金葡菌檢測的方法

1. 金黃色葡萄球菌的檢測方法

1、培養特性及形態特徵①培養特性在37℃條件下，需氧與厭氧培養的血液營養瓊脂平板均長出光滑、濕潤、隆起，約1mm大小的金黃色菌落，並且有β溶血現象。②鏡檢結果顯微鏡下觀察該菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄串狀，也有個別2個或3個球菌相連。根據菌落形態、鏡檢結果懷疑該菌為葡萄球菌。2、菌落計數報告將直接計數法試驗中的3個平板中疑似黑色葡萄球菌的金黃色菌落數相加，乘以血漿凝固酶試驗陽性數，除以5，在乘以稀釋倍數，即為每克樣品中金黃色葡萄球菌數量。3、動物感染試驗只注生理鹽水的小白鼠沒有任何變化：接種分離菌的小白鼠在9h內死亡。將死亡的小白鼠剖檢採集病料，進行細菌分離和生化試驗，得到與原分離菌。
「金球菌」列為「極重要質量項目」
金黃色葡萄球菌因思念、三全、灣仔碼頭事件而引發標准爭議，在2011年12月21日實施的速凍食品新國標中，金黃色葡萄球菌從原來「不得檢出」變為「限量檢出」，但這一檢測標準的改變並不代表可以忽略金黃色葡萄球菌的危害性。
在市質監局徵集意見而公示的抽檢項目中查詢到，對包括速凍水餃、湯圓、包子、花捲、饅頭、南瓜餅、八寶飯等在內的速凍米麵食品，仍然計劃把金黃色葡萄球菌列入A類檢驗項目，並標注為「極重要質量項目」，同時速凍米麵食品的沙門氏菌也是A類檢驗。
產品檢出「金球菌」屬嚴重不合格
市質監局介紹，速凍面米抽檢中，金黃色葡萄球菌也是A類檢驗項目。如果食品檢驗項目中任一項或一項以上不符合規定的要求，判定為不合格；當產品存在A類項目不合格時，屬於嚴重不合格；僅有B類項目不合格，屬於一般不合格。
同時，在嬰幼兒奶粉、蛋製品中，三聚氰胺、蘇丹紅也是同樣的A類。為避免一些肉禽食品可能含瘦肉精，此次在肉禽罐頭食品中，還有專門針對瘦肉精的檢測。
速凍食品「金球菌」可限量檢出
中國現行《速凍預包裝面米食品衛生標准》（GB19295－2003）規定金黃色葡萄球菌等致病菌不得檢出。
而衛生部於2012年12月21日實施的《速凍面米製品食品安全國家標准》，將金黃色葡萄球菌檢測由定性轉向定量，規定每批產品抽檢5個樣品中，至多隻能有1個樣品每克生製品中檢出的金黃色葡萄球菌含量在1000至10000個之間。

2. 金黃色葡萄球菌檢測AOAC方法

金黃色葡萄球菌食物中毒的實驗室診斷常通過檢測剩餘食品，根據金黃色葡萄球菌數量達到105cfu/g以上，或者檢出腸毒素來判定。先達基因專注於現場核酸檢測，開發了致病微生物，水產病害，支原體污染等領域現場檢測產品方案。1、常規細菌培養法目前，從食品中檢測金黃色葡萄球菌的常規細菌培養方法(
GB
4789.10-2010《食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》)
，可對食品中金黃色葡萄球菌進行定性和定量檢驗，該方法設備簡單、成本低;
但檢驗時間較長(
3
～
5d)
，操作繁瑣，且靈敏度較低;
不宜應對突發性公共衛生和食物中毒事件中篩檢出金黃色葡萄球菌球菌的污染，

3. 金黃色葡萄球菌的檢驗過程

1、樣品制備：

稱取25g樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯中，固體樣品研磨或置均質器中做成1:10的樣品混懸液。若供計數檢驗，可按十進制遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。

