『壹』 細胞活力測定常用的簡便方法是
MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點:由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水,需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的准確性產生影響,而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
細胞活力常用百分比表示,活力的大小對試驗結果有很大影響。細胞活力的測定有許多方法,最簡便常用的方法是台盼藍(trypanblue)染色法。台盼藍又稱錐藍,是一種陰離子型染料,這種染料不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色,但死亡細胞的細胞膜通透性增加,可使染料通過細胞膜進入細胞內,使死細胞著色呈藍色。
『貳』 細胞活性檢測的方法有多少種 每種的原理是什麼
簡單說幾個把
染色體法 主要在培養基中利用死活細胞對燃料親和力不同 來判斷
克隆形成實驗 原理是單個細胞在體外增至六代後,後代形成的細胞群體 ,通過計算其克隆形成率 來判斷
比色法 也是比較經典的 M,RR 活體細胞中的線粒體中的琥珀酸脫氫酶可以將M,rr還原成藍紫色的結晶甲醋 死細胞無此功能
『叄』 實驗細胞的活力測定MTS法
BrdU標記法 1.細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中(內放置一蓋玻片),培養1天,用含0.4% FCS培養液同步化3天,使絕大多數細胞處於G0期。 2.終止細胞培養前,加入BrdU(終濃度為30μg/L),37℃,孵育40min。 3.棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。 4.甲醇/醋酸固定10min。 5.經固定的玻片空氣乾燥,0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。 6.5%正常兔血清封閉。 7.甲醯胺100℃,5min變性核酸。 8.冰浴冷卻後PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。 9.按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數,計算標記指數(LI)。 結晶紫法 1.體外細胞培養結束後,去培養液,加入11%的戊二醛固定,置於振盪器上搖20min。 2.固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。 3.置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。 4.加入0.1%的結晶紫液對細胞染色,振搖30min。 5.用蒸餾水洗滌,至多餘的結晶紫液沖洗干凈。 6.置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。 7.加入10%的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。 8.1h後在酶標儀上測定光吸收度,波長595nm。 酸性磷酸酶法 1.96孔細胞培養板中培養細胞,去培養...
『肆』 細胞活性檢測的方法有多少種 每種的原理是什麼
在目前的細胞活性檢測方法中,MTT法是較早且較為經典的方法。但是,由於MTT法形成的甲物是非水溶性的,需要加有機溶劑溶解,這不僅增加了研究人員的工作量,也給實驗帶來了一定的誤差。在這里我們向大家介紹一種國外最新檢測方法—CCK-8法,它具有方便、靈敏、快速、無放射性、重復性好的特點。現在已廣泛用於細胞增殖檢測、細胞毒性檢測、葯物篩選、葯敏試驗等。
另外還將向大家介紹幾種氧化應激和蛋白質抗體標記的新方法。
內容:
1、新型細胞活性檢測方法介紹
2、國外氧化應激測定方法介紹
3、蛋白質抗體標記的新方法介紹
原理恕在下不知
『伍』 請問現在測細胞活性,除了MTT,還有其他好方法嗎
MTT是最常用的檢測細胞活性的方法,但目前也有很多其他選擇。像CCK-8和WST-1,還有一些其他方法不是很常用。
CCK-8比前面的MTT更加靈敏,也越來越受到大家的認可,CCK-8的原理跟MTT其實是相同的,不同之處在於CCK-8法生成的formazan是水溶性的,不需要再吸出培養液加入有機溶劑溶解這個步驟,因此可以減少一定的誤差。對細胞毒性小;為1瓶溶液,毋需預制,即開即用。但是CCK-8價格要比MTT貴,我們選了一個知名度比較好的國產CCK-8試劑盒,炎熙的CCK-8試劑盒,已經用了一年多了,質量穩定,價格比sigma的便宜很多。沒辦法,預算有限。
還有一些檢測增殖,毒性的試劑,像BrdU 等等,沒有親自用過。
『陸』 細胞活性檢測的方法有多少種
細胞活性測定方法有台盼藍染色法、克隆(集落)形成法、 3H 放射性同位素摻入法、 MTT 法等。其中 MTT 法以其快速簡便,不需要特殊檢測儀器、無放射性同位素、適合大批量檢測的特點而得到廣泛的應用。但 MTT 法形成的 Formazan 為水不溶性的,需要加有機溶劑溶解,由於在去上清操作時會有可能帶走小部分的 Formazan ,故有時重復性略差。為了解決這個問題,研究人員又開發了很多種水溶性的四氮唑鹽類:如 XTT 、 CCK-8 ( WST-8 )等。
『柒』 測定微生物細胞活性的方法都有哪些
根據每個細胞有一定的重量而設計的。它可以用於單細胞、多細胞以及絲狀體微生物生長的測定。將一定體積的樣品通過離心或過濾將菌體分離出來,經洗滌,再離心後直接稱重,求出濕重,如果是絲狀體微生物,過濾後用濾紙吸去菌絲之間的自由水,再稱重求出濕重。不論是細菌樣品還是絲狀菌樣品,可以將它們放在已知重量的平皿或燒杯內,於105℃烘乾至恆重,取出放入乾燥器內冷卻,再稱量,求出微生物乾重。
如果要測定固體培養基上生長的放線菌或絲狀真菌,可先加熱至50℃,使瓊脂熔化,過濾得菌絲體,再用50℃的生理鹽水洗滌菌絲,然後按上述方法求出菌絲體的濕重或乾重。
除了乾重、濕重反映細胞物質重量外,還可以通過測定細胞中蛋白質或DNA的含量反映細胞物質的量。蛋白質是細胞的主要成分,含量也比較穩定,其中氮是蛋白質的重要組成元素。從一定體積的樣品中分離出細胞,洗滌後,按凱氏定氮法測出總氮量。蛋白質含氮量為16%,細菌中蛋白質含量占細菌固形物的50%一80%,一般以65%為代表,有些細菌則只佔13%一14%,這種變化是由菌齡和培養條件不同所產生的。因此總含氮量與蛋白質總量之間的關系可按下列公式計算:
蛋白質總量=含氮量×6.25
核酸DNA是微生物的重要遺傳物質,每個細菌的DNA含量相當恆定,平均為8.4×`10^(-5)`NG。因此從一定體積的細菌懸液中所含的細菌中提取DNA,求得DNA含量,再計算出這一定體積的細菌懸液所含的細菌總數。