電噴霧-四極桿飛行時間串聯質譜法（HPLC/ESI-Q-TOF-MS/MS）測定淡水中的MC-RR、-LR、-YR、-LW和-LF，其檢出定量限（LOQ）均達到0.1μg/L。使用基質輔助激光解吸電離飛行時間串聯質譜法（MALDI-TOF-MS/MS）和離子肼串聯質譜法（Ion trap-MS/MS）同時檢測從而比較檢測結果，結果證明HPLC/ESI-Q-TOF-MS/MS檢測淡水中MC具有更高的靈敏度、選擇性和重復性。
超高效液相色譜是分離科學中的一個全新類別，UPLC藉助於HPLC的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統體積及快速檢測手段等全新技術，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。與傳統的HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍。Jing Wang等運用超高效液相色譜串聯質譜法（UPLC-MS/MS）檢測浙江省地表水中的MC-LR、-RR、-LW和-LF，回收率為91.7%～111%，RSD7.9% ～12%，檢出定量限（LOQ）為2.5ng/L，6.0 ng/L，2.5ng/L和1.3ng/L。傳統的液相色譜分離這四種MC需要30min，而UPLC只需要3min；Stuart A.Oehrle等運用UPLC-MS/MS檢測淡水中的7種MC也只用了8 min，其HPLC檢測需要35 min。 利用微囊藻毒素誘發免疫反應產生抗體，利用抗體對抗原的特異性識別來對各種毒素進行檢測。以免疫技術為基礎，微囊藻毒素的免疫化學法包括酶聯免疫吸附法、放射免疫分析法、免疫親和色譜法、膠體金法及免疫感測器法等。這類方法靈敏度較高、樣品處理簡單，便於操作，其檢測限低於WHO水平，被認為是較有發展前景的方法。
自20世紀80年代末Kifir、Brooks等分別報道了對藻類毒素的單克隆抗體和多克隆抗體以後，酶聯免疫吸附技術（ELISA）開始用於MCs的分析。該技術具有較高的靈敏度、快捷的分析速度等優點。直接競爭ELISA方法其原理是將抗藻毒素抗體包被在多孔板上，被檢樣品、MC-LR標准品與標記有過氧化物酶的MC-LR競爭性結合多孔板上的抗體，過氧化物酶催化底物產生的顏色與MC-LR的濃度成反比，即深色表明MC-LR濃度低，淺色表示MC-LR濃度高。也有將MC-LR牛血清白蛋白包被在多孔板上，利用第一抗體和帶標記的抗體而建立的間接競爭ELISA方法。間接競爭ELISA比直接競爭ELISA方法靈敏度略高。
蛋白磷酸酶法可以反映各種毒素的總量，具有檢測靈敏度高、測定時間較短等優點。Serres等讓未標記的被測毒素和經放射性標記的MC-YR一起與蛋白磷酸脂酶2A（PP2A）進行競爭結合，達到平衡後進行凝膠過濾，使與PP2A結合的毒素和未與PP2A結合的毒素分離，然後檢測收集到的待測125I-MC-YR-PP2A的放射性。根據用B/（Bo-B）（Bo為無毒素時125I-MC-YR的放射性，B為有標准毒素或待測毒素時125I-MC-YR的放射性）和標准毒素的濃度得到的標准曲線即可求出待測毒素的量。Wong等探索了利用比色法篩選水體中的MCs，試驗中以P-硝基苯酚為底物，監測黃色產物P-硝基酚的生成速率以表示蛋白磷酸酶2A的活性。結果表明，比色法蛋白磷酸酶抑制分析是一種簡便、便宜的篩選水體中具有腫瘤促進特性的MCs的工具。

⑨ 生物毒性檢測標准

法律分析：發光細菌法已經成為了成為一種簡單、快速的生物毒性檢測手段，廣泛應用於質檢、環境監測、水產養殖等領域，並被列入了國際標准ISO11348，我國國家標准GB/T15441-1995，德國國家標准DIN38412。

法律依據：《中華人民共和國疫苗管理法》 第二十六條 國家實行疫苗批簽發制度。

每批疫苗銷售前或者進口時，應當經國務院葯品監督管理部門指定的批簽發機構按照相關技術要求進行審核、檢驗。符合要求的，發給批簽發證明；不符合要求的，發給不予批簽發通知書。

不予批簽發的疫苗不得銷售，並應當由省、自治區、直轄市人民政府葯品監督管理部門監督銷毀；不予批簽發的進口疫苗應當由口岸所在地葯品監督管理部門監督銷毀或者依法進行其他處理。

國務院葯品監督管理部門、批簽發機構應當及時公布上市疫苗批簽發結果，供公眾查詢。

⑩ 細菌內毒素檢測

熱原系指由微生物產生的能引起恆溫動物體溫異常升高的致熱物質。它包括細菌性熱原、內源性高分子熱原、內源性低分子熱原及化學熱原等。所以熱原有外生致熱原和內生致熱原之分。
細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖（Lipoply Saccharide）和微量蛋白（Protein）的復合物，它的特殊性不是細菌或細菌的代謝產物，而是細菌死亡或解體後才釋放出來的一種具有內毒素生物活性的物質。
一般來說內毒素是熱原,但熱原不全是內毒素。歐洲葯典委員會副主席J.Van Noordwijk提出：「嚴格地講，不是每一種熱原都具有脂多糖的結構，但所有已知的細菌內毒素脂多糖都有熱原活性」。在葯品生產質量管理規范（GMP）條件下，葯品生產的質量控制一般可以接受的觀點是：不存在細菌內毒素意味著不存在熱原。
熱原檢查法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內，在規定時間內，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規定的一種方法。
細菌內毒素檢查法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產生的細菌內毒素，以判斷供試品中細菌內毒素的限量是否符合規定的一種方法。
細菌內毒素檢查法，現已在《中國葯典》2010年版二部、三部內廣泛應用，但在《中國葯典》2010年版一部內一個葯品都未運用，這主要是由細菌內毒素檢查法的持點所決定的：細菌內毒素檢查法具有較家兔熱原檢查法靈敏、快速、簡便易行、重現性好、結果准確等優點，目前細菌內毒素檢查法已廣泛應用於西葯、生物製品。但同時也應該指出，細菌內毒素檢查是一復雜的酶促反應過程，生產工藝的細微變化都可能引起其干擾的增加，然而根據中葯制劑，成分復雜，影響因素多的特點，因此，中葯注射劑一般還是採用傳統的家兔熱原檢查法。但是對一些具有解毒降溫作用的葯物，因會干擾家兔的生理活性，引起體溫下降，用家兔法檢測不準，還是應考慮用細菌內毒素檢查法。
由此可見，熱原與細菌內毒素兩者之間既有許多相同之處，但還是有區別的。同時，還要請各位同仁注意，不要將「熱原」誤寫成「熱源」。