2、增菌與分離培養：

將上述樣品勻液於36℃±1℃培養18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長。將上述培養物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培養18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養24h～48h。

金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直徑為2mm～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈見圖[4]。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或乾燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產生的黑色較淡些，外觀可能粗糙並乾燥。在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈見圖[5]。挑取上述菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。

向左轉|向右轉

4. 有關大腸桿菌、金色葡萄糖球菌等有關醫療監測的檢測指標和方法啊

檢測原理：
大腸菌群是一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，該菌主要來源於人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。食品中的大腸菌群數系以100ml(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
2.儀器設備與器具：
2.1 恆溫培養箱：36±1℃。
2.2 1000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。
2.3 接種針。
2.4 顯微鏡。
2.5 超凈工作台。
2.6 玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。
2.7 天平：感量0.01g。
2.8 滅菌釜。
2.9 培養皿（直徑為90mm）、試管，經121℃、30分鍾滅菌。
2.10試管夾、酒精燈、秒錶、載玻片 3.培養基及試劑：
3.1 乳糖膽鹽發酵管：按照製造廠家使用說明進行配製，滅菌。
3.2 伊紅美蘭瓊脂平板： 按照製造廠家使用說明進行配製，滅菌。
3.3 乳糖發酵管： 按照製造廠家使用說明進行配製，滅菌。
3.4 革蘭氏染色液。
3.4.1 結晶紫染色液：
結晶紫 1g
95%乙醇 20ml
1%草酸銨水溶液 80ml
將結晶紫溶解於乙醇中，然後與草酸銨溶液混合。
3.4.2 革蘭氏碘液：
碘 1g
碘化鉀 2g
蒸餾水 300ml
將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解後，再加蒸餾水至300 ml。
3.4.3 沙黃復染液：
沙黃 0.25g
95%乙醇 10ml
蒸餾水 90ml
將沙黃溶解於乙醇中，然後用蒸餾水稀釋。
3.5 生理鹽水。
4.檢驗程序：
檢樣
↓
稀釋
↓
乳糖膽鹽發酵管，36±1℃，24±2hr

↓ ↓
不產氣 產氣
↓ ↓
大腸菌群陰性 伊紅美蘭瓊脂平板，36±1℃，24±2hr
↓
報告 ↓ ↓
革蘭氏染色 乳糖發酵管，36±1℃，24±2hr
↓
↓ ↓ ↓ ↓
G+ G-，無芽孢桿菌 產氣 不產氣
↓ ↓
大腸菌群陰性 大腸菌群陰性
↓ ↓ ↓
報告 大腸菌群陽性 報告

5.測定方法：
5.1 檢樣稀釋：
5.1.1 以無菌操作將檢樣25ml(或25g)放於含有225ml滅菌生理鹽水的滅菌塑料燒杯中，經充分振搖成1：10均勻稀釋液。
5.1.2 用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水的 試管中，振搖成1：100稀釋液。
5.1.3 重復5.1.2的操作，使成1：1000稀釋液。
5.2乳糖膽鹽發酵試驗：根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計，選擇二個稀釋度，每一稀釋度接種3管，接種量在1ml以上者，用雙料乳糖膽鹽發酵管。1ml及1ml以下者，用單料乳糖膽鹽發酵管。然後置於36±1 ℃培
養箱內，培養24±2hr，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌
群陰性；如有產氣者，則可按以下程序進行。
5.3分離培養：將產氣的發酵管分別接種於伊紅美蘭瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內，培養24hr後取出，觀察菌落形態，並作革蘭氏染色。
5.4證實試驗：在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1～2個進行革蘭氏染色同時接種乳糖發酵管，置於36±1℃溫箱內培養24±2hr，觀察產氣情況。乳糖發酵管產氣，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。
5.5報告：根據證實為大腸菌群陽性的管數，查MPN檢索表，報告每100ml(g)大腸菌群的最可能數。
食品中金黃葡萄球菌的檢測方法
金黃色葡萄球菌是一種引起人類和動物化膿感染的重要致病菌，也是造成人類食物中毒的常見致病菌之一。本菌廣泛分布於自然界，如空氣、土壤、水及其它環境中。在人類和動物的皮膚及外界相通的腔道中，也經常有本菌存在。據報導，在正常人群中的帶菌率可達30%~80%，其中皮膚帶菌率為8~22%，鼻腔和咽喉部等上呼吸道的帶菌率在40~50%以上，因此其可通過各種途徑和方式，尤其是經工作人員的手和上呼吸道而污染食品。由於致病金黃葡萄球菌能產生腸毒素，故一旦細菌污染食品，並在合適的溫度環境下，細菌可以大量繁殖並產生腸毒素，從而引起消費者食物中毒。
由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒，在世界各國都極為普遍。特別是在北美及歐洲等地區發病率更高。在上述這些國家中，每年有金黃色葡萄球菌引起的食物中毒病例，僅次於沙門氏菌，而在細菌性食物中毒病例排到第2~3位，有此而造成的經濟損失也相當慘重，在我國由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒病例也時有報導，所以目前世界各國都把金黃色葡萄球菌列為食品衛生的法定檢測項目。
我國對金黃色葡萄球菌目前採用的方法是以國家標准GB.4789-10-84及檢驗檢疫系統行業標准SN.0172-92作為依據。整個檢測過程獲得最終結果須時5天左右，既費時又費力，並造成貨物積壓，也影響貨物的及時出運，並使貨主的倉儲成本提高，造成較大的經濟損失。
多年來很多食品微生物實驗室都在探索和尋找一些准確性高，並快速的檢測方法，最近我們分別從美國3M公司和法國生物梅里埃公司獲得兩種快速檢測致病性金黃色葡萄球菌的培養基，其名稱為：
① Petrifilm RSA. Count Plate（由美國3M公司研製生產），是一種薄膜型快速檢測金黃色葡萄球菌的計數平板。
② Baird-parker + RPF Agar.（由法國生物梅里埃公司研製生產的用Baird-Parker瓊脂加免血漿纖維蛋白原的金黃色葡萄球菌檢測計數平板）。
原理：Petrifilm. RSA. 測試薄膜是由二部分組成。第一部分是由黃金色葡萄球菌培養基片，此培養基中含有經修正的Barid-Parker，營養成分加上以冷水可溶解的膠質。第二部分是一種耐熱核酸酶（TNase）反應片，含有DNA及甲苯胺蘭 ( Toluidine Blue - O )及四唑指示劑 (Tetraeolium)。此指示劑有助於菌落的計數及確定葡萄球菌耐熱核酸酶的存在。
耐熱去氧核糖核酸（deoxyribonulcas Dnase）為產毒金葡菌之典型特徵，此酶非常耐熱，在100℃加熱30min，不易喪失活性，在130℃之下，其D值為16.6min，此酶之分子量為16800，等電點PH為9.6,耐熱去氧核糖酸與檢測血漿凝固酶相似，是一種鑒定金黃色葡萄球菌的方法，在Petrifilm. RSA 檢測片上，耐熱DNA酶反應看起來，呈粉紅色環帶包圍著一個紅色或蘭色的菌落。
Petrifilm.RSA檢測片，必須與Peyrifilm耐熱核酸酶反應片一起使用，單獨使用將不會顯示菌落，因為具有輔助計數菌落的指示劑是在反應片上，而不是在Petrifilm.RSA檢測片上。
Baird-parker + RPF agar，這一培養基中含有豐富的營養成分，其中以氯化鋰代替亞碲酸鉀，使菌落顏色呈黑色，RPF補充有兔血漿和牛纖維蛋白原，以便檢測凝固酶活力，胰酶可以抑制全部或部分圍繞凝固酶陽性菌落周圍沉澱暈環纖維蛋白的溶解，因此凡存在血漿凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌，將在培養基中呈現有暈環的黑色菌落，即可確認，並作計數。

實驗實施
材料和方法：
本次實驗採用以下3種試劑：
1. 美國3M公司提供的Petrifilm. Rapid. S. aureus Count Plate.
2. 法國生物~梅里埃公司提供的Baird-Parker + RPF agar .
3. 實驗室自配Baird-Park瓊脂（英國Oxoid）及新鮮兔血漿。

菌種來自美國菌種保存中心（America TyP Culture Collection）。金黃色葡萄球菌共10株菌株，其菌號分別為：
ATCC 27661 ATCC 27664 ATCC 13565 ATCC 51704
ATCC(K) 12600 ATCC(R) 65389 ATCC 25923 ATCC 29213
ATCC 8095 ATCC 12598
非金黃色葡萄球菌菌種5株，其菌號分別為：
ATCC 51813 （大腸桿菌）、ATCC 624 （無乳鏈球菌）、ATCC 51816 （陰溝腸桿菌）、ATCC 6051 （枯草桿菌）、ATCC 49214 （腸炎沙門氏菌）、自然食品檢樣，任意購自市場。
本次實驗是以同一測試樣品經均質並通過無菌生理鹽水作10倍遞增稀釋後取1至2個稀釋度同時接種上述三種培養基作平行實驗，在取得最終結果後相互進行比對。
上述三種培養基的接種方法是按生產商所提供的使用說明進行操作，另外Baird-Parker Agar 培養基是按SN0172-92標准進行操作。
A、 本次實驗共測試已知標准菌種共15株，其中葡萄球菌10株，其他菌種5株（包括大腸桿菌、陰溝腸桿菌、腸炎沙門氏菌、枯草桿菌和無乳鏈球菌）。
B、 測試自然食品檢樣共101隻（其中包括肉11隻、肉類14隻、水產品17隻、牛奶25隻、蔬菜22隻、豆製品12隻）。

結果：
A、 被檢菌種10株，金黃色葡萄球菌在三種培養基上都能檢出生長情況良好，同一稀釋度的菌液，除個別菌株外在3種培養基計數檢測結果基本都在一個數量級上，無顯著差異。而5株非金黃色葡萄球菌的菌株在三種培養基上全部不能生長。
B、 自然食品檢樣共接種101隻，每一檢樣同一稀釋濃度分別同時種三種培養基，最終共檢出金黃色葡萄球菌45隻，佔全部檢樣的44.5％，其中Petrifilm RSA 檢出陽性結果為42隻，佔全部陽性檢樣的93.3％，Baird-Parker＋RPF Agar. 檢出陽性結果26隻，佔全部陽性檢樣的57.7％。Baird-Parker. Agar 檢出陽性結果32隻，佔全部陽性檢樣的71.1％。

討論
1. 用15株標准菌在3種培養基中的檢測，10株金黃色葡萄球菌以同一濃度接種，結果生長良好，其最終計數基本一致，定位在同一數量級，5株非金黃色葡萄球菌接種上述三種培養基全部不長，說明上述三種培養基對金黃色葡萄球菌選擇良好。
2. 以101隻自然樣品同一均質稀釋液，同時接種三種培養基，從最終結果來看，對金黃色葡萄球菌的陽性檢出率為44.5％
3. 從檢測程序來年，Petrifilm. RSA及Baird-Parker＋RPF. Agar. 都在樣品接種後28~30h觀察結果，並不必再做證實試驗，而如以Baird-Parker Agar檢測，須在接種後48h觀察平板，並挑取可疑菌落轉種到營養肉湯中，在經18-24h後做血漿凝固酶或耐熱DNA酶試驗進行證實，最終計數，前後約須80h。
4. 從本次試驗中觀察，使用上述三種培養基對食品中金黃色葡萄球菌含量的直接計數檢測，其樣品接種液的含量擬控制在100個/ml以內，比較容易分清並計數，如菌量過濃，則將會影響最後的讀數，因此對新送的被檢樣品，如在不了解污染的情況下一般必須要做2個以上的稀釋度，同時分別接種，才能獲得較為滿意的結果。
而在Baird-Parker＋RPF Agar及Baird-Parker. Agar接種時必須將1ml樣液作三隻平板塗布（0.3、0.3、0.4ml）這樣就會造成手續繁瑣試劑消耗較大，但Baird-Parker. RPF. 培養基也可以1ml樣液作傾注培養，並作計數。
5. 在整個測試過程中，我們發現，按使用說明對Petrifilm. RSA. 及Barid-Parker＋RPF. Agar，操作規定在接種24h後觀察結果，此時往往由於菌落長得經較小，特徵瓜不明顯，但如果繼續放置一夜以後金葡萄菌落特徵明顯，並可能會經第一天觀察數量有所增加，這樣可以提高檢測結果的可信度。
6. 由於對上述兩種培養基的試用期間我們尚未獲得供應商的報價，故無法測算每一樣品的測試成本價格。但可以予計上述兩面種快速檢測培養基的耗材費用要高於常規經典方法（Baird-Parker Agar）的費用。
7. 通過本次實驗，我們感到使用美國3M公司生產的Petrifilm. RSA Plate培養基和法國生物－梅利埃公司生產的Baird-Parker RPF. Agar培養基檢測中的金黃色葡萄球菌。可以比目前常規檢測方法時間可縮短一半。並可以明顯節省大量人力。這完全符合實驗室快速檢測的要求，尤其是對基層較簡陋的實驗室條件中，更顯其使用方便的優越性。

5. 金黃色葡萄球菌有哪些檢查方式

（1）血漿凝固酶試驗：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產生的，與其致病力有關的一種侵襲性酶，其作用是使血漿中的纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細胞的吞噬。血漿凝固酶分為結合型和游離型。前者結合在細菌的細胞壁上，能直接作用於血漿中的纖維蛋白原，使之轉化為纖維蛋白，環繞菌體而形成凝塊。而游離型血漿凝固酶則在產生後被分泌到菌體外，不能直接作用於纖維蛋白原，但可以激活血漿凝血酶原，使之轉化成凝血酶，後者再作用於纖維蛋白原使其轉化為纖維蛋白。具體的測量方法也因此分為玻片法和試管法兩種。
玻片法將待試菌落乳化於玻片上的鹽水中，經10~20S證實無自凝後，用接種環取人或兔血漿一環，與乳化菌液混合，出現凝集者為陽性，另設生理鹽水為陰性對照。
試管法吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時培養物充分混勻，置37℃培養，每隔半小時觀察一次，連續觀察6小時，出現緩讓爛凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內容物不流動，判為陽性。

（2）耐熱核酸酶試驗：將24小時肉湯培養物沸水浴處理15min，用接種環劃線刺種於甲苯胺蘭-DNA平板，35℃培養24小時，在刺種線周圍出現淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。

（3）甘露醇發酵實驗金黃色葡萄球菌可發酵甘露醇。

（4）Staphaurex 膠乳凝集實滑仔驗是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡便的商品化直接凝集試擾漏驗。其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，然後用接種環挑取待鑒定菌株的新鮮培養物加入混勻，若出現凝集塊現象即為陽性。

5. 生化鑒定如上述，注意與其他凝固酶陽性的葡萄球菌的鑒別要點：PYR（吡咯烷酮-β-萘基醯胺試驗陰性；VP試驗陽性；鳥氨酸脫羧酶試驗陰性。

6. 免疫學方法用酶聯免疫吸附試驗和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌的磷壁酸抗體。

7. 分子生物學方法包括PFGE脈沖場凝膠電泳以及酶切圖譜分析等。

6. 如何鑒別致病性葡萄球菌與非致病性葡萄球菌

致病性與非致病性，從染色上很難區分，只能通過血漿凝固實驗才能區分，致病性的能夠凝固血漿。

致病性金葡菌首先要凝固酶陽性，其次可以嘗試利用血平板做皮團實驗，一般有致病性的金葡菌為完全溶血，也稱為β溶血。

葡萄球菌分為致病性葡萄球菌與非致病的表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌。很多細菌具有鹼基序列，即DNA序列。

金黃色葡萄球菌的核酸酶具有耐熱性，經100℃水浴15min不被破壞。把 色素、溶血、血漿凝固酶、耐熱核酸酶、甘露醇厭氧產酸等作為鑒別三種菌的依據，其中血漿凝固酶、耐熱核酸酶是最重要的鑒定指標。

(6)金葡菌檢測的方法擴展閱讀：

葡萄球菌是最常見的化膿性球菌，是醫院交叉感染的重要來源，菌體直徑約0.8μm，小球形，但在液體培養基的幼期培養中，常常分散，細菌細胞單獨存在。

凝固酶有兩種：

一種是分泌至菌體外的，稱為游離凝固酶為蛋白質。作用類似凝血酶原物質，可被人或兔血漿中的協同因子激活變成凝血酶樣物質後，使液態的纖維蛋白原變成固態的纖維蛋白，從而使血漿凝固。

另一種凝固酶結合於菌體表面並不釋放，稱為結合凝固酶或凝聚因子，在該菌株的表面起纖維蛋白原的特異受體作用，細菌混懸於人或兔血漿中時，纖維蛋白原與菌體受體交聯而困液使細菌凝聚。游汪握物離凝固酶採用試管法檢測，結合凝固酶則以玻片法測試。

7. 求金黃色葡萄球菌檢驗

金黃色葡萄球菌檢驗
1
目的
1.1
了解金黃色葡萄球菌檢驗原理
1.2
掌握金黃色葡萄球菌鑒定要點和檢驗方法
2
原理
葡萄球菌在自然界分布極廣，空氣、土壤、水、飼料、食品(剩飯、糕點、牛奶、肉品等)以及人和動物的體表粘膜等處均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黃色葡萄球菌是葡萄球菌屬一個種。可引起皮膚組織炎症，還能產生腸毒素。如果在食品中大量生長繁殖，產生毒素，人誤食了含有毒素的食品，就會發生食物中毒，故食品中存在金黃色葡萄球菌對人的健康是一種潛在危險，檢查食品中金黃色葡萄球菌及數量具有實際意義。
金黃色葡萄球菌能產生凝固酶，使血漿凝固，多數致病菌株能產生溶血毒素，使血瓊脂平板菌落周圍出現溶血環，在試管中出現溶血反應。這些是鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標。
3
材料
3.1
樣品
奶、肉、蛋、魚製品和飲料等。
3.2
菌種
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus
aureus）
藤黃八疊球菌（Sarcina
lutea）
3.3
培養基與試劑
7.5%氯化鈉肉湯、血瓊脂平板、Baird-parker氏培養基、無菌鹽水、兔血漿、革蘭氏染色液。
3.4
其它
顯微鏡、溫箱、離心機、無菌吸管、無菌試管、
無菌平皿、均質器、
載玻片、L型塗布棒、酒精燈、接種環等。
4
流程
5
步驟
5.1
一般培養
稱取25g固體樣品，加入225mL無菌生理鹽水，製成混懸液(液體樣品可不稀釋)。吸取5mL上述混懸液，接種於7.5%氯化鈉肉湯或胰酪腖大豆肉湯50mL培養基內，同時挑取混懸液或液體樣品直接在血平板和Baird-Parker平板劃線分離。同時將對照菌種在上述兩種平板上作劃線分離接種。置36±1℃溫箱培養24h。
5.2
分純培養
將上述血平板和Baird-Parker平板上挑取可疑菌落,先觀察對照的菌落特徵,再觀察被檢樣品的菌落.,並挑取可疑菌落在血平板上進行分離純化。若無菌落生長，可用也增菌培養物在上上述平板上劃線分離，在36±1℃溫箱培養24h後再分離純化，挑取可疑菌落及對照菌種進行革蘭氏染色及血漿凝固酶試驗。
5.3
形態特徵
本菌為革蘭氏陽性球菌，排列是葡萄狀，無芽孢，無莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑約為0.5～1um。
在肉湯中呈混濁生長，在胰酪腖大豆肉湯內有時液體澄清，菌量多時呈混濁生長，血平板菌落呈金黃色，也有時呈白色，大而突起、圓形、不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。在Baird-Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤、直徑2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度。偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或乾燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產生的黑色較淡些，外觀可能粗糙並乾燥。
5.5血漿凝固酶試驗
挑取上述可疑菌落菌種於肉浸液肉湯，同時將金黃色葡萄球菌和藤黃八疊球菌分別接種於肉浸液肉湯，在36±1℃溫箱培養24h後進行血漿凝固酶試驗。
吸取1∶4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養基0.5mL，振盪搖勻，放在36℃溫箱或水浴內，每0.5h觀察一次，觀察6h，如呈現凝固，即將試管傾斜或倒置時，呈現凝塊者，被認為是陽性結果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照。
6
結果
根據形態染色，血平板情況以及血漿凝固酶試驗，判別檢樣有否金黃色葡萄球菌。
7
思考
7.1
金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上的菌落特徵如何？為什麼？
7.2
鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標是什麼？

8. 目前檢測金葡萄球菌的快速檢測方法有哪些

有測試試紙的。
金黃色葡萄球菌測試片
金黃色葡萄球菌(簡稱金葡菌)是人類最常見的致病菌之一，其侵襲力很強，能產生多種致病物質如：腸毒素、凝固酶等；可引起化膿性炎含肢症、黴素性疾病及葡萄球菌性腸炎。在自然界中普遍存在，食品受其污染的機會很多，人誤食了含有黴素的食品，就會發生食物中毒，已成為世界性的公共衛生問題。我國每年金葡菌引起的食物中毒事件屢有報道，在細菌性食物中毒事件中僅次於沙門氏菌和副溶血弧菌引起的食物中毒，對人的健康是一種潛在危險，檢查食品中金黃色葡萄球菌及數量具有實際意義。
傳統菌檢測法全程需4－7天，才能得出明確的診斷結果，且操作繁瑣，效率底，很難適應現代化需要。本產品採用法國先進可靠的選擇性顯色培養基作為主要原料，通過在選擇性培養基中加入專一性的酶顯色劑，運用微生物測試片專有技術，做成一次性快速檢驗產品，一步培養15－24小時就可確定出病原菌的存在，大大地簡化了檢驗程序。
該法對提高食品衛生監督檢測系統對食物中毒病原菌的快速檢測，增強政府和行政衛生部門對食源性疾病的監測能力、預警能力和對突發事件的反應能力，在應對細菌性食物中毒突發公共衛生事件中具有重要的意義。
使用方法：

1.A、食品樣品處理：按無菌操作取25g(ml)樣品,加入225ml滅菌生理鹽水中，固體樣品研磨或置均質器中製成賣檔混懸液,靜置片刻。
B、人體的樣品處理：取從業人員體檢肛拭或粘有病人糞便的棉簽放入5ml7.5%NaCL肉湯中,37℃培養6小時，配製增菌液。
2、 樣品接種：將測試片水平放在檯面上，揭開上蓋膜，用滅菌吸管吸取0.5ml 樣品上清夜或增菌液，均勻加到中間的濾紙片上，然後輕輕將上蓋膜放下，靜置5分鍾。
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3、 培養：將加了樣品的測試片每6-8片疊放在一起,放入原來的自封袋中，平放在37℃培養箱內培養15-24小時。

4、 結果觀察：對測試紙片進行觀察，呈紫紅色的菌談配世落為金黃色葡萄球菌；呈藍色的菌落為其他大腸菌落